牦牛病毒性腹瀉
——黏膜病的診斷及防控

向乾春，尹 苗，彭中美，陳希文

（綿陽師范學院動物疫病防控與健康養殖工程技術研究中心，四川綿陽621000）

牦牛可以人工馴化養殖，在當地牧民和我國養殖經濟中有非常重要的地位。牦牛可以耐受極端環境，全身皆有實用價值，被譽為“高原之舟”[1]。世界上的牦牛均發源于我國，在青藏高原及鄰近各省都有分布，總數約1500萬頭，占全世界的90%，其中青海省最多，西藏次之，四川第三[2]。1980年首次報道的黃病毒科瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉-黏膜病毒（bovineviraldiarrhea-mucosaldisease，BVD-MD），是引起牧民和眾多學者的研究的一種“牦牛拉稀病”的病原[3]。該病又稱牛黏膜病，遍布世界各大養殖區域。患病牦牛出現腹瀉、消化道黏膜脫落的主要癥狀，還會引起牦牛發育停滯、不孕死亡等嚴重后果。高雙娣等[4]通過細胞中和試驗檢測青海、四川等5個省牦牛群的牛病毒性腹瀉——黏膜病（BDV-MD）抗體，結果顯示，陽性檢出率為30.08%，對牧民和畜牧養殖業的經濟破壞巨大。

1 病原

BDV 病毒為單股RNA 病毒，具囊膜，黃病毒科、瘟病毒屬，在病料超薄切片中觀察呈現為24～30 nm 的圓球形顆粒。在胎牛的睪丸、腎、氣管、脾、鼻甲、肺、皮膚等組織細胞中可以分離得到BDV 病毒[5]。BDV 病毒有血清型相同而致病性不同的2種生物類型，如基因組全長約12.3 kb的 NY-1 株是不會引起細胞病變的病毒（Noncytopathogenic，NCP），第2種如12.5 kb的NADL株能造成細胞核固縮、形成空泡、細胞變圓和死亡等病變[6]。通過對BDV病毒的試驗發現，低溫下可以存活數年，在蔗糖密度梯度中的浮密度為1.13～1.14 g/mL，沉降系數為85 s左右[7]，對有機溶劑（乙醚、氯仿）敏感。病毒用乙醚處理后，TCID 從4.5 減小至1.0 以下。抗酸試驗證明，用0.1 mol/L的鹽酸培養后，TCID從4.5減小至1.0以下，說明該病毒不能在酸性條件下存活[2]。胰蛋白酶試驗表明，該病毒對胰蛋白酶具有一定的適應性，可以存活。BVD病毒與豬瘟病毒、綿羊邊界病病毒在瓊脂擴散試驗、中和試驗、免疫熒光試驗中有交叉反應，這3種病毒可能含有共同的可溶性抗原[8]。BDV 病毒可以入侵呼吸道和黏膜上皮細胞，進入血液形成病毒血癥，也可以通過胎盤感染，造成胚胎死亡、產木乃伊胎、弱胎和流產等[9]，還會產下先天性缺陷小牛，而且BDV會導致免疫抑制，進而作為一種持久隱形的傳播源，對養殖及防控造成極大困難。

2 流行病學

2.1 流行時間

在養殖過程中，牦牛病毒性腹瀉——黏膜病全年皆可以發生，其中不同地區呈現不同季節的高峰期，如有集中在5～6月發生的地區；也有常常在冬、春季發病較多的地區；還有于1～5月頻繁患病，且高峰期不固定，可能與當地的氣候及地理條件、人員流動有關。李有智等[10]研究表明，發病時間與時而晴天時而下雨的這種忽冷忽熱的天氣有關。

