分光光度法測定藥用輔料中亞硝酸鹽的含量

2021-05-12 09:15:02吳興興唐力朱怡君伍成祥

生物化工 2021年2期

吳興興，唐力，朱怡君，伍成祥

（常州制藥廠有限公司，江蘇常州 213000）

藥用輔料一般情況下被認為是惰性物料，但藥用輔料中所含的活性雜質會間接催化或直接參與藥物的降解反應。例如，微晶纖維素等諸多輔料中存在的硝酸鹽及亞硝酸鹽等雜質。一些含胺基團的藥物在一定條件下可以與亞硝基發生反應，生成一種基因毒性雜質[1]。雖然輔料中亞硝酸鹽雜質的含量較低，但微量的亞硝酸鹽即可與某些胺基類藥物反應生成基因毒性遠超亞硝酸鹽本身毒性的雜質。因此，對于胺基類藥物制劑，選取亞硝酸鹽含量低的輔料是有效控制藥品中基因毒性雜質且代價較低的一條途徑。

目前，現行版《中國藥典》[2]四部收載的質量標準中，未涉及藥用輔料中亞硝酸鹽的檢查方法。在純化水的“檢查”項下也僅以顏色對比的方法對純化水中亞硝酸鹽的含量限度作了定性規定。本文擬利用食品中亞硝酸鹽的鹽酸萘乙二胺分光光度法對藥用輔料中的亞硝酸鹽進行檢測，探究該方法的精密度、回收率等，并對市場上常見的藥用輔料進行檢測，以驗證該方法的適用性。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

（1）檢測試劑：對氨基苯磺酰胺，上海恒遠生物科技有限公司；鹽酸萘乙二胺、亞硝酸鈉、鹽酸，南京化學試劑有限公司。

（2）藥用輔料：無水磷酸氫鈣，湖州展望藥業有限公司；磷酸氫鈣，連云港德邦化工有限公司；乳糖，KERRY；預膠化淀粉，卡樂康；硬脂酸鎂，安徽山河藥用輔料股份有限公司；7個生產廠家的微晶纖維素，分別為明臺化工股份有限公司、JRS、曲阜天利藥業有限公司、FMC、湖州展望藥業有限公司、安徽山河藥用輔料股份有限公司、江蘇西典藥用輔料有限公司。

UV2600型紫外分光光度計，日本島津；ME4002型電子天平，梅特勒-托利多。

1.2 試驗方法

1.2.1 溶液的制備

（1）檢測試劑：配制濃度為4 g/L的對氨基苯磺酰胺的20%（V/V）稀鹽酸溶液；配制濃度為2 g/L的鹽酸萘乙二胺溶液。

（2）線性標準溶液：分別稱取適量的亞硝酸鈉，以純化水制備濃度分別為0.649 μg/mL、1.326 μg/mL、2.652 μg/mL、5.304 μg/mL、7.960 μg/mL的亞硝酸鈉標準溶液；分別吸取1 mL上述亞硝酸鈉標準溶液，加對氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液1 mL及鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，制得濃度分別為0.216 μg/mL、0.442 μg/mL、0.884 μg/mL、1.768 μg/mL、2.653 μg/mL的線性標準溶液。

（3）供試品溶液：分別稱取適量的藥用輔料，以純化水制得濃度為0.1 g/mL的儲備液。分別吸取1 mL上述儲備液，加對氨基苯磺酰胺的稀鹽酸溶液1 mL及鹽酸萘乙二胺溶液1 mL，制得濃度分別為0.033 g/mL的供試品溶液。

1.2.2 方法學驗證

1.2.2.1 確定最大吸收波長

將濃度為0.442 μg/mL的線性標準溶液于紫外分光廣度計上進行全波長掃描，得到最大吸收波長。

1.2.2.2 線性考察

于最大吸收波長處檢測線性標準溶液的吸光度值，并繪制標準曲線。

1.2.2.3 精密度

將濃度為0.442 μg/mL的線性標準溶液連續進樣6次，計算6次吸光值的RSD值。

1.2.2.4 回收率

分別取濃度為2.653 μg/mL、0.884 μg/mL、0.216 μg/mL的線性標準溶液，檢測吸光度值，平行測定3次，與根據標準曲線線性回歸方程計算而得的吸光值進行對比，計算高、中、低3個濃度的回收率。

1.2.3 藥用輔料中硝酸鹽含量分析

于最大吸收波長處檢測供試品溶液的吸光度值，根據標準曲線回歸方程計算供試品中亞硝酸鈉的含量。