按壓對(duì)大鼠肌筋膜激痛點(diǎn)軟組織張力的影響及其作用機(jī)制研究*

蔣全睿 吳 瓊 匡小霞 危 威 江玉婷 袁 媛 李 武△ 李江山△

（1 湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，長(zhǎng)沙 410208；2 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院中醫(yī)科，衡陽(yáng)421000）

肌筋膜激痛點(diǎn) (myofascial trigger point, MTrP) 可導(dǎo)致多個(gè)感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)和自主神經(jīng)癥狀，其臨床體征和癥狀包括肌肉緊張帶、壓痛敏感點(diǎn)、牽涉痛、活動(dòng)障礙、感覺(jué)異常和自主神經(jīng)癥狀等，還可能伴有失眠、乏力、情緒障礙等癥狀[1]。在頸部或肩部疾病病人中，激痛點(diǎn)的檢出率較高[2]，臨床病人中激痛點(diǎn)檢出率可高達(dá)90%[3]，病人生活質(zhì)量差，疼痛程度、抑郁狀態(tài)、睡眠質(zhì)量均為影響其生活質(zhì)量的重要因素，導(dǎo)致了大量醫(yī)療資源和社會(huì)資源的占用[4]。

物理治療為解除激痛點(diǎn)的主要治療方法，可有效滅活激痛點(diǎn)緩解疼痛。例如缺血性按壓、推拿按法等手法刺激是臨床緩解激痛點(diǎn)疼痛常用的方法[5]，但是按壓的效應(yīng)機(jī)制尚不明確。目前認(rèn)為激痛點(diǎn)的病理與運(yùn)動(dòng)終板功能異常、乙酰膽堿 (acetylcholine,Ach) 堆積、局部循環(huán)與能量代謝障礙、中樞敏化等多個(gè)環(huán)節(jié)有關(guān)[6,7]，ACh 堆積和細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增高是導(dǎo)致肌節(jié)攣縮形成激痛點(diǎn)的重要因素，而二氫吡啶受體 (dihydropyridine receptor, DHPR) 和利若丁受體 (ryanodine receptor, RyR)可以調(diào)節(jié)胞內(nèi)Ca2+濃度進(jìn)而影響肌肉收縮和舒張過(guò)程[8]。那么，按壓對(duì)激痛點(diǎn)的影響是否與調(diào)節(jié)DHPR、RyR、Ca2+和ACh 水平有關(guān)呢？本研究擬觀(guān)察大鼠激痛點(diǎn)軟組織張力、DHPR、RyR、乙酰膽堿酯酶 (acetylcholineesterase, AChE)、游離Ca2+、降鈣素基因相關(guān)肽 (calcitonin gene-related peptide, CGRP) 和P 物質(zhì)水平，并與陽(yáng)性對(duì)照注射利多卡因組進(jìn)行比較，探索按壓對(duì)大鼠激痛點(diǎn)軟組織張力的影響及其可能的機(jī)制。

方 法

1.動(dòng)物與分組

健康成年雄性SD 大鼠，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，SPF 級(jí)，許可證號(hào)：scxk（湘）2019-0009，體重250～280 g，每籠3 只，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)環(huán)境溫度24～26℃，濕度50%～70%，12 h 光照交替明暗循環(huán)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中食物和飲用水按需提供。涉及動(dòng)物及其管理的實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)批準(zhǔn)和執(zhí)行。采用隨機(jī)數(shù)字表法將48 只SD大鼠隨機(jī)分為4 組，空白組（不予任何處理，正常飼養(yǎng)）、模型組（造模處理，不進(jìn)行任何干預(yù)治療）、利多卡因組（造模處理 + 局部注射利多卡因治療）和按壓組（造模處理 + 局部按壓治療），每組12 只。

2. 造模方法

參考黃強(qiáng)民等[9]改良并證實(shí)的離心運(yùn)動(dòng)結(jié)合鈍性打擊造模方法，造模分為處理期8 周和恢復(fù)期4周。參與造模的大鼠在造模前需適應(yīng)性飼養(yǎng)7 天以適應(yīng)環(huán)境減少應(yīng)激反應(yīng)。在此期間，大鼠在實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)跑臺(tái)訓(xùn)練：設(shè)置坡度0°，速度每分鐘16 m，每次 15 min，2 天1 次，共3 次。