2.2 易感牦牛

該病對所有年齡階段的牦牛都有一定的感染能力，肉牛更易被傳染，多為隱性感染，其中患病牦牛，普遍為6～18月齡的犢牛，因為初生牛犢可以獲得從母體來的抗體，具有一定的免疫能力[11]。由牦牛的品種和所處的養殖環境、條件等，易感牦牛也呈現巨大的差異。田文學等[12]報道，發病體現在新生犢牛，成年的母牛不易感染。劉亞剛等[2]報道，分析3 歲以上的母牛發病最多，公牛不易感染；而哈利[9]研究齊哈瑪鄉果青村地區，發現感染的牦牛與性別無顯著關系。在自然條件下，BDV 病毒只感染牛，而人為干擾的情況下，豬、羊等其他牲畜也可以患此病。病程為短至幾天或長達半年[13]，且具有較強的傳染性、易復發。

2.3 傳染源

牦牛病毒性腹瀉——黏膜病主要的傳染源為患病、帶毒的牦牛，由于不斷的腹瀉或者拉血、各種分泌物的排出體外，造成了大量病毒的傳播，在血、脾、骨髓、腸淋巴結等組織和呼吸道、眼分泌物、乳汁、精液及糞便等均含活性病毒，還有持續感染的患病牛會終生攜帶病毒，對傳染該病具有極大的促進作用，且不易引起關注。其他牲畜，如羊感染此病因機體可以產生抗體而一般不會有典型的臨床癥狀，會成為一種隱性的持久傳染源[14]。

2.4 傳播途徑

牦牛病毒性腹瀉——黏膜病是一種極易傳染，可通過直接接觸或間接接觸感染健康牦牛的傳染病。正常牛與病牛直接接觸，或者經呼吸道的傳染性飛沫、消化道或交配，都會完成傳播。該病毒可以穿過胎盤屏障從母體進入胎兒[14]。在養殖過程中，牦牛因為誤食被病毒污染的飼料、水源等，或者接觸周圍的各種工具、護欄、養殖場中其他宿主而被感染。對于一些交通較發達的地區，感染率相對較高。

3 臨床癥狀

牦牛感染病毒性腹瀉——黏膜病時有2～14 d 的潛伏期。在發病初期，病牛心率加快、體溫上升到39.5～42 ℃，出現萎靡不振、精神不佳和進食減少的常見情況而未引起養殖人員的重視。再經過2 d左右[10]，病牛的口腔、鼻鏡和眼角就開始出現明顯癥狀，如口腔黏膜有糜爛、流清涎、牛舌發紫而上皮逐漸壞死，有的病牛伴隨牙齦潰爛、充滿泡沫狀唾液；鼻鏡比較干燥、鼻黏膜出現充血潰瘍，前期鼻液為淡黃色漿液，逐漸嚴重為有臭味的膿性液體，個別也會伴隨出血；病牛眼球充血，從流淚到流出黏稠分泌物直至出現視物模糊，嚴重可失明；該病最明顯的臨床癥狀就是出現嚴重的腹瀉，且隨著腹瀉頻繁而病情越來越嚴重，剛腹瀉時，排出淡黃色清水狀的糞便，然后又呈現出含小氣泡的稀粥樣糞便，顏色發生變化，且夾雜有黏液狀血絲、腸道脫落物，嚴重時病牛直接拉出血水，此時為暗紅色，整個過程中彌漫著惡臭氣味。腹瀉可持續1～3周不等，導致牦牛體重快速減輕、脫水及消瘦，也會導致不孕、母牛流產和死亡等后果。病毒性腹瀉——黏膜病感染之后，部分牦牛呼吸急促、大量飲水、減少進食或絕食跛行、獨處、痛苦呻吟；母牛同時會出現減少產奶或停產；犢牛皮膚干燥，有較多皮屑。發病后的7～25 d，陸續死亡[10]，強健牦牛死亡更慢，也有個別不經過治療的病牛康復，但是康復后的免疫力降低，不久也會死亡。

