熒光探針測(cè)定苦參素膠囊中丙酮?dú)埩?/h1>
2021-05-14 00:30:56李亞波張愛(ài)菊張小林
分析科學(xué)學(xué)報(bào) 2021年2期
董 娜，萬(wàn) 啟，李亞波，張愛(ài)菊，張小林
(甘肅醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，甘肅平?jīng)?744000)
藥品中有機(jī)溶劑殘留是指藥物制劑在生產(chǎn)過(guò)程中所使用過(guò)的，但又未能完全除去的揮發(fā)性有機(jī)化合物，行業(yè)協(xié)會(huì)將他們分為四類，丙酮?dú)w為第3 類屬低毒溶劑，在2015年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定丙酮?dú)埩舨坏贸^(guò)0.5%[1]。目前，丙酮測(cè)定多采用頂空氣相色譜法[2 - 6]。苦參素具有環(huán)酮結(jié)構(gòu)(圖1)，性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，苦參素膠囊在生產(chǎn)過(guò)程中涉及到包括丙酮、乙醇在內(nèi)的多種有機(jī)溶劑，為了有效控制產(chǎn)品質(zhì)量和保證用藥安全,鄒義栩[7]等采用頂空氣相色譜法同時(shí)對(duì)該藥物中丙酮、乙醇2種殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，丙酮的最低檢測(cè)濃度達(dá)到6.38×10-7mol/L，可用于實(shí)際樣品分析。但到目前為止，熒光法測(cè)定丙酮報(bào)道較少。
圖1 苦參素結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure formula of matrine
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
930N熒光分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。
苦參素膠囊(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：20010763，規(guī)格：0.1克/粒)。取苦參素膠囊10粒，準(zhǔn)確稱量，用水定容至10 mL，該溶液作為供試液。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
取2.0 mL碘液于25 mL容量瓶中，加1.0 mL 1 mol/L NaOH溶液，1.50 mL供試液，輕微振蕩，靜置反應(yīng)3 min后，加入1.0 mL 1 mol/L HCl，2.0 mL 0.10 mmol/L RhB溶液，5.0 mL HAc-NaAc緩沖溶液，蒸餾水定容，靜置5 min后，以365 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定發(fā)射波長(zhǎng)580 nm處1.0×10-3mmol/L RhB熒光強(qiáng)度(F)，同時(shí)測(cè)定丙酮空白熒光強(qiáng)度(F0)，計(jì)算ΔF(ΔF=F-F0)。
2 結(jié)果與討論
2.1 熒光光譜
圖2 不同體系的熒光光譜Fig.2 Fluorescence spectra in different system
2.2 羅丹明B用量?jī)?yōu)化
在pH=4.5環(huán)境下考察不同體積0.10 mmol/L RhB溶液的熒光特性(圖3)。結(jié)果表明，在0～4.0 mL范圍內(nèi)RhB熒光強(qiáng)度與RhB加入體積有線性關(guān)系，當(dāng)RhB濃度大于等于8.0×10-6mol/L時(shí)(即體積大于等于2.0 mL)，自猝滅作用增強(qiáng)，線性關(guān)系變差。故0.10 mmol/L RhB取量為2.0 mL。
2.3 碘液用量
圖3 羅丹明B濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響Fig 3 Effect of the concentration of Rhodamine B on fluorescence intensity
圖4 碘液濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響Fig.4 Effect of the concentration of iodine on fluorescence intensity
2.4 NaOH用量
2.5 pH影響
2.6 反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化
圖5 溶液pH對(duì)熒光強(qiáng)度的影響Fig.5 Effect of solution pH on fluorescence intensity
圖6 動(dòng)力學(xué)曲線(a.熒光恢復(fù)；b.熒光猝滅)Fig.6 Kinetic curve(a.fluorescence recovery；b.fluorescence quenching)
2.7 試劑加入順序的優(yōu)化
2.8 工作曲線
2.9 干擾試驗(yàn)
