醇類防腐劑對皮膚常駐菌的抑制作用

宋靜

（廣州廣曼生物科技有限公司，廣東廣州 510000）

皮膚微生物在保護機體免受病原體入侵、保護免疫系統和分解自然產物方面發揮著重要作用[1-3]。皮膚是人體最大的器官，是有益微生物的定植地，是防止病原體入侵的物理屏障。當屏障被打破或當常駐菌和病原體之間的平衡被打破時，就可能導致皮膚病甚至全身疾病[4-7]。皮膚常駐菌主要有瘡皰丙酸桿菌、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌、糠秕馬拉色菌和白色念珠菌[8]。

保證化妝品不被微生物污染的常規策略是添加防腐劑。為解決傳統防腐劑相對刺激性較大的問題，近年來一些更加溫和、安全的自防腐成分開始在化妝品業內替代傳統防腐劑被廣泛使用，如醇類防腐產品。本文以兩種醇類防腐產品為研究對象，探究二者對皮膚常駐細菌瘡皰丙酸桿菌、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌和皮膚常駐真菌糠秕馬拉色菌、白色念珠菌5種菌群的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株與樣品

痤瘡丙酸桿菌（GIM 1243）、表皮葡萄球菌（ATCC12228）、糠秕馬拉色菌（GIM 2.181）、白色念珠菌（ATCC10231）均為標準菌株，廣東省微生物菌種保藏中心提供；干酪乳桿菌為自提取菌株，提取自養樂多活菌酸奶。

1,2-己二醇（純度≥99.89%）、1,2-戊二醇（純度≥99.87%），廣州廣曼生物科技有限公司。

1.2 試劑與儀器

胰蛋白胨大豆瓊脂、沙氏葡萄糖瓊脂培養基，美國BD公司；腦-心浸萃瓊脂培養基、MC培養基、改良SDA培養基、PBS溶液，廣東環凱微生物科技有限公司。

Thermo恒溫培養箱，賽默飛；壓力蒸汽滅菌器，廈門致微儀器有限公司；生物安全柜，青島海爾；日本三菱C-31厭氧培養盒套裝，三菱瓦斯化學株式會社。

1.3 菌株的培養與計數

5種菌株的培養方法如表1所示，均采用平板法進行計數。

1.4 試驗方法

吸取5.0 mL適當濃度的1,2-己二醇或1,2-戊二醇水溶液、0.1 mL適當濃度的菌懸液和5.0 mL雙料肉湯，加入20.0 mL試管中混勻。細菌菌懸液終濃度 1.0×106～9.0×106CFU/mL，真菌懸液終濃度1.0×104～9.0×104CFU/mL。1,2-己二醇或 1,2-戊二醇的終濃度為0.5%、1.0%和2.0%。在室溫（37 ℃）放置一定時間（6 h、12 h、24 h）后，每次取1 mL進行菌落總數測定，使用PBS溶液進行10倍系列稀釋，并選擇適宜的稀釋度樣液1.0 mL接種傾注相應的培養基平板，每個稀釋度接種2個平板，按菌株特性選擇合適的溫度進行恒溫培養。以滅菌PBS溶液作為陰性對照，培養完成后進行計數，并進行數據統計。

1.5 抑菌效果評價標準

殺滅對數值：細菌數量減少的對數值，稱為殺滅對數值（結果保留至小數點后2位）。抑菌效果評價標準見表2。

2 結果與分析

1,2-己二醇對皮膚常駐菌的抑制作用見表3。由表3可見，0.50%～1.00%的1,2-己二醇在24 h內對5種皮膚常駐菌未表現出任何抑制作用，并且不隨作用時間的延長而呈現正相關規律；當濃度提高到2.00%時，表現出一定的抑制作用，并隨著作用時間的延長而呈現正相關趨勢，作用24 h最為明顯，尤其對痤瘡丙酸桿菌和白色念珠菌的抑制效果更為顯著。

表3 1,2-己二醇對皮膚常駐菌的抑制作用

1,2-戊二醇對皮膚常駐菌的抑制作用見表4。由表4可見，0.50%～1.00%的1,2-戊二醇在24 h內對5種皮膚常駐菌未表現出任何抑制作用，并且不隨作用時間的延長而呈現正相關趨勢；當濃度提高到2.00%時，作用6 h后對痤瘡丙酸桿菌出現明顯的抑制作用，作用24 h對干酪乳桿菌、白色念珠菌、糠秕馬拉色菌表現出抑制效果。

表4 1,2-戊二醇對皮膚常駐菌的抑制作用

目前，在全球市場中，微生物組學化妝品的開發主要是通過微生物直接或間接改善皮膚多種炎癥反應、敏感肌等問題[9-10]，其中化妝品防腐作用產品備受關注。本研究使用多種皮膚常駐細菌和真菌分別測試醇類防腐劑的抑制效果，最大程度地模擬化妝品中防腐作用產品與皮膚常駐菌接觸的方式和時間，通過抑菌評價，真實反映了醇類防腐劑對皮膚微生態的影響。

3 結論

0.50%～1.00%的1,2-己二醇和1,2-戊二醇在24 h內對皮膚常駐菌瘡皰丙酸桿菌、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌、白色念珠菌和糠秕馬拉色菌未表現出任何抑制作用；濃度提高到2.00%時，開始呈現出一定的抑制作用，但短時間內（≤6 h）影響較小，因此建議在微生態配方中1,2-己二醇和1,2-戊二醇的單獨使用濃度控制在1.0%以內，應用到與人體接觸較短時間的產品（如面膜）中可以提高使用濃度或總含量。