死亡牦牛解剖可見食道黏膜有豎帶狀的出血斑、氣管上皮黏膜分泌膿液、支氣管有紅色氣泡狀炎癥、整個肺水腫充血，呈現干酪狀。心臟腫脹、心包積液、瓣膜出血。瘤胃黏膜為紫紅色水腫、糜爛、易剝離，真胃黏膜充血壞死[13]。整個小腸壁增厚，微紅色的空腸和回腸黏膜出血、潰瘍，嚴重時會脫落，腸內有紅色、黑色惡臭物；十二指腸、盲腸和大腸結末端都存在豎狀出血條紋[15]。肝臟水腫充血，膽囊肥大，有膿汁，腎包膜脫落、出血。全身淋巴病變水腫、外觀為黑灰色，小腸淋巴壞死、發紫，切面為紅色。流產胎兒的消化系統、呼吸系統都有潰瘍和出血。病牛生產的犢牛，小腦發育障礙、腦室有積水。

4 診斷

4.1 初步診斷

根據流行病學和病牛的表現癥狀，對照病理學解剖現象，根據細菌學檢查結果，排除致病菌感染的原因，同時從寄生蟲病、代謝病等各個方面進行排除，從而初步判斷該牦牛是否患病毒性腹瀉——黏膜病[9]。

4.2 病毒抗原檢測

采集生病的牦牛的新鮮血液、糜爛組織、眼鼻分泌物、腸道黏膜作為分析樣品，然后用研磨、離心等處理方法對低溫保存的樣品進行抗原檢測試劑盒檢測，結果為陽性則判斷該病毒為病毒性腹瀉病毒。

4.3 血清學檢查

血清學檢查可以定性定量的分析，普遍的血清診斷方法有中和抗體試驗和酶聯免疫吸附試驗、瓊脂擴散試驗。采用雙份血清作中和試驗，滴度升高4倍以上判為陽性[16]。重復性良好，但一些免疫耐受的牛不分泌牛病毒性腹瀉抗體，檢測結果為陰性，造成錯誤診斷。

4.4 電子顯微鏡檢測

采集病牛的新鮮淋巴組織或者使用細胞培養物，做成超薄切片[17]，在電子顯微鏡下觀察，若是呈陽性，則可以看到細胞質的粗面內質網池附近存在許多直徑60 nm左右的圓球形病毒顆粒，也可以直接用負染法或者鉻投影的電子顯微照相測量病毒的大小和形態[18]。

4.5 熒光抗體試驗

可以采用熒光抗體技術對取自病牛體內組織或血液的冰凍切片進行檢測，或者分離感染細胞培養物，用豬瘟熒光抗體試驗來間接診斷，使用熒光顯微鏡觀察細胞質中是否存在有特異性的熒光綠色顆粒，證明BVD 病毒的存在[14]。

4.6 反轉錄-聚酶鏈式反應（RT-PCR）

反轉錄-聚酶鏈式反應方法具有高度特異性、靈敏性的特點，首先取病料研磨后的上清液，然后提取核酸，根據病毒的基因組設計特異性引物，進行RT-PCR 擴增，電泳檢測[1]。

5 防治措施

5.1 源頭遏制

BVD 的傳染方式多為直接接觸和血液傳播。牛群中易存在病毒攜帶者，人員的流動也具有傳播病毒的風險，所以從源頭上遏制病毒的傳播才具有根本性的防治。對于進口牛要加強檢疫力度，防止病牛的輸入，而且對產地、運輸和畜禽交易市場的檢疫也有相關的措施，了解國內外的疫情動態，堅決防止疫區相關牛生物制品、肉制品的流入，同時對新購牦牛種牛做血清中和試驗，阻斷疫情傳播。由于豬瘟病毒與本病毒同屬瘟病毒屬，豬感染此病毒的案例也逐漸增加，所以在檢疫方面要加強對豬的重視和防范[11]。各養殖牛場要減少病毒傳播機會，采用全進全出的模式，對疑似病例及時隔離和診斷，安全養殖。

