四氯四碘熒光素作顯色劑測定鹽酸依托必利

龐向東, 劉曉紅, 謝雨娟, 孫彩瑕, 李小眉, 劉貴秀, 江 虹

(長江師范學院化學化工學院，重慶 408100)

鹽酸伊托必利是一種較新型胃腸促動力藥物，臨床上廣泛用于治療由慢性胃炎引起的上腹不適，餐后飽脹、食欲不振、惡心、嘔吐等。該藥若長期使用或過量使用，將使人體白細胞減少或血小板減少，從而引發嚴重的并發癥。鑒于此，對成藥中鹽酸伊托必利含量進行研究，有效控制患者的用藥質量顯得非常重要和必要。目前，國內外對其檢測方法研究較多的是高效液相色譜法[1 - 5]，也有一些熒光法[6,7]、電化學法[8,9]、液-質聯用法[10,11]及分光光度法[12,13]等的報道。本工作以四氯四碘熒光素作為顯色劑，采用吸收光譜法對鹽酸伊托必利進行研究，實驗發現該體系在可見光區域內有2個特征吸收峰，其吸光度與鹽酸伊托必利的濃度服從朗伯-比爾定律，并有較高靈敏度和較寬的線性范圍，可用于藥物中鹽酸伊托必利的測定。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

U-3010型紫外-可見分光光度計，日本日立公司生產。

鹽酸伊托必利標準品(Itopride Hydrochloride，ITO)(99.9%，No：100939-200701，中國食品藥品檢定研究院)，四氯四碘熒光素(TCTF)(97%，南京康滿林化工實業有限公司)，三羥甲基氨基甲烷(Tris)(分析純，齊一生物科技有限公司)，HCl(分析純，重慶華東化工有限公司)。超純水(成都優普超純水儀制)。

樣品：市售2種批號的遼寧新高制藥有限公司生產的鹽酸伊托必利片(1#和2#)。

1.2 溶液的配制

ITO標準溶液：貯備液濃度為394.9 mg/L(準確稱取適量經105 ℃干燥2 h的ITO標準物質，用水溶解并定容至容量瓶中)，操作液濃度為39.49 mg/L(取適量貯備液稀釋10倍)，均保存于4 ℃冰箱中。TCTF溶液：1.00 mmol/L(準確稱取適量TCTF，用水溶解、定容)。Tris溶液：200 mmol/L(稱取適量Tris，用水溶解配成所需濃度)。HCl：100 mmol/L(取適量濃HCl，用水稀釋配成所需濃度)。Tris-HCl溶液：pH=3.0～9.8(用pH計測定Tris和HCl的混合液)。

1.3 樣液的制備

取1#和2#ITO片各5片(去包衣)，分別加水溶解，攪拌，超聲15 min后過濾，濾液定容至2 000 mL容量瓶中。均置于4 ℃冰箱中。取該液稀釋10倍，待測。

1.4 吸光度的測定方法

準確移取不大于1.80 mL的39.49 mg/L ITO標準溶液于10 mL比色管中，加1.50 mL 1.00 mmol/L TCTF及2.00 mL pH=8.88 Tris-HCl溶液，用水定容并搖勻，室溫下放置15 min后，于紫外-可見分光光度計上掃描吸收光譜(以試劑空白作參比)，在486 nm和554 nm處測定溶液的吸光度A486、A554和A486+554。

2 結果與討論

2.1 條件的選擇

2.1.1 反應酸度及用量考察了Tris-HCl作反應介質時不同酸度對486 nm和554 nm波長處體系吸光度的影響。從圖1可知，反應的最佳酸度為pH=8.88，其它pH條件下，靈敏度均有下降。從圖2可知，2.00 mL是pH=8.88 Tris-HCl的最佳用量，其它用量下，體系靈敏度均有下降。故后續實驗選擇在最佳酸度及用量的條件下進行。從圖可知，采用二波長疊加測定，有相對最大的靈敏度。

圖1 Tris-HCl溶液pH對吸光度的影響Fig.1 Effect of Tris-HCl solution pH on absorbance

圖2 Tris-HCl溶液用量對吸光度的影響Fig.2 Effect of Tris-HCl solution amount on absorbance

圖3 四氯四碘熒光素溶液濃度對吸光度的影響Fig.3 Effect of tetrachlorotetraiodofluorescein concentration on absorbance

圖4 吸收光譜Fig.4 Absorption spectra1:3.95 mg/L ITO,against water;2:0.0150 mmol/L TCTF,pH=8.88,against water;3-7:0.790,2.37,3.95,5.53,7.11 mg/L ITO-0.150 mmol/L TCTF,pH=8.88,against reagent blank.

2.1.2 TCTF濃度考察了0.0500～0.400 mmol/L范圍內的TCTF對486 nm和554 nm處體系吸光度的影響。從圖3可知，TCTF的最佳反應濃度是0.15 mmol/L，其余濃度下吸光度均有下降，故后續實驗選用在TCTF的最佳濃度下進行，即取1.00 mmol/L TCTF溶液1.50 mL進行實驗。相同條件下，用雙波長疊加測定有相對最大的靈敏度。

2.1.3 物質加入順序按吸光度測定方法，考察了ITO、TCTF及Tris-HCl在不同加入順序時，486 nm和554 nm處體系吸光度的大小。結果表明，不同加入順序對體系的吸光度基本不影響。

2.1.4 反應時間及穩定性固定上述最佳條件不變，考察ITO與TCTF反應時間在5～120 min內對新物質吸光度的影響。實驗表明，反應在15 min內可以完全，穩定時間約1 h。后續實驗選在15 min后進行。

2.2 吸收光譜

ITO與TCTF的特征吸收光譜見圖4。可知，ITO本身幾乎無吸收信號，TCTF溶液(pH=8.88)在526 nm處的吸收信號較強。從3～7的譜線可知，ITO與TCTF生成的新物質在可見光區內產生了2個具有特征吸收峰的新吸收光譜，特征峰分別位于486 nm(藍移40 nm)和554 nm(紅移28 nm)，波移現象表明，TCTF與ITO可以發生顯色反應生成新物質。新物質的吸光度與0.08～7.10 mg/L范圍內的ITO濃度服從朗伯-比爾定律，并有好的線性關系。故可選擇486 nm和554 nm或它們的疊加作為測定波長，定量檢測ITO。

2.3 方法學考察

2.3.1 標準曲線及靈敏度配制最佳條件下的ITO標準系列溶液，掃描吸收光譜，并做標準曲線。從表1可知，該法有較高的靈敏度、較寬的線性范圍及好的線性關系。

表1 標準曲線相關參數

2.3.3 樣品分析取1#和2#待測液各1.00 mL，以雙波長疊加為例，測定待測液的吸光度，并根據雙波長疊加測定的回歸方程求出待測液中ITO的含量，再求出1#和2#樣品中ITO的含量，并進行加標回收試驗，結果見表2。

表2 鹽酸伊托必利樣品的分析及回收試驗(n=5)

3 結論

以TCTF作顯色劑測定ITO的吸收光譜法簡便、快速，有較高靈敏、較好選擇性和較寬的線性范圍，準確度和精密度滿足定量分析要求，分析成本低、樣品處理安全。該方法適于市售藥物中鹽酸伊托必利的快速定量測定。