大蒜多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響

王譽(yù)瑾，張 萌，楊 松

（錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧錦州121001）

近年來(lái)，禽產(chǎn)品藥物殘留問(wèn)題越來(lái)越受到消費(fèi)者的重視?？股氐拇罅渴褂迷斐扇?、蛋、奶中抗生素殘留超標(biāo)和細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)，成為危害消費(fèi)者健康的重要隱患。中草藥具有來(lái)源廣、藥食同源、多靶向和多功能的特點(diǎn)，在疾病的預(yù)防和治療方面具有給藥方便、利用率高、安全、綠色等優(yōu)點(diǎn)，成為替代抗生素的有效產(chǎn)品之一。

大蒜（Allium sativumL．）又稱(chēng)葫或麝香草，百合科蔥屬，是一種古老的藥食兩用植物[1]。我國(guó)大蒜的種植面積占世界種植面積的2/3以上，是大蒜的主產(chǎn)國(guó)[2]。大蒜以鱗莖入藥，性溫味辛。大蒜中含有蒜氨酸、蒜氨酸酶、多糖、蛋白質(zhì)、維生素、微量元素、皂苷、揮發(fā)油等活性物質(zhì)，其中大蒜多糖含量占70%以上[3-4]。研究表明，大蒜多糖能增強(qiáng)人體免疫力，具有抗氧化和保護(hù)肝臟的作用[5]。大蒜在食品行業(yè)應(yīng)用較多，但在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用報(bào)道較少。本研究旨在探討大蒜多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的影響，為其在肉雞養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選取優(yōu)質(zhì)大蒜，蒜皮白亮、無(wú)霉變。按水提法提取大蒜多糖，提取溫度為80 ℃、提取時(shí)間為150 min、料液比（體積比）為1∶30[3]。提取的大蒜多糖經(jīng)測(cè)定純度為97%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

1日齡清潔級(jí)健康愛(ài)拔益加（AA）肉雞雛160只，由錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 儀器與試劑

ELISA試劑盒、Griess試劑、MTT試劑盒、PHA購(gòu)自上海酶聯(lián)生物公司.

酶標(biāo)儀購(gòu)自上海精密儀器儀表公司；恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自上海精密儀器儀表公司。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

1 日齡肉雞隨機(jī)分成4 組，每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只?；A(chǔ)日糧中分別添加0、1000（低劑量）、2000（中劑量）、3000 mg/kg（高劑量）大蒜多糖。試驗(yàn)期為42 d。采取3層籠養(yǎng)，1日齡肉雞每10只置于1籠，22日齡后每5只置于1 籠。肉雞自由采食和飲水，雞舍內(nèi)光照、溫濕度適宜，按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫。于42日齡以組為單位，每組取3只雞進(jìn)行取樣?；A(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 Basic diet composition and nutritional level

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能

飼養(yǎng)期間每天記錄投料量，取樣前禁食12 h，空腹稱(chēng)量肉雞體重，計(jì)算日均采食量、平均日增重、耗料增重比，計(jì)算公式如下：

1.5.2 免疫性能

1.5.2.1 免疫器官指數(shù)

取胸腺、脾臟和法氏囊，去除多余脂肪，稱(chēng)量免疫器官濕重。免疫器官指數(shù)按如下公式計(jì)算：

1.5.2.2 免疫球蛋白

肉雞翅下靜脈采血10 mL，3000 r/min離心10 min，取上清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作測(cè)定，每樣做3個(gè)重復(fù)。

1.5.2.3 淋巴細(xì)胞增殖活性

取肉雞胸腺、脾臟，除包膜，剪碎并胰酶消化，裂解紅細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×106/mL。取96 孔板，每孔加入100 μL，每測(cè)試設(shè)3 個(gè)重復(fù)，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照。加入含PHA 的RPMl-l640，每孔100 μL。細(xì)胞培養(yǎng)箱37 ℃孵育68 h。每孔棄去100 μL 上清，按MTT 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。酶標(biāo)儀570 nm處讀取各孔A值。

1.5.2.4 巨噬細(xì)胞釋放NO能力

調(diào)整脾細(xì)胞濃度至1×107個(gè)/mL，24 孔板中加入1 mL；再加入1 mL 含10%FBS 的RPMI-1640 培 養(yǎng) 液，37 ℃培養(yǎng)箱中孵育2 h。細(xì)胞洗滌2次后加入0.5 mL細(xì)胞培養(yǎng)液，孵育24 h。將上清液和不同濃度的NaNO2標(biāo)準(zhǔn)品加于96 孔板中，100μL/孔，每樣設(shè)3 個(gè)重復(fù)。加入Griess試劑100μL/孔，靜置10 min，酶標(biāo)儀550 nm處讀取A值。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0 進(jìn)行單因素方差分析，組間采用SNK 法進(jìn)行兩兩比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 大蒜多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表2）

