GC-MS法同時測定化妝品中19種香料含量

漆愛明，李彥君，譚杰

（廣東省藥品檢驗所，廣東廣州 510300）

隨著香料工藝的不斷發展與成熟，香料的應用范圍不斷擴大，帶來的安全性問題也越來越引起人們的重視。其中，過敏問題尤為多見[1-4]，并占到全部化妝品過敏案例的1/3以上[5]。國際日用香料研究所（RIFM）、國際香精香料協會（IFRA）、歐盟、中國香料香精化妝品工業協會（CAFFCI）等監管評價機構及行業協會收集和分析日用香料的相關科學信息，并對其進行研究與評估，建成全球范圍內關于香料香精的毒理學數據及文獻最全面、最完整的數據庫并不斷完善相關法規[6]，從根源上約束香料市場的規范性。

2003年3月，歐盟委員會提出了26種致敏原在化妝品中的限量，規定這26種致敏原在停留型產品中濃度如果高于0.001%，沖洗類產品中濃度如果高于0.01%，必須在化妝品標簽上標注過敏原名稱[7]。而我國化妝品法規并不要求在化妝品標簽上標注日用香精全成分[8]。然而香精成分和影響相當復雜，其帶給消費者的健康危害也更應重視起來。因此，亟需通過化妝品風險監測評價為出臺相關法規或措施以控制化妝品香料香精的安全性提供重要的數據支持。

為了加強對化妝品中香料使用安全和質量的管理，我國已建立了同時檢測19種致敏香料的推薦性國家標準GB/T24800.10-2009《化妝品中十九種香料的測定氣相色譜-質譜法》。本研究依據現有標準，對方法進行了進一步優化，應用優化后的方法對護膚類、香水類以及口紅3類化妝品進行了風險監測研究。

本研究應用氣相色譜-三重四極桿質譜法同時測定126批次風險監測化妝品中的19種香料成分，并將測定結果與產品標簽標識和批件配方成分進行比對和統計分析，了解化妝品香料的使用和質量安全情況，為化妝品市場監管提供可靠的數據和技術支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS-TQ8050氣相色譜-三重四極桿質譜法儀，島津；XS205分析天平，Mettler Toledo；CPA224S電子分析天平，Sartorius；LG10-2.4A離心機，北京京立；LAB DANCER S25渦流振蕩器，IKA公司。

苯甲酸芐酯（99%）、水楊酸芐酯（99%）、羥基香草醛（98%）、香葉醇（99%）、金合歡醇（95%）、甲位戊基桂醛（97%）、丁香酚（99%）、丁苯基甲基丙醛（97%）、芳樟醇（98%）、2-辛炔酸甲酯（98%）、異丁香酚（97%）、香茅醇（97%），阿拉丁；苯甲醇（100%）、苧烯（95%）、α-己基肉桂醛（95%）、肉桂酸芐酯（99%），百靈威；戊基肉桂醇（97%），Dr.E；新鈴蘭醛（97%），BASF；α-異甲基紫羅蘭酮（96.5%），PRIVI；甲醇，色譜純，德國Merck公司。實驗用水為一級水，電導率≤0.01 mS/m。

1.2 標準溶液的配制

精密稱取苯甲酸芐酯、水楊酸芐酯、羥基香草醛、香葉醇、金合歡醇（法呢醇）、甲位戊基桂醛、丁香酚、丁苯基甲基丙醛（鈴蘭醛）、芳樟醇、2-辛炔酸甲酯（庚炔羥酸甲酯）、異丁香酚、香茅醇、苯甲醇（芐醇）、苧烯、α-己基肉桂醛、肉桂酸芐酯、戊基肉桂醇、羥異己基3-環己烯基甲醛（新鈴蘭醛）、α-異甲基紫羅蘭酮對照品各1.0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配制成19種香料濃度均為10.0 mg/mL的混合標準儲備液，再取19種香料混合標準儲備液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用色譜純甲醇定容至刻度，搖勻，配制成19種香料混合使用標準儲備液，于4 ℃避光保存，可使用3個月。

