B群鏈球菌顯色培養基性能評價

王曉娜，叢桂敏，曹作偉

（沈陽市婦嬰醫院檢驗科，遼寧 沈陽 110011）

B群鏈球菌（group B streptococcus，GBS）又稱無乳鏈球菌，可引起新生兒敗血癥、腦膜炎，甚至導致新生兒死亡[1]。因此，及時準確的篩查圍產期孕婦生殖道中定植的GBS至關重要。傳統使用普通血瓊脂培養基（bood agar plate，BAP）進行篩查，但仍存在一定程度的漏檢率。GBS篩查的新型選擇性顯色培養基（chromogenic medium chromID Strepto B agar，STRB）原理為通過生化反應使培養基上的菌落呈現粉紫色，不通過鑒定即可直接篩查出GBS。本研究比較STRB與BAP鑒定GBS的敏感性、特異性及選擇性能，旨在為實驗室快速準確鑒定GBS提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 樣本制備 選取2019年1月至2019年6月在本院產科門診就診的35～37 周孕婦陰道拭子標本1 500 例，已知GBS菌株10例。

1.2 儀器與試劑 成品BAP購自鄭州安圖生物技術有限公司，STRB購自鄭州安圖生物技術有限公司，CO2孵育箱購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，DL-96Ⅱ細菌測定系統購自珠海迪爾生物工程有限公司。

1.3 質控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌標準菌株ATCC25922、白念珠菌ATCC6258均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.4 檢測方法 采用3 區劃線方法將標本接種于BAP 和STRB，置（35±2）℃、CO2孵育箱孵育18～24 h。對BAP上乳白色、濕潤、?溶血的疑似GBS菌落進行觸酶試驗、CAMP試驗，同時，采用DL-96Ⅱ細菌測定系統進行鑒定。對STRB上粉紫色、濕潤的典型菌落，用DL-96Ⅱ細菌測定系統測定，同時，使用CAMP試驗輔助判定。采用陰性培養基繼續孵育至48 h，疑似GBS菌落采用上述方法再進行鑒定。

1.5 觀察指標 比較直接接種血瓊脂培養基和顯色培養基篩查GBS的敏感性、特異性及選擇性能。

1.6 統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件進行數據分析，計數資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 BAP與STRB陽性率、敏感性、特異性比較 在BAP和STRB上接種的已知10例GBS菌株均檢出，檢出率為100.0%。孕產婦標本共篩查出125例GBS，陽性率為8.3%（125/1 500）。其中培養24 h后，BAP與STRB陽性率分別為6.2%（94/1 500）和8.1%（122/1 500）；培養48 h后，BAP與STRB陽性率均為8.3%（125/1 500），高于24 h陽性率。STRB與BAP篩查GBS陽性率比較差異具有統計學意義（χ2=3.911，P＜0.05）。STRB篩查GBS敏感性為97.60%、特異性為99.35%，見表1。

表1 BAP與STRB陽性率、敏感性、特異性比較Table 1 Comparison of the positive rate,sensitivity and specificity between BAP and STRB

2.2 BAP 與STRB 性能比較 BAP 上接種24 h 及48 h 后，分別有32.3%及31.8%的非目標菌群被完全抑制。STRB 上接種24 h 及48 h 后，分別有72.6%及70.9%的非目標菌群被完全抑制。孵育24 h后，BAP與STRB非目標菌群生長密度比較差異有統計學意義（χ2=32.684，P＜0.05），見表2。

表2 BAP與STRB非目標菌生長密度比較Table2 Comparison of growth density of non-target bacteria between BAP and STRB

3 討論

GBS是一種有莢膜的革蘭陽性鏈球菌，主要寄居在女性直腸和陰道，妊娠晚期感染GBS可導致新生兒感染、腦膜炎、甚至死亡[1]。因此，妊娠晚期及時篩查出攜帶GBS對降低圍產期GBS感染具有重要意義，而合采用適的篩查方法尤為重要。

3.1 不同地區GBS 定植率 相關數據表明[2]，不同種族、不同地區妊娠晚期孕婦GBS帶菌率也存在差異，且呈現上升趨勢。如非洲為22.4%，歐洲為19.0%[3]，東南亞地區略低，如日本為8.2%、韓國為8.0%[4]。而國內近幾年才對GBS感染引起的母兒危害才有所了解，僅2011 年《孕前及孕期保健指南》[5]、2015年《胎膜早破的診斷與處理指南》[6]中提到GBS篩查。因此，國內關于GBS感染以及對孕產婦及胎兒影響的相關研究較少。各地區GBS 陽性率差異較大，如澳門地區為17.1%[7]、銀川地區為5.09%[8]、北京地區為8.1%[9]。本研究陽性率為8.3%，低于澳門地區的數據，但高于銀川地區數據，與北京地區相當。分析原因可能與地域分布、人群構成比例、生活方式、經濟發展程度等因素有關。而檢出率則與多種因素有關，首先是臨床對GBS 的重視程度。目前，我國很多地區即使是經濟發達城市均未開展妊娠晚期GBS篩查。其次為實驗室檢測水平，包括高水平的質控水平、專業的檢驗人員等，均在GBS 篩查中起到至關重要的作用。此外，取材部位、篩查時間、檢測方法等均會影響檢出率。

3.2 不同GBS 培養方法比較 目前，臨床上應用最普遍的GBS的檢測方法為細菌培養法，也是目前檢測的金標準。主要通過形態學觀察、CAMP試驗做出初步的判斷，然后上機鑒定，但該方法需純培養菌落3～5 d，耗時較長，此外，操作復雜，且在血瓊脂培養基上易受到其他菌群如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等細菌的抑制，易受到檢測環境、送檢時間、儲存條件等多種因素影響。而原位雜交、PCR等方法雖然靈敏度較高，但特異性較低，且均需專業的儀器和技術人員，成本高、耗時長，較難在基層醫療機構推廣[10]；凝膠電泳法特異性較高，但由于GBS 具有多種血清型，易造成漏檢。本研究應用的STRB 是一種新型的選擇性顯色培養基，基本原理為在培養基中加入抗生素來抑制其他細菌的生長，再加入相應的反應底物使GBS菌落顯顏色，典型GBS菌落為粉紫色，其他細菌則可被抗生素抑制或少量生長而不產生典型菌落。本研究結果顯示，培養24 h 后，STRB 上陽性率為8.1%（122/1 500），高于BAP的6.2%（94/1 500），且增加培養時間后，檢出率均有所提高。同時，STRB上接種24 h及48 h后，非目標菌群完全抑制率（72.6%、70.9%）也高于BAP（32.3%、31.8%）。STRB對70%以上的樣本均可完全抑制非目標菌群的生長，選擇性能較好，結果易于判斷。與傳統方法相比，無需檢測儀器，肉眼即可觀察，省去GBS 鑒定步驟，操作簡便，降低培養時間。

綜上所述，B 群鏈球菌顯色培養基對于臨床GBS 篩查有良好的敏感性和特異性，可較好的抑制非目標菌群，選擇性能良好，結果易于判斷。與直接使用普通血瓊脂培養基相比可降低漏檢率，值得臨床推廣運用。