肺腺癌患者血清BUB1B表達水平與其臨床病理特征和預后的相關性

高小燕，江愛桂，盧慧宇

(泰州市人民醫院呼吸與危重癥醫學科，江蘇 泰州 225300)

肺癌是全球男性惡性腫瘤的主要死因，女性惡性腫瘤的第二大死因，治療難度大、病死率高，嚴重影響患者及其家庭的正常生活[1]。肺腺癌是肺癌最主要的類型之一，其發病極為隱匿，多數患者確診時已為晚期而失去手術機會[2]。除手術治療外，靶向治療是肺腺癌最常用的治療手段，由于個體差異較大，靶向藥物的治療有效率較低(僅10%)且極易耐受[3]。因此，探索腫瘤篩查、侵襲轉移及預后判定的新靶點尤為重要。研究發現，紡錘體檢測點蛋白BUB1B，又稱BUBR1具有誘導紡錘體故障，引起細胞染色體不穩定性，導致癌變的作用[4]。BUB1B在多種腫瘤組織中呈高表達，如多發性骨髓瘤、胃癌、結腸癌[5-6]，并與腫瘤的侵襲轉移密切相關。陸展鵬[7]通過對TCGA數據庫調取的501例肺腺癌組織中BUB1B表達情況進行分析發現，BUB1B信使RNA在肺腺癌患者癌組織中也呈高表達，可能成為肺腺癌患者預后的生物標志物，但其在血液中的表達情況尚不清楚。為進一步研究血清中BUB1B的表達情況、驗證其評價化療效果和預后的臨床價值，本研究主要評估監測血清BUB1B對肺腺癌患者化療效果及預后的臨床意義。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月至2015年12月泰州市人民醫院內科收治的100例Ⅲb/Ⅳ期無手術切除機會的肺腺癌患者作為肺腺癌組，選取同期100例健康體檢者作為對照組。肺腺癌組男54例、女46例，年齡42～76歲，平均(63.8±7.0)歲；TNM分期：Ⅲb期62例、Ⅳ期38例。對照組男55例、女45例，年齡38～79歲，平均(64.1±8.7)歲。兩組性別、年比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2納入與排除標準 納入標準：①所有患者經影像學檢查擬診斷肺癌，并經組織病理學確診肺腺癌；②根據TNM分期標準[8]評價為Ⅲb或Ⅳ期，且失去手術機會者；③中性粒細胞絕對值≥7.5×109/L，血紅蛋白≥90 g/L，肌酐清除率≥45 mL/min；血小板≥300×109/L；丙氨酸轉氨酶<80 U/L；④臨床資料完整；⑤患者均簽署了知情同意書。排除標準：①合并嚴重的肝、腎等器官功能損害者；②入組前3個月內有放化療史者；③存在基因突變者；④未完成隨訪者。

1.3治療方法 順鉑聯合培美曲塞(AP方案)：療程第1天靜脈滴注培美曲塞，劑量標準為500 mg/m2；且第2天至第3天靜脈滴注順鉑，劑量標準為75 mg/m2；21 d為1個周期，同時給予地塞米松、復合維生素、格拉司瓊和甲氧氯普安預處理，并給予水化、利尿治療。

1.4酶聯免疫吸附測定法檢測血清BUB1B表達 采集肺腺癌組患者治療前1 d清晨空腹肘靜脈血5 mL，對照組體檢當日同方法采集血樣5 mL，血樣靜置30 min后，4 ℃條件下以離心半徑13.5 cm、1 000 r/min離心10 min，取血清，-80 ℃冰箱保存備用。采用人抗BUB1B抗體酶聯免疫吸附測定試劑盒(英國Abcam公司生產，批號：ab70209)測定血清BUB1B表達水平，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.5療效判斷標準及隨訪 利用胸部CT觀察化療前1 d和化療結束后1周患者病灶的變化情況，依據世界衛生組織實體瘤療效評價標準[9]判定療效：疾病進展、穩定、部分緩解、完全緩解，總有效率=(部分緩解例數+完全緩解例數)/總例數×100%。隨訪所有患者并記錄患者生存時間等信息，生存時間分為入院接受治療開始至患者死亡和入院接受治療開始至患者失訪前最后一次隨訪。

2 結 果

2.1兩組治療前血清BUB1B水平比較 治療前，肺腺癌組血清BUB1B水平明顯高于對照組[(145.8±11.8) μg/L比(21.0±3.3) μg/L](t=104.757，P<0.001)。

2.2BUB1B的表達水平對患者預后的預測效果 利用ROC曲線(治療效果作為狀態變量，BUB1B表達水平作為檢測變量)分析預測效果顯示，曲線下面積為0.804(95%CI0.757～0.851，P<0.001)，經計算最佳臨界值為148.05 μg/L，特異度為91.00%(91/100)，靈敏度為81.00%(81/100)，見圖1。

2.3治療前不同BUB1B表達水平肺腺癌患者的療效 根據ROC曲線將肺腺癌組患者分為高表達組(BUB1B≥148.05 μg/L，43例)和低表達組(BUB1B<148.05 μg/L，57例)，結果顯示，低表達組患者治療總有效率明顯高于高表達組[63.16%(36/57)比18.60%(8/43)](χ2=19.745，P<0.001)。