處理期每周第1 天進(jìn)行鈍性打擊：采用異氟烷麻醉大鼠，然后將大鼠仰臥位固定于打擊器底端，由一位有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)師對(duì)大鼠進(jìn)行左側(cè)股內(nèi)側(cè)肌肌腹位置觸診并標(biāo)記。打擊器的鈍性木棒從約20 cm 高度處落下，打擊標(biāo)記位置。第2 天進(jìn)行離心跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)：設(shè)置坡度-16°，速度每分鐘16 m，每次90 min，每周1 次，共8 次。并通過(guò)機(jī)械和聲音刺激驅(qū)趕大鼠，保證其完成90 min 的離心運(yùn)動(dòng)。其余時(shí)間正常喂養(yǎng)，不作任何干預(yù)。恢復(fù)期共計(jì)4 周，不進(jìn)行任何干預(yù)，每天正常喂養(yǎng)。

造模評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：觸診和肌電圖檢查。大鼠異氟烷呼吸麻醉后仰臥位固定在操作臺(tái)上。一位經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床醫(yī)師用拇指或示指的指腹在左側(cè)股內(nèi)側(cè)肌上進(jìn)行觸摸，觸及肌肉收縮結(jié)節(jié)或緊張帶，用指甲刮彈可誘發(fā)局部抽搐，將其標(biāo)記，并認(rèn)定為激痛點(diǎn)區(qū)域。在激痛點(diǎn)區(qū)域（空白組在股內(nèi)側(cè)肌中部）插入記錄電極，在右側(cè)股內(nèi)側(cè)肌中部插入?yún)⒖茧姌O，記錄肌電圖1 min（MP150, BIOPAC Systems, Inc, 北京）。參與造模大鼠觸診和肌電圖出現(xiàn)特征性變化（觸診可觸及肌肉緊張帶或收縮結(jié)節(jié)，指甲刮彈可誘發(fā)局部抽搐，肌電圖可見(jiàn)低振幅、噪聲樣的自發(fā)電活動(dòng)和間歇性高振幅棘波）視為造模成功[10]，否則排除不納入實(shí)驗(yàn)組。

3. 干預(yù)方法

（1）空白組：不造模且不進(jìn)行干預(yù)，僅正常飼養(yǎng)；（2）模型組：造模后不進(jìn)行干預(yù)；（3）利多卡因組：模型制備后對(duì)大腿激痛點(diǎn)局部注射利多卡因溶液（大腿內(nèi)側(cè)碘伏涂抹，用 1 ml 注射器向激痛點(diǎn)內(nèi)注射 1%利多卡因0.5 ml ，6 天1 次，治療3 次，治療的時(shí)間點(diǎn)為造模后第1、7、13 天）；（4）按壓組：模型制備后對(duì)大腿激痛點(diǎn)局部進(jìn)行按壓治療，異氟烷呼吸麻醉并維持麻醉，仰臥位固定，選用自制的按壓刺激儀器（專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?201720875963.5）對(duì)激痛點(diǎn)緊張帶的區(qū)域進(jìn)行按壓操作，按壓參數(shù)參考前期實(shí)驗(yàn)[11]：力量設(shè)置0.7 kg，方向垂直向下，每次按壓持續(xù)時(shí)間6 s，按壓隔天1 次，每次 7.5 min，治療7 次，治療的時(shí)間點(diǎn)為造模后第 1、3、5、7、9、11、13 天。

4. 指標(biāo)評(píng)估

（1）軟組織張力檢查：所有大鼠在造模后和干預(yù)后進(jìn)行軟組織張力檢查：大鼠異氟烷呼吸麻醉后仰臥位固定在操作臺(tái)上，一位經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床醫(yī)師用拇指或示指指腹在左側(cè)股內(nèi)側(cè)肌激痛點(diǎn)標(biāo)記處進(jìn)行觸摸，觸到肌肉收縮結(jié)節(jié)或誘發(fā)局部抽搐將其認(rèn)定為可能的激痛點(diǎn)。以軟組織張力測(cè)定儀（JZL-III型，天津明通世紀(jì)科技有限公司，天津）測(cè)定激痛點(diǎn)軟組織張力：調(diào)試儀器，將檢測(cè)頭對(duì)準(zhǔn)標(biāo)記的激痛點(diǎn)區(qū)域，垂直均勻用力按壓，按壓需要約3 s，然后均勻撤力，需要約3 s。檢測(cè)系統(tǒng)自動(dòng)記錄加載和卸載時(shí)的力量-位移曲線(xiàn)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。參照儀器說(shuō)明書(shū)和本課題組前期研究，取曲線(xiàn)中0.2 kg對(duì)應(yīng)位移D0.2kg作為觀(guān)察指標(biāo)可以較好地反應(yīng)大鼠肌肉軟組織張力情況。