苦參素膠囊中丙酮和乙醇?xì)埩敉瑫r(shí)存在，二者均可發(fā)生碘仿反應(yīng)，因此實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)考察了丙酮和乙醇共存時(shí)乙醇的干擾情況。選擇丙酮濃度為8 μmol/L，乙醇濃度為80 μmol/L(濃度設(shè)定比為1∶10)，按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定兩種物質(zhì)與碘混合后不同反應(yīng)時(shí)間段熒光強(qiáng)度(圖8)。結(jié)果表明，丙酮碘仿反應(yīng)較快，3 min后熒光強(qiáng)度趨于恒定；乙醇在5 min后熒光強(qiáng)度開始增大，顯然在樣品加入3 min時(shí)加HCl終止碘仿反應(yīng)，10倍乙醇不干擾丙酮測(cè)定。乙醇反應(yīng)分兩步完成，先氧化生成乙醛，其后是乙醛碘仿反應(yīng)，反應(yīng)速率有差異。實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了Al3+、Cl-、Na+、Mg2+、K+和Zn2+等離子干擾情況，測(cè)量誤差控制在±5%以內(nèi)，100倍的上述離子均不干擾測(cè)定。
圖7 丙酮工作曲線Fig.7 Working curve of acetone
圖8 乙醇干擾性考察Fig.8 Study on the interference of ethanol
2.10 樣品分析
取3批樣品適量，按“1.2”方法完成供試品溶液制備及丙酮?dú)埩魷y(cè)定，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，藥樣中均有丙酮檢出，繼而求得原藥中的丙酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.0019%、0.0021%和0.0018%，但測(cè)定值均未超過(guò)0.5%的最高限量規(guī)定；加標(biāo)回收率在96.5%～105.0%范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)≤2.5%。說(shuō)明方法準(zhǔn)確度和精密度良好。
表1 藥品中丙酮的測(cè)定結(jié)果
3 結(jié)論
- 分析科學(xué)學(xué)報(bào)的其它文章
- 《分析科學(xué)學(xué)報(bào)》征稿簡(jiǎn)則
- 《分析科學(xué)學(xué)報(bào)》編輯委員會(huì)
- 稀土元素?fù)诫s上轉(zhuǎn)換納米材料在衛(wèi)生分析領(lǐng)域中的應(yīng)用
- 電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定金屬單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中雜質(zhì)
- 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定雞肉和雞蛋中10種硝基咪唑類藥物及代謝物
- QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定銀耳中17種殺蟲劑殘留
董 娜，萬(wàn) 啟，李亞波，張愛(ài)菊，張小林
(甘肅醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，甘肅平?jīng)?744000)
藥品中有機(jī)溶劑殘留是指藥物制劑在生產(chǎn)過(guò)程中所使用過(guò)的，但又未能完全除去的揮發(fā)性有機(jī)化合物，行業(yè)協(xié)會(huì)將他們分為四類，丙酮?dú)w為第3 類屬低毒溶劑，在2015年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定丙酮?dú)埩舨坏贸^(guò)0.5%[1]。目前，丙酮測(cè)定多采用頂空氣相色譜法[2 - 6]。苦參素具有環(huán)酮結(jié)構(gòu)(圖1)，性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，苦參素膠囊在生產(chǎn)過(guò)程中涉及到包括丙酮、乙醇在內(nèi)的多種有機(jī)溶劑，為了有效控制產(chǎn)品質(zhì)量和保證用藥安全,鄒義栩[7]等采用頂空氣相色譜法同時(shí)對(duì)該藥物中丙酮、乙醇2種殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，丙酮的最低檢測(cè)濃度達(dá)到6.38×10-7mol/L，可用于實(shí)際樣品分析。但到目前為止，熒光法測(cè)定丙酮報(bào)道較少。
圖1 苦參素結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure formula of matrine
1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
930N熒光分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。
苦參素膠囊(正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：20010763，規(guī)格：0.1克/粒)。取苦參素膠囊10粒，準(zhǔn)確稱量，用水定容至10 mL，該溶液作為供試液。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
取2.0 mL碘液于25 mL容量瓶中，加1.0 mL 1 mol/L NaOH溶液，1.50 mL供試液，輕微振蕩，靜置反應(yīng)3 min后，加入1.0 mL 1 mol/L HCl，2.0 mL 0.10 mmol/L RhB溶液，5.0 mL HAc-NaAc緩沖溶液，蒸餾水定容，靜置5 min后，以365 nm為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定發(fā)射波長(zhǎng)580 nm處1.0×10-3mmol/L RhB熒光強(qiáng)度(F)，同時(shí)測(cè)定丙酮空白熒光強(qiáng)度(F0)，計(jì)算ΔF(ΔF=F-F0)。