1.3 樣品前處理

1.3.1 固體、膏狀、乳液類樣品

稱取1.0 g（精確至0.001 g）試樣于10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL超聲提取15 min。取部分溶液轉移至10 mL具塞塑料離心管中，以不低于12 000 r/min的轉速離心15 min，上清液加入2 g無水硫酸納脫水，經0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液作為待測樣液。

1.3.2 液體類樣品

稱取1.0 g（精確至0.001 g）試樣于10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL，充分搖勻，加入2.0 g無水硫酸納脫水，經0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液作為待測樣液。

1.4 19種香料系列濃度標準工作溶液的制備

精密移取19種香料混合使用標準儲備液5.00 mL、4.00 mL、2.00 mL、1.00 mL、0.50 mL、0.50 mL分別置于 10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、50 mL容量瓶中，用色譜純甲醇稀釋，定容，得標準系列溶液 S5、S4、S3、S2、S1、S0，濃度分別為 50.0 mg/L、40.0 mg/L、20.0 mg/L、10.0 mg/L、5.0mg/L、1.0 mg/L。

1.5 GC-MS條件

色譜柱：Agilent DB-Wax（30 m×0.50 μm×0.32 μm）；色譜柱溫度：40 ℃保持2 min，然后以5 ℃/min升溫至240 ℃，保持18 min。

進樣口溫度：250 ℃；色譜-質譜接口溫度：280 ℃；載氣：氦氣，純度≥99.999%，流速2.0 mL/min；電子轟擊電離（EI）源，電子能量70 e V，多反應監測（MRM）模式，溶劑延遲4.0 min；進樣方式：分流進樣，分流比10∶1。

2 結果與分析

2.1 色譜柱及色譜條件的考察

圖1為總離子色譜圖，對色譜圖中19種香料的保留時間、定量離子、MRM離子和豐度比進行總結，結果如表1所示。

圖1 總離子色譜圖

表1 19種香料的GC-MC譜圖信息總結表

2.2 方法的線性方程及檢出限

由表2可知，19種香料成分的線性良好，線性范圍都落在1.0～50.0 mg/L，線性相關系數R2為1，檢出限（LOD）在0.000 14%～0.000 16%，低于《化妝品中十九種香料的測定氣相色譜-質譜法》GB/T24800.10-2009標準中的檢出限0.000 30%，定量下限（LOQ）為0.001 0%。

表2 19種香料的線性范圍、回歸方程、相關系數（R2）、檢出限和定量限

2.3 精密度和回收率

分別平行測定中濃度（標準系列溶液S3的濃度）6次作為本實驗的精密度，由表3可知，本方法中濃度對應的組分精密度良好。19種香料成分的精密度相對偏差均小于2.0%，該方法的穩定性和重復性良好。

表3 19種香料成分中濃度的精密度（n=6）

分別對2種基質（液體和乳狀）樣品分別進行19種香料成分S2濃度的加標回收實驗,回收率測定結果6份間的RSD值作為各不同化妝品基質中含S2濃度待測成分時的測定重復性?；|是液體時，19種成分的回收率范圍為83.2%～100.9%，相對標準偏差的范圍為2.7%～4.8%；基質是乳狀時，19種成分的回收率范圍為84.5%～106.0%，相對標準偏差的范圍為2.0%～4.4%。由表4可知，乳狀基質和液體基質回收率效果基本一致。