（2）Western Blot 檢測(cè)組織中DHPRα1、RyR和AChE 含量：最后一次軟組織張力檢查后，處死大鼠取激痛點(diǎn)局部樣本。取組織樣本充分剪碎，加入裂解液(20 mg:200 μl)均漿裂解。1 2000 r/min 離心15 min，取上清液，用BCA 進(jìn)行蛋白定量。根據(jù)蛋白定量結(jié)果加入適量緩沖液，沸水浴10 min 后離心取上清上樣，每孔加20 μg 上樣液或10 μg 預(yù)染Marker。分離膠120 V，50 min，當(dāng)染料到達(dá)膠底部時(shí)終止電泳，采用濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜，三明治的排列為：濾紙/膠/膜/濾紙。膜的封閉及抗體孵育：5%脫脂奶粉封閉，4℃過(guò)夜；一抗：抗體加入封閉液中稀釋到目標(biāo)濃度，室溫孵育1 h；二抗：按照1:1 0000比例稀釋HRP 標(biāo)記的二抗，室溫孵育1 h。每次抗體孵育后用PBST 洗滌3 次，每次5 min。將膜放置在暗室中，取適量 ECL 發(fā)光液A 與B 等量混勻均勻滴加。然后置于自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)，以TANON GIS 軟件讀取相關(guān)條帶灰度值并利用目的蛋白/β-actin 求得蛋白相對(duì)表達(dá)量。

（3）免疫組化法檢測(cè)P 物質(zhì)和降鈣素基因相關(guān)肽含量：樣本常規(guī)固定包埋切片脫蠟至水。3%H2O2室溫孵育10 min。水洗后加入0.01 M 檸檬酸鹽緩沖液 (pH6.0)，在微波爐中處理10 min，降至室溫后用PBS 沖洗。滴加5%BSA 封固，37℃孵育30 min 傾去血清。載玻片滴加一抗，兔抗SP (1:500; abcam)或兔抗CGRP (1:200; abcam) 孵育過(guò)夜(4℃)，PBS沖洗。然后滴加適量生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30 min，PBS 沖洗3 次。滴加SABC，37℃反應(yīng)30 min，PBS 沖洗。滴加DAB 試劑，室溫下顯色，顯微鏡下控制反應(yīng)時(shí)間10 min，用水洗滌。蘇木精復(fù)染，脫水、透明，封片。

光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察使用HALO 分析軟件進(jìn)行分析：設(shè)置好切片組織區(qū)域。應(yīng)用Indica Labs-Multiplex IHC 模塊設(shè)置Stain1 為藍(lán)色陰性細(xì)胞，Stain2為以核為中心識(shí)別棕黃色陽(yáng)性細(xì)胞。設(shè)置完成后自動(dòng)識(shí)別組織切片上測(cè)量區(qū)域內(nèi)所有的陰性細(xì)胞以及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，求出陽(yáng)性細(xì)胞百分比（陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%）即為陽(yáng)性率(%)。以陽(yáng)性率為組織表達(dá)水平的定量指標(biāo)。

（4）比色法檢測(cè)Ca2+含量：取樣勻漿離心后提取上清液，保存于-80℃超低溫冰箱中待測(cè)，用鈣測(cè)試盒按說(shuō)明書(shū)步驟，以甲基百里香酚藍(lán)比色法檢測(cè)Ca2+含量。

5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0 for windows 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (±SD)表示，用單因素方差分析分析，方差齊時(shí)以L(fǎng)SD 法和SNK-q 法多重比較，方差不齊時(shí)用Dunnett T3 檢驗(yàn)。以P < 0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.激痛點(diǎn)造模情況