2 結(jié)果與討論
2.1 熒光光譜
圖2 不同體系的熒光光譜Fig.2 Fluorescence spectra in different system
2.2 羅丹明B用量?jī)?yōu)化
在pH=4.5環(huán)境下考察不同體積0.10 mmol/L RhB溶液的熒光特性(圖3)。結(jié)果表明，在0～4.0 mL范圍內(nèi)RhB熒光強(qiáng)度與RhB加入體積有線性關(guān)系，當(dāng)RhB濃度大于等于8.0×10-6mol/L時(shí)(即體積大于等于2.0 mL)，自猝滅作用增強(qiáng)，線性關(guān)系變差。故0.10 mmol/L RhB取量為2.0 mL。
2.3 碘液用量
圖3 羅丹明B濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響Fig 3 Effect of the concentration of Rhodamine B on fluorescence intensity
圖4 碘液濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響Fig.4 Effect of the concentration of iodine on fluorescence intensity
2.4 NaOH用量
2.5 pH影響
2.6 反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化
圖5 溶液pH對(duì)熒光強(qiáng)度的影響Fig.5 Effect of solution pH on fluorescence intensity
圖6 動(dòng)力學(xué)曲線(a.熒光恢復(fù)；b.熒光猝滅)Fig.6 Kinetic curve(a.fluorescence recovery；b.fluorescence quenching)
2.7 試劑加入順序的優(yōu)化
2.8 工作曲線
2.9 干擾試驗(yàn)
苦參素膠囊中丙酮和乙醇?xì)埩敉瑫r(shí)存在，二者均可發(fā)生碘仿反應(yīng)，因此實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)考察了丙酮和乙醇共存時(shí)乙醇的干擾情況。選擇丙酮濃度為8 μmol/L，乙醇濃度為80 μmol/L(濃度設(shè)定比為1∶10)，按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定兩種物質(zhì)與碘混合后不同反應(yīng)時(shí)間段熒光強(qiáng)度(圖8)。結(jié)果表明，丙酮碘仿反應(yīng)較快，3 min后熒光強(qiáng)度趨于恒定；乙醇在5 min后熒光強(qiáng)度開始增大，顯然在樣品加入3 min時(shí)加HCl終止碘仿反應(yīng)，10倍乙醇不干擾丙酮測(cè)定。乙醇反應(yīng)分兩步完成，先氧化生成乙醛，其后是乙醛碘仿反應(yīng)，反應(yīng)速率有差異。實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了Al3+、Cl-、Na+、Mg2+、K+和Zn2+等離子干擾情況，測(cè)量誤差控制在±5%以內(nèi)，100倍的上述離子均不干擾測(cè)定。
圖7 丙酮工作曲線Fig.7 Working curve of acetone
圖8 乙醇干擾性考察Fig.8 Study on the interference of ethanol
2.10 樣品分析
取3批樣品適量，按“1.2”方法完成供試品溶液制備及丙酮?dú)埩魷y(cè)定，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，藥樣中均有丙酮檢出，繼而求得原藥中的丙酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.0019%、0.0021%和0.0018%，但測(cè)定值均未超過(guò)0.5%的最高限量規(guī)定；加標(biāo)回收率在96.5%～105.0%范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)≤2.5%。說(shuō)明方法準(zhǔn)確度和精密度良好。
表1 藥品中丙酮的測(cè)定結(jié)果
3 結(jié)論
- 分析科學(xué)學(xué)報(bào)的其它文章
- 《分析科學(xué)學(xué)報(bào)》征稿簡(jiǎn)則
- 《分析科學(xué)學(xué)報(bào)》編輯委員會(huì)
- 稀土元素?fù)诫s上轉(zhuǎn)換納米材料在衛(wèi)生分析領(lǐng)域中的應(yīng)用
- 電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定金屬單元素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中雜質(zhì)
- 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定雞肉和雞蛋中10種硝基咪唑類藥物及代謝物
- QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定銀耳中17種殺蟲劑殘留