表4 2種空白基質（液體狀和乳狀）的加標回收率及重復性（n=6）

2.3 化妝品中19種香料成分檢出情況

對126批（其中護膚類44批次、香水類11批次、口紅類71批次）化妝品進行了分析檢測，結果如表3所示。從表3可以看出，香水類檢品目標物芳樟醇、丁苯基甲基丙醛（鈴蘭醛）、苧烯、香茅醇、香葉醇、α-己基肉桂醛、α-異甲基紫羅蘭酮、羥基香草醛水楊酸芐酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、羥異己基 3-環己烯基甲醛（新鈴蘭醛）、金合歡醇（法呢醇）、丁香酚、甲位戊基桂醛、異丁香酚、2-辛炔酸甲酯、戊基肉桂醇和肉桂酸芐酯的檢出率分別為100.0%、90.9%、81.8%、81.8%、63.6%、54.5%、45.5%、45.5%、45.5%、36.4%、36.4%、27.3%、18.2%、9.1%、9.1%、9.1%、0、0和0。其中芳樟醇檢出率最高，為100.0%；檢出率最低的是2-辛炔酸甲酯、戊基肉桂醇和肉桂酸芐酯，檢出率為0，19種香料成分的檢出率為84.2%。護膚類檢品19種香料目標物檢出率最高的是苧烯，樣品檢出率為68.2%；檢出率較高的是芳樟醇，樣品檢出率為56.8%，19種香料成分的檢出率為73.7%?？诩t類檢品19種香料成分檢出率最高的是芳樟醇，樣品檢出率為31.0%，檢出率較高的是香茅醇，樣品檢出率為22.5%，19種香料成分的檢出率為78.9%。從表5可以看出，香水類19種香料成分的檢出率相對護膚類和口紅類是最高的，檢出香料成分的含量相對護膚類和口紅類也是偏高的，這應該是與香水的使用用途有很大關系。依據GB/T22731-2017日用香精標準來判斷126批產品是否合格，經一一對照判定，所做檢品香料使用量是符合規定的，所有檢品檢測結果合格。

表5 實際樣品中19種香料成分的測定結果

2.4 口紅類測定結果與產品標簽標識和批件配方成分的比較研究

對71批次口紅類樣品的測定結果、樣品標簽標識和批件配方成分進行了比較研究，結果如表6所示。其中標簽標識標有含香料成分的共25批次，標簽標識標有不含香料成分的共46批次；批件配方含香料成分的有21批次；批件配方不含香料成分的有21批次，批件配方未標注是否含香料成分的29批次，批件配方未標注在此次研究中作不判定處理。檢驗結果與標簽標識、批件配方一致的檢品批次為44批，占總批次比率為62.0%；檢驗結果與標簽標識、批件配方不一致的檢品批次為14批，占總批次比率為19.7%；檢驗結果與標簽標識、批件配方不一致的檢品批次為14批，占總批次比率為19.7%；檢測結果與標簽標識、批件配方未標注的作為不判定批件共13批，批件比率為18.3%。

表6 71批次口紅樣品的實際檢驗結果與標簽標識、批件配方的比較研究

續表6

3 結論

GC-MS同時測定化妝品中19種香料的檢出限為0.000 144%～0.000 159%，19種香料在相應的線性范圍內線性關系良好，相關系數R2均等于1.0；在乳狀和液體狀2種劑型化妝品加標濃度下，液體狀加標的回收率為83.2%～100.9%，乳狀加標的回收率為84.5%～106.0%，相對標準偏差均小于5.0%。通過對126批次（護膚類44批次、香水類11批次、口紅類71批次）化妝品的檢驗結果分析可以看出，香水類化妝品普遍含有香料成分，護膚類其次，口紅類化妝品香料的使用相對較少。其中芳樟醇在香水中使用率在此次檢驗中100%的含蓋面，其次是丁苯基甲基丙醛的使用率也偏高，達到90.9%含蓋面?；瘖y品標簽標識與批件不一致接近20%，自制不判定檢品接近19%，因此應加強標簽標識與批件不一致的監管和自制化妝品產品標簽標識的規范化。隨著香料行業的不斷發展，香料在化妝品領域的應用種類也越來越多，香料的市場監督檢驗方法也需與時俱進。