表1 所示為激痛點(diǎn)造模完成情況，在觸診以及肌電圖檢查期間，空白組大鼠因麻醉意外死亡4 只；模型組大鼠觸診和肌電圖檢查均為陽(yáng)性（出現(xiàn)特征性變化）；利多卡因組2 只大鼠觸診和肌電圖均為陰性，排除；按壓組1 只大鼠觸診和肌電圖均為陰性，排除。最終納入實(shí)驗(yàn)的大鼠為空白組8 只，模型組12 只，利多卡因組10 只，按壓組11 只。

2. 大鼠激痛點(diǎn)軟組織張力檢查

表2 所示為：①干預(yù)前：與空白組相比，模型組、利多卡因組和按壓組在0.2 kg 下位移D0.2kg均降低(P < 0.05)，提示造模后大鼠激痛點(diǎn)軟組織張力升高；②干預(yù)后：與干預(yù)前相比，利多卡因組和按壓組D0.2kg升高(P < 0.05)；與模型組相比，利多卡因組和按壓組D0.2kg升高，提示經(jīng)過(guò)利多卡因注射或按壓干預(yù)，大鼠激痛點(diǎn)軟組織張力降低；③干預(yù)前后差值比較：利多卡因組和按壓組干預(yù)前后D0.2kg差值高于模型組(P < 0.05)，但利多卡因組和按壓組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示注射利多卡因和按壓對(duì)改善大鼠激痛點(diǎn)軟組織張力效果無(wú)明顯差異。

表2 各組大鼠軟組織張力D0.2kg 比較 (mm,±SD)Table 2 Comparison of soft tissue tension D0.2kg in each group (mm,±SD)

表2 各組大鼠軟組織張力D0.2kg 比較 (mm,±SD)Table 2 Comparison of soft tissue tension D0.2kg in each group (mm,±SD)

△P < 0.05，與空白組相比；#P < 0.05，與模型組相比；*P < 0.05，與干預(yù)前相比；△P < 0.05, compared with the group blank; #P < 0.05,compared with the group model; *P < 0.05, compared with pre-intervention.

組別Group例數(shù)(n)Number干預(yù)前Pre-intervention干預(yù)后After intervention差值Difference空白組Blank group 8 2.930±0.134 2.935±0.114 0.005±0.107模型組Model group 12 2.182±0.529△ 2.175±0.322△ -0.007±0.217利多卡因組Lidocaine group 10 2.292±0.154△ 2.686±0.260*# 0.394±0.202#按壓組Press group 11 2.320±0.259△ 2.757±0.215*# 0.437±0.287#

3.大鼠激痛點(diǎn)DHPRα1、RyR 和AChE 含量

與空白組相比，模型組DHPRα1、RyR 和AChE含量降低(P < 0.05)；與模型組相比，利多卡因組和按壓組DHPRα1、RyR 及AChE 含量升高(P < 0.05)；利多卡因組和按壓組相比，DHPRα1、RyR 及AChE含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上提示造模后大鼠激痛點(diǎn)DHPRα1 和RyR 含量降低，干預(yù)后升高（見(jiàn)圖1）。

圖1 各組大鼠激痛點(diǎn)組織RyR、DHPRα1 和AChE 相對(duì)表達(dá)值(A) WB蛋白印跡；(B)各組RyR表達(dá)量；(C)各組DHPRα1 表達(dá)量；(D) 各組AChE 表達(dá)量△P <0.05，與空白組相比；#P<0.05，與模型組相比Fig. 1 The expression of RyR, DHPRα1, and AChE in the MTrP tissues(A) Western blot bands; (B) RyR expression in each group; (C) DHPRα1 expression in each group; (D) AChE expression ineachgroup.△P <0.05,compared with the group blank; #P < 0.05, compared with the group model.