2.4肺腺癌患者BUB1B表達的影響因素分析 以治療前肺腺癌組患者血清BUB1B表達水平與臨床資料進行單因素分析，結果顯示，年齡≥60歲患者的BUB1B水平高于年齡<60歲患者，Ⅳ期患者BUB1B水平高于Ⅲb期患者，腫瘤直徑<5.0 cm患者的BUB1B水平高于腫瘤直徑≥5.0 cm患者(P<0.05)，不同性別、有無吸煙史、是否轉移、分化程度患者BUB1B水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。以BUB1B高低表達為因變量，年齡(≥60歲=1，<60歲=0)、TNM分期(Ⅲb期=1，Ⅳ期=0)及腫瘤直徑(≥5.0 cm=1，<5.0 cm=0)為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示，TNM分期及腫瘤大小是BUB1B高低表達的影響因素(P>0.05)，見表1、2。

2.5肺腺癌患者生存分析 將本研究考察的所有因素設為自變量，對肺腺癌患者生存情況進行Cox回歸分析，結果顯示，血清BUB1B≥148.05 μg/L(RR=1.612，95%CI0.813～2.411,P=0.036)、伴有淋巴結轉移(RR=0.501，95%CI0.148～0.854,P=0.022)是影響肺腺癌患者生存的獨立危險因素(P<0.05)。隨訪觀察兩組患者的生存情況顯示，治療后BUBIB高表達組患者中位生存時間明顯低于低表達組(3.475個月比5.904個月)(χ2=11.025，P=0.028)，見圖2。

圖2 治療后BUBIB基因高表達組和低表達組生存曲線

3 討 論

美國癌癥學會官方期刊發表的《2018年全球癌癥統計數據》[10]顯示，2017年全球1 800萬新增癌癥病例及960萬癌癥死亡病例中，我國新增病例數占380.4萬例、死亡病例數占229.6萬例，均居全球第一，其中肺癌是我國惡性腫瘤發病率最高的癌癥類型。化療是目前臨床常用的治療無法手術肺癌的手段，但個體差異較大，化療效果往往難以預測，故探究可預測藥物療效的預測因子具有重要的臨床意義。血清學標志物具有創傷小、易操作、價格低等優點，在監測肺癌化療療效上受到廣泛關注[11]。有研究表明，β-微管蛋白、核糖核苷酸還原酶M1、切除修復交叉互補基因1可分別用于預測紡錘體抑制劑、吉西他濱、鉑類等化療藥物療效[12-14]，但尚未得到臨床證實。

有絲分裂是維持機體細胞正常增殖的重要生物學進程，其檢測點是調節該進程的最核心的部位，大量研究發現，許多疾病(如腫瘤、高血壓)的發生發展均與其檢測點發生異常密切相關[15-16]。目前已發現的有絲分裂檢測點蛋白有BUB1B、BUB3、有絲分裂阻滯缺陷蛋白2以及細胞分裂周期蛋白20等[17-19]。其中BUB1B在肺癌、多發性骨髓瘤、胃癌、結腸癌等腫瘤中均呈過表達，在腫瘤發生發展中具有重要作用，但在肺癌患者血清中的表達情況及其對化療效果的預測價值目前國內外報道較少。Fu等[20]的研究顯示，與良性前列腺細胞和組織相比，前列腺癌細胞系和腫瘤組織中BUB1B mRNA和蛋白表達均顯著升高；體外研究表明，過表達BUB1B增強了前列腺癌細胞系的增殖、遷移和侵襲能力，而消耗BUB1B則不影響細胞功能，提示BUB1B可能對促進肺癌細胞轉移和腫瘤生長具有重要作用，但具體機制尚不清楚，需進一步研究。本研究中，肺腺癌組患者血清BUB1B水平較對照組明顯升高，且TNM分期越晚、腫瘤越大肺腺癌患者的血清BUB1B水平越高。

順鉑聯合培美曲塞(AP方案)是治療肺腺癌的主要化療方案之一，中國臨床腫瘤學會原發性肺癌診療指南(2018版)中也將AP方案作為肺腺癌患者的一線治療方案[21]。因此，本研究選擇AP方案化療患者來考察BUB1B預測化療效果和預后價值。BUB1B過表達與腫瘤侵襲轉移以及患者預后有關[22]，肺腺癌是轉移性疾病，預后較差，但其腫瘤進展機制尚不清楚。Chen等[22]研究發現，敲除BUB1B蛋白基因后可顯著抑制肺腺癌細胞系的錨定非依賴性生長。同種異體移植和小鼠模型研究發現，抑制BUB1B表達可抑制原發性腫瘤生長，減少了其向淋巴結的轉移，從而延長腫瘤患者的生存期。BUB1B的N端是癌細胞不依賴錨定的生長和失衡抗性功能所必需的激酶結構域，抑制BUB1B表達可阻礙癌細胞的生長和轉移[23]。

丁華杰等[24]研究顯示，候選基因BUB1B在肺腺癌患者細胞中表達顯著升高，可能