表2 大蒜多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響Tab.2 Effect of garlic polysaccharide on growth performance of broilers

由表2 可知，中劑量組和高劑量組肉雞的平均日采食量、平均日增重顯著高于對(duì)照組（P<0.05），料重比顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；但中、高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 大蒜多糖對(duì)免疫器官指數(shù)的影響（見(jiàn)表3）

表3 大蒜多糖對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響Tab.3 Effect of garlic polysaccharide on immune organ index of broilers 單位：mg/g

由表3 可知，中劑量組和高劑量組肉雞胸腺指數(shù)顯著高于低劑量組和對(duì)照組（P<0.05），中劑量組和高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。中劑量組的法氏囊指數(shù)顯著高于低劑量組和對(duì)照組（P<0.05）；高劑量組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），但與低劑量組和中劑量組差異不顯著（P>0.05）。各組的脾臟指數(shù)無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.3 大蒜多糖對(duì)肉雞血清IgG、IgA含量的影響（見(jiàn)表4）

表4 大蒜多糖對(duì)肉雞血清IgG、IgA含量的影響Tab.4 Effect of garlic polysaccharide on serum IgG,IgA of broilers 單位：g/L

由表4 可知，中劑量組和高劑量組肉雞血清中IgG 含量顯著高于低劑量組和對(duì)照組（P<0.05）。高劑量組血清IgA水平略有提高，但差異不顯著（P>0.05）。

2.4 大蒜多糖對(duì)肉雞T細(xì)胞A值的影響（見(jiàn)表5）

表5 大蒜多糖對(duì)肉雞T細(xì)胞A值的影響Tab.5 Effect of garlic polysaccharide on A value of T lymphocyte of broilers

由表5 可知，中劑量組和高劑量組肉雞的T 細(xì)胞A 值顯著高于低劑量組和對(duì)照組（P<0.05），中、高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.5 大蒜多糖對(duì)肉雞巨噬細(xì)胞釋放NO 能力的影響（見(jiàn)表6）

表6 大蒜多糖對(duì)肉雞巨噬細(xì)胞釋放NO能力的影響Tab.6 Effect of garlic polysaccharide on NO release level of broilers 單位：μmol/L

由表6 可知，中劑量組和高劑量組巨噬細(xì)胞釋放NO的能力顯著高于低劑量組和對(duì)照組（P<0.05），但中劑量組和高劑量組之間差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

枸杞多糖、黨參多糖、黃芪多糖、牛膝多糖等多種植物多糖能提高畜禽的生長(zhǎng)性能和免疫功能[6-8]。枸杞多糖能夠提高肉雞日均采食量和平均日增重[9]。大蒜多糖作為益生元對(duì)小鼠腸道微生態(tài)具有促進(jìn)作用[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加中劑量（2000 mg/kg）和高劑量（3000 mg/kg）的大蒜多糖能顯著提高肉雞的日均采食量、平均日增重和耗料增重，進(jìn)而提高肉雞的生長(zhǎng)性能。中劑量和高劑量大蒜多糖之間的效果差異不顯著。

機(jī)體的免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫效應(yīng)分子組成。禽類(lèi)的免疫器官主要是胸腺、脾臟和法氏囊等。免疫器官的發(fā)育和機(jī)能直接影響禽類(lèi)免疫功能的強(qiáng)弱[6,11]。免疫器官指數(shù)是反應(yīng)免疫器官發(fā)育情況的一項(xiàng)重要指標(biāo)。T淋巴細(xì)胞是執(zhí)行細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞的增殖、分化能力越強(qiáng)，細(xì)胞免疫功能越強(qiáng)；淋巴細(xì)胞A570nm值與淋巴細(xì)胞增殖呈正相關(guān)，A570nm值越大，則增殖越顯著[11-14]。B 淋巴細(xì)胞是執(zhí)行體液免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，B 細(xì)胞受抗原刺激后轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體，是參與體液免疫的主要效應(yīng)分子?？贵w水平的高低，決定機(jī)體體液免疫能力的強(qiáng)弱。巨噬細(xì)胞是非特異性免疫中執(zhí)行吞噬功能的主要細(xì)胞，可通過(guò)其產(chǎn)生的NO 發(fā)揮殺傷病原體的作用[15-18]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加中劑量和高劑量的大蒜多糖可顯著提高胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)、T 淋巴細(xì)胞增值率、血清中總IgG 水平及巨噬細(xì)胞釋放NO 能力。說(shuō)明大蒜多糖能有效刺激免疫器官發(fā)育，提高機(jī)體的免疫功能，但中劑量和高劑量大蒜多糖組間的效果差異不明顯。

4 結(jié)論

飼糧中添加大蒜多糖能在一定程度上提高肉雞的生長(zhǎng)性能和免疫功能，且大蒜多糖的添加量以2000 mg/kg較佳。