表1 各組大鼠造模階段后觸診、肌電圖情況比較(n = 12)Table 1 Comparison of palpation and electromyography in each group after modeling stage (n = 12)

4. 大鼠激痛點(diǎn)Ca2+含量

與空白組相比，模型組Ca2+含量增加(P < 0.05)；與模型組相比，利多卡因組和按壓組Ca2+含量減少(P < 0.05)；利多卡因組和按壓組相比，Ca2+含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上提示激痛點(diǎn)組織局部Ca2+含量上升，干預(yù)后下降（見(jiàn)圖2）。

5. 大鼠激痛點(diǎn)P 物質(zhì)和CGRP 表達(dá)情況

與空白組相比，模型組P 物質(zhì)與CGRP 陽(yáng)性細(xì)胞率增加(P < 0.05)；與模型組相比，利多卡因組和按壓組P 物質(zhì)與CGRP 陽(yáng)性細(xì)胞率減少(P < 0.05)；利多卡因組和按壓組相比，P 物質(zhì)與CGRP 陽(yáng)性細(xì)胞率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上提示激痛點(diǎn)組織局部P 物質(zhì)與CGRP 高表達(dá)，干預(yù)后下降（見(jiàn)圖3、4）。

討 論

圖2 各組大鼠激痛點(diǎn)組織Ca2+含量△P < 0.05，與空白組相比；#P < 0.05，與模型組相比Fig. 2 The content of Ca2+ in the MTrP tissue△P < 0.05, compared with the blank group; #P < 0.05,compared with the group model.

大量臨床報(bào)道證實(shí)，激痛點(diǎn)注射可用于治療多種以疼痛為特征的肌肉、骨骼和神經(jīng)疾病[12]。研究表明，利多卡因能夠改善骨骼肌的缺血-再灌注損傷，其機(jī)制與調(diào)控Ca2+通道降低胞內(nèi)Ca2+濃度、減輕炎性反應(yīng)和氧自由基等有關(guān)[13]，因此本實(shí)驗(yàn)選擇激痛點(diǎn)局部注射利多卡因作為陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)中觀(guān)察到大鼠慢性激痛點(diǎn)造模后，激痛點(diǎn)局部軟組織張力增加，P 物質(zhì)與CGRP 含量增高，AChE 含量降低，DHPRα1 與RyR 含量降低，游離Ca2+含量增加，提示激痛點(diǎn)局部肌節(jié)攣縮可能由AChE 降低，DHPRα1 與RyR 功能受損導(dǎo)致；注射利多卡因和按壓均有改善這些病理狀態(tài)的作用(P < 0.05)，且兩者無(wú)顯著性差異(P > 0.05)，表明本實(shí)驗(yàn)采用按壓刺激器進(jìn)行按壓干預(yù)對(duì)激痛點(diǎn)的影響與陽(yáng)性對(duì)照利多卡因注射相似。

圖3 各組大鼠激痛點(diǎn)組織P 物質(zhì)免疫組化檢測(cè)(A) 空白組；(B) 模型組；(C) 利多卡因組；(D) 按壓組△P < 0.05，與空白組相比；#P < 0.05，與模型組相比Fig. 3 The percentage of substance P positive cells in the MTrP tissue(A) Blank group; (B) Model group; (C) Lidocaine group; (D) Press group△ P < 0.05, compared with the group blank; #P < 0.05, compared with the group model.

圖4 各組大鼠激痛點(diǎn)組織CGRP 免疫組化檢測(cè)(A) 空白組；(B) 模型組；(C) 利多卡因組；(D) 按壓組△P < 0.05，與空白組相比；#P < 0.05，與模型組相比Fig. 4 The percentage of substance P and CGRP positive cells in the MTrP tissue(A) Blank group; (B) Model group; (C) Lidocaine group; (D) Press group△P < 0.05, compared with the group blank; #P < 0.05, compared with the group model.