5.2 消毒殺菌

采用合適的消毒方法對圈舍環境、飼養工具、飼養人員和流動車輛定期全面消毒，具體可用強力消毒靈、百毒殺、10%聚維酮碘、10%生石灰溶液、5%的氫氧化鈉溶液、1%的漂白粉等試劑對牦牛養殖場圈舍內外環境早晚消毒[19]，并用生石灰干燥地面，清理糞便，打開通風口，使病毒不易存在于環境中，從而阻止疫情的產生和蔓延。在疫情期間應格外注意，做好全方位防護，限制外來人員進出，對患病牦牛的排泄物及分泌物做好嚴格無害化處理，對牦牛群活動的草場也要定期消毒。哈利[9]采用生物熱消毒，將牦牛糞便堆漚發酵發熱，從而造成病原體的滅亡，對控制疫情傳播具有較好的效果。

5.3 疫苗防御

對于牦牛腹瀉——黏膜病的有效疫苗尚未研發完全，我國普遍使用的疫苗為豬瘟兔化弱毒苗，根據牦牛的具體情況分劑量進行肌肉注射，若出現過敏等不良現象，及時注射抗過敏藥物（磷酸地塞米松鈉、腎上腺素等），注射后的牦牛在一段時間內禁用抗生素類藥物。研究表明，注射疫苗的牦牛體溫正常、食欲良好、生殖方面也未發現不良影響[2]。舒展等[20]對疫區內疑似個體進行了緊急疫苗注射，進而緩解了疫情。紀金春等[21]曾用豬瘟兔化弱毒苗對青海省牦牛養殖場，免疫接種數萬頭牦牛，發現免疫的牦牛死亡率0.27%，而未注射的高達3.28%，差異明顯。但牛BVD與豬瘟病毒（CSF）為同一個屬，二者可能發生交叉感染，所以是否可以長期的使用豬瘟疫苗，目前尚無定論，但可以從分子方面入手，通過基因工程苗來研制BVD 新型疫苗，目前已有DNA疫苗研究報告[6]。

5.4 病情監控

根據該養殖場的牦牛養殖具體情況，制定一套詳細、科學的免疫方案，對有發病史的牛群全部進行疫苗免疫，增強抵抗力。確保孕牛飼料營養豐富；新生犢牛可以接種弱毒疫苗，加強免疫能力；定時抽樣檢測健康牛群的血清，做好記錄，實時監控，可以到達預測效果，一旦發現病牛就及時隔離，防止病原擴散進而疫情擴大。

5.5 緩解癥狀

對于已經感染病毒的牛表現較輕的癥狀時，先隔離，然后對癥下藥，以止瀉、補液、防止脫水、酸中毒等來提高病牛體內免疫力，幫助其盡快恢復。改善酸中毒，可以注射生理鹽水，加入碳酸氫鈉；調節腸胃可以注射反芻靈針劑；保護腸黏膜，服用活性炭即可。如果有嚴重的發炎和腸道出血現象，可用穿心蓮、黃連素等混合維生素C 肌肉注射；采用青霉素注射可以治療呼吸道感染；出現腹瀉，靜脈輸液或者服用溫鹽水，情況嚴重則喂食藥用炭。哈利[9]做了大量試驗，選定牧迪888作為清熱解毒藥物，并在疫區試用，取得很好的治療成效。做好清潔衛生，營造干燥通風環境，同時喂食一定量的青霉素、磺胺類藥物來避免病牛再繼續感染其他致病菌，避免造成經濟損失[22]。

5.6 病牛撲殺、死牛填埋

在當地政府或及相關獸醫的協助下對養殖場進行死牛清除，指導當地牧民對尸體進行無害化處理，就近填埋，大約深2 m左右，覆蓋一定的燒堿。將所有工具或者污染的環節徹底消毒。

5.7 積極宣傳、普及知識

在養殖片區進行宣傳牦牛病毒性腹瀉——黏膜病的知識，結合電視、廣播或者組織培訓，讓當地牧民認識到牦牛病毒性腹瀉——黏膜病的危害，同時還可以為養殖戶個體進行專門調查，協助控制病情。