免疫組化與細胞塊技術在惡性漿膜腔積液分子病理診斷中的應用

鄭娟，徐元成，呂可君

漿膜腔積液是惡性腫瘤患者較為常見的病理表現，也是惡性腫瘤較為常見的轉移部位，對其性質進行判斷十分重要，對患者后續治療方案的確定也有一定的指導意義，因此尋找準確率高的檢測方式具有十分重要的意義[1-2]。既往臨床上較為常見的檢測方式是進行細胞涂片檢查，但是在進行檢測操作過程中由于細胞聚集及結構清晰度不夠、細胞數量少等多種因素的影響，癌細胞與正常細胞容易混淆，檢測準確性不夠[3-4]。進行細胞塊石蠟包埋處理能夠有效減少細胞病理學與組織病理學之間的差異，有效提升臨床檢測的準確性[5]。本研究探討免疫組化與細胞塊技術在惡性漿膜腔積液分子病理診斷中的臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料標本來源為2020年1―12月浙江省永康市第一人民醫院收集的143例漿膜腔積液患者，其中男72例，女71例；標本類型：胸腔積液66例，腹腔積液72例，心包液5例。所有患者均符合《漿膜腔積液細胞病理學診斷》的診斷標準[6]，對本研究均知情同意，并積極配合相關檢查。

1.2 方法

1.2.1 細胞涂片將20～40 ml的漿膜腔積液標本分別置于4支離心試管中，使用湘儀TDZ5-WS多管架自動平衡離心機以2 500 r/min的速度進行高速離心5 min后，將上層清液棄去后向離心管中加入20 ml含10%的中性甲醛，將離心試管置于震蕩儀中震蕩10 min，重復上述離心處理操作，將4支試管中的沉淀物取出，將其均勻涂在載玻片上，使用95%的乙醇進行固定30 min后行HE染色。

1.2.2 細胞塊制作在室溫環境下將20 ml膜腔積液標本固定20 min，將其放置到尖底離心試管中，將試管底層的10 ml標本進行5 000 r/min離心處理5 min，棄去上層清液后向下層沉淀物中加入10%的中性甲醛5 ml，進行充分混勻后在室溫環境下靜置1 h，重復上述離心操作處理后，沉淀物使用濾紙包好置入自動脫水機進行脫水，制成細胞塊并將其切成3 m厚的切片，將切片放置在60℃環境中烘干1 h后進行HE染色。

1.2.3 免疫組化染色將制好的細胞塊切片進行免疫組化染色，將包埋的細胞塊切片進行烤片后使用羅氏BenchMark ULTRA全自動免疫組化染色系統進行染色，單克隆抗體細胞角蛋白7（CK7）、癌胚抗原（CEA）及甲狀腺轉錄因子-1（TTF-1）均購自羅氏公司。

1.3 診斷標準細胞涂片及細胞塊HE染色均以可觀測到有惡性特征的細胞判斷為檢測陽性，無惡性特征的細胞判斷為陰性，如果存在異型細胞但無法支撐確診條件判斷為不確定。細胞塊免疫組化染色以靶細胞可見明顯的棕褐色或黃色顆粒為陽性，無著色情況則為陰性，著色情況置于兩者之間判斷為不確定。本研究以組織病理檢查結果作為診斷“金標準”，分析細胞涂片及細胞塊技術對惡性漿膜腔積液的診斷效能。

1.4 統計方法采用SPSS21.0統計軟件進行分析，計數資料采用2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同檢測方式陽性檢出結果比較細胞塊免疫組化染色檢出陽性率高于細胞涂片及細胞塊HE染色（2=6.091、4.608，均P＜0.05），與組織病理檢查結果差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同檢測方式陽性檢出結果比較 例（%）

2.2 不同腫瘤TTF-1、CK7及CEA陽性率情況免疫組化檢測TTF-1腫瘤細胞陽性率最高為肺癌（78.57%），CK7陽性率最高為乳腺癌（77.78%），CEA在肺癌中的陽性檢最高（92.86%），見表2。

表2 不同腫瘤TTF-1、CK7及CEA陽性率情況 例（%）

3 討論

漿膜腔積液是惡性腫瘤患者的常見并發癥，惡性漿膜腔積液的產生與癌細胞刺激、血管引起組織液回流障礙及癌栓阻塞淋巴管等原因存在明顯關系[6-7]。隨著人體內部循環的進行，隨時可能引起腫瘤的漿膜腔轉移，尤其是對于中晚期惡性腫瘤患者。影像學檢查受到積液的影響難以對患者原發病灶進行探查，因此在惡性漿膜腔積液的檢查中存在一定的局限性，漏誤診率較高。細胞病理學檢查最為突出的優勢就是操作簡單和創傷小，安全性較高，而且還能進行反復檢測，不僅檢測速度快還能有效提升檢查的準確性[8]。

常規細胞涂片是細胞病理學檢查最常見的檢查方式，但是涂片過程中難以保證涂片的均勻，因而容易出現細胞組織重疊及結構觀察難度大等問題，對閱片和診斷準確性造成較大的影響；此外在制片過程中還容易產生脫片、紅細胞及炎癥細胞較多等問題，在進行免疫組化檢測標記時對陽性蛋白的定位容易出現差異，因而難以滿足臨床診斷的要求。隨著臨床檢查技術的進步，免疫組化與細胞塊技術在臨床病理檢查中的應用越來越廣泛，細胞塊技術能夠有效使用離心處理，將紅細胞的干擾性因素進行排除，減少對檢查結果的影響；而免疫組化技術細胞更加集中，且能夠呈現更加明顯的組織學結構特征，便于對細胞特征及組織差異進行判斷，可準確定位陽性表達位置，更加利于臨床診斷。

本研究結果顯示細胞塊與免疫組化技術結合對惡性漿膜腔積液的檢測陽性率與組織病理檢查接近，能夠有效判斷漿膜腔積液的細胞組織形態，并對異型細胞進行判斷。隨著惡性腫瘤臨床治療的不斷進步，現在靶向治療已經成為廣為認同的治療方式，因而對患者腫瘤相關蛋白的表達進行檢測有利于指導臨床治療。本研究結果顯示不同惡性腫瘤患者抗體蛋白表達存在差異，可對臨床治療用藥的選擇提供借鑒。惡性腫瘤患者產生漿膜腔積液會造成胸悶、腹部不適等不良癥狀，造成較大的痛苦，因此進行漿膜腔積液抽取不僅能緩解患者不良癥狀，還能用于探查其漿膜腔積液的性質，提供基因和細胞檢查標本。