根據(jù)激痛點(diǎn)形成機(jī)制的“綜合學(xué)說(shuō)”[14]，急慢性損傷導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)終板功能異常，ACh 過(guò)度釋放，肌纖維膜去極化誘發(fā)肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+釋放。胞漿內(nèi)高水平的Ca2+導(dǎo)致肌節(jié)持續(xù)痙攣、壓迫血管、局部微循環(huán)障礙、供血供氧減少，最終導(dǎo)致局部能量危機(jī)。肌漿網(wǎng)缺少ATP 重吸收Ca2+從而維持高水平Ca2+含量。大量致痛物質(zhì)釋放刺激神經(jīng)末梢產(chǎn)生疼痛。此外，激痛點(diǎn)組織缺氧，細(xì)胞液pH 酸化，促使CGRP 釋放，進(jìn)而促使ACh 大量釋放并且抑制AChE，使ACh 大量堆積[15]。因此，ACh 異常增加和胞內(nèi)Ca2+增高是激痛點(diǎn)產(chǎn)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。肌肉收縮時(shí)，神經(jīng)肌肉接頭負(fù)責(zé)將神經(jīng)沖動(dòng)傳遞給骨骼肌。當(dāng)動(dòng)作電位到達(dá)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的突觸前末端時(shí)，ACh 從末梢釋放到突觸間隙并擴(kuò)散到后膜，與其受體結(jié)合使肌肉纖維去極化[16]。AChE 能水解ACh，阻止對(duì)突觸后膜的興奮作用，因此可以間接體現(xiàn)ACh 含量。本研究中，模型組CGRP 水平升高，AChE 水平降低，P 物質(zhì)水平升高，而按壓組或注射利多卡因組CGRP 水平降低，AChE 水平提高，P 物質(zhì)水平降低，這表明按壓對(duì)激痛點(diǎn)的效應(yīng)機(jī)制可能與調(diào)節(jié)CGRP、AChE 和P 物質(zhì)水平進(jìn)而影響ACh 異常釋放有關(guān)。

激痛點(diǎn)形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)的緊張肌帶是由肌纖維收縮形成[17]。肌漿網(wǎng)的DHPR 與RyR 是興奮收縮耦聯(lián)的基礎(chǔ)：DHPR 與RyR 耦聯(lián)，在感受到膜表面或T 小管去極化時(shí)，DHPR 電壓感受器激活RyR，Ca2+通道開(kāi)放，導(dǎo)致肌漿網(wǎng)上的Ca2+從終池內(nèi)大量釋放，此過(guò)程稱(chēng)為去極化誘導(dǎo)鈣釋放 (depolariza-tion-induced-calcium-release, DICR)。 非 耦 聯(lián) 的RyR 通道被胞內(nèi)Ca2+信號(hào)激活通過(guò)鈣誘導(dǎo)鈣釋放(calcium-induced-calcium-release, CICR) 途徑放大DHPR 和RyR 作用產(chǎn)生的DICR。胞內(nèi)Ca2+釋放致肌肉肌纖維的持續(xù)性收縮。臨床上對(duì)激痛點(diǎn)位置進(jìn)行缺血性按壓可以有效緩解疼痛[18]。細(xì)胞生物力學(xué)的研究表明[19,20]，手法樣刺激可以通過(guò)調(diào)節(jié)鈣離子通道DHPR 與RyR 表達(dá)調(diào)節(jié)胞內(nèi)Ca2+，再通過(guò)Ca2+信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)揮各種生物效應(yīng)。本研究中，模型組DHPRα1 與RyR 水平下降，游離Ca2+水平上升，軟組織張力提高，提示可能由于Ca2+釋放通道DHPRα1/RyR 功能受損，游離Ca2+釋放增加從而加劇肌纖維的收縮；在按壓或注射利多卡因后，DHPRα1/RyR 水平上升，Ca2+水平下降，軟組織張力降低，提示干預(yù)后可能DHPRα1/RyR 功能恢復(fù)，游離Ca2+減少，這表明按壓對(duì)激痛點(diǎn)療效的外周機(jī)制可能與調(diào)控DHPR/RyR 有關(guān)。

綜上所述，本研究以慢性激痛點(diǎn)模型大鼠為研究對(duì)象，按壓為干預(yù)手段，研究結(jié)果表明按壓激痛點(diǎn)可以改善局部軟組織張力，減少疼痛物質(zhì)，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)P 物質(zhì)、CGRP、AChE、DHPR與RyR、游離Ca2+水平等有關(guān)，但尚無(wú)法確定因果性，即按壓通過(guò)DHPR/RyR 調(diào)控胞內(nèi)Ca2+濃度從而促使激痛點(diǎn)攣縮節(jié)舒張，還是按壓促使激痛點(diǎn)攣縮節(jié)舒張進(jìn)而導(dǎo)致DHPR/RyR 恢復(fù)，未來(lái)還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，加入DHPR/RyR 抑制劑和激動(dòng)劑對(duì)照，以判斷DHPR/RyR 是否為按壓對(duì)激痛點(diǎn)作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。