2013-2020年廣西東興市禽流感病毒的監測和分析

曹顯永,鄧佩文,童 彬,曹國敏

（1.廣西壯族自治區東興市動物疫病預防控制中心，廣西 東興 538100；2.廣西壯族自治區防城港市畜牧站，廣西 防城港 538001）

東興市位于廣西壯族自治區南部，與越南的芒街口岸經濟特區僅一河之隔。東興市沿邊、沿江又沿海，中越邊境貿易與民間交往非常頻繁，動物及動物產品流通給邊境動物疫病防控帶來隱患。東興市境內的北侖河口國家級自然保護區是國際間候鳥遷徙的重要通道，是候鳥的重要繁殖地和遷徙停歇地，這也給東興市的禽流感防控帶來了壓力。

多年來，東興市一直是中越邊境重大動物疫病防控阻截帶建設項目實施地，從2013年開始，國家和自治區就在東興市的養殖場、活禽銷售市場和候鳥棲息地開展禽流感監測和流行學調查。現將監測和流行病學調查結果進行分析，以期掌握東興市的禽流感流行狀況。

1 材料與方法

1.1 材料

H1—H16亞型禽流感標準陽性血清由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所提供；RNA提取試劑盒TaKaRa MiniBEST ViralRNA/DNA Extraction KitVer.5.0：購自大連寶生物工程有限公司；禽流感病毒H1～H16亞型核酸檢測試劑盒（熒光PCR 法）：購自上海之江生物科技股份有限公司；SPF雞胚：購自北京梅里亞維通實驗動物技術有限公司。

1.2 樣品采集

2013年12月～2020年10月，在東興市的6個活禽交易市場、10個鴨場和9個雞場以及北侖河口自然保護區，共采集樣品 6161份，其中包括4830份家禽拭子，1331份環境拭子(包含飲水、籠具、地面、污水、野鳥糞便等)。

1.3 病原分離和鑒定

病毒分離和鑒定：在哈爾濱國家禽流感參考試驗室進行。將拭子樣品接種SPF雞胚進行增毒，再用血凝試驗（HA）、血凝抑制試驗（HI）和熒光RT-PCR 方法鑒定流感病毒及亞型。

1.4 統計分析方法

利用 Microsoft Excel軟件對病毒分離率分別按照樣品來源地區、樣品采集時間、樣品采集地點和樣品來源禽類等進行分類統計和分析。

2 結果

2.1 禽流感病毒監測總體情況

從2013年10月到2020年10月份，共進行了25次采樣，共采集樣品6161份，共分離到禽流感病毒796株，陽性率為12.92%，分離到病毒亞型有H1、H3、H4、H6、H7、H9、H10 和 H11 等多種亞型，其中以 H3、H6和H9亞型最多。

2.2 禽流病毒的分布特征

2.2.1 時間分布。東興市一年四季都有病毒循環，10-12月份樣品的陽性率處在一個較高的水平，5-6月份樣品的陽性率較低。詳見圖1。

圖1 東興市AIV時間分布情況

如果按季節區分，春季（1～3月）病毒分離率為9.78%（125/1278），夏季（4～6 月）為 7.77%（126/1622），秋季（7～9 月）為 13.56%（61/450），冬季（10～12 月）為17.22%（484/2811）。夏季的病毒分離率最低，顯著低于冬季。

2.2.2 空間分布。在禽流感監測中，只有在活禽交易和養殖環節檢測到AIV，而在候鳥棲息地沒有檢測到AIV。

在活禽市場分離到763株AIV病毒，陽性率為21.72%，市場場間陽性率為100%(6/6)。市場環境AIV陽性率（30.82%）顯著高于市場中家禽AIV陽性率（20.77%），表明AIV在市場環境中的循環蓄積嚴重。

在養殖場分離到33株病毒，陽性率為2.00%。其中，雞場陽性率為0.13%（1/751），雞場場間陽性率為11.11%（1/9）；鴨場陽性率為 3.56%（32/899），鴨場場間陽性率為60.00%(6/10)。

2.2.3 群間分布。分離出病毒的陽性樣品來源包括：雞、鴨、鵝和環境，水禽樣品的陽性率顯著高于雞(見圖2)，不同種類的家禽分離出禽流感病毒亞型及陽性率有所不同。雞樣品分離到的病毒亞型：H3、H4、H6、H9、H10，陽性率為 7.12%（157/2206）；鴨樣品分離到的病毒亞型：H1、H3、H6、H7、H9、H11 等， 陽性率為32.13%（440/2168）；鵝樣品分離到的病毒亞型：H3、H6、H9 等，陽性率為 21.27%（97/456）。

圖2 東興市AIV群間分布情況

3 討論

根據東興市的禽流感監測結果顯示，活禽銷售市場禽流感病毒陽性率 （21.72%）顯著高于養殖場(2.00%)，這說明活禽銷售市場流感病毒污染嚴重,是禽流感傳播的高風險點。而候鳥棲息地沒有檢出病毒，這是因為采樣偏差，還是如雷富民、趙德龍等[1-2]提出的很難斷定候鳥在禽流感傳播過程中的作用，這需要繼續跟蹤監測和調查。

水禽樣品禽流感樣品陽性率（20.46%）顯著高于雞的陽性率(7.12%),養殖環節分離的AIV幾乎都來源于水禽，而且一些亞型禽流感病毒(如H3、H6)也以水禽來源為主，這表明一些亞型AIV對宿主有一定的偏嗜性，也揭示水禽是流感病毒的重要宿主[3-4]。另外，我們的監測調查結果表明水禽免疫率都相對較低，抗體水平不高，所以水禽在禽流感的傳播過程中是較為主要的傳播宿主[5]，水禽的免疫工作不容忽視。

根據東興市歷年氣象統計數據顯示，12月至次年2月是一年中溫度較低的時期，其中1月份的平均氣溫最低，低溫有利于禽流感病毒的生存。但監測結果顯示，10月和11月份的病毒分離率最高，而且在4月份和9月份也有一個不小的升幅。這幾個月病毒分離率的升高都發生在活禽市場，原因有以下幾點：一是家禽的集中上市。東興市的小規模養殖場（戶）一般都是在4-5月份期間進苗飼養，肉雞養殖150天左右上市，而蛋鴨一般在產蛋期結束后銷往市場；二是節假日消費需求量增大，4月前后有清明節和勞動節，9月份過后有國慶節和中秋節。節日前，百姓往往準備大量的食材，以備歡慶聚餐食用，使得家禽的流通量大增[4]。這幾個月氣溫較低，加之市場不休市、清洗消毒，節日過后市場里的病毒依然存在。這說明氣溫不是決定AIV分布的唯一因素，需要綜合考慮社會、環境和經濟等多方面因素。

4 結論

經過長期系統的監測發現，東興市活禽市場和養殖場均有禽流感病毒循環，多種亞型病毒共存。活禽市場污染嚴重，水禽隱性帶毒現象嚴重，因此活禽市場和水禽養殖場是東興市禽流感防控的關鍵。同時東興市處于邊境和候鳥遷徙線上，地理位置特殊。因此需要對東興市的禽流感防控多加重視，加強針對禽流感的監測力度，提高市場的動物衛生監管，加強水禽的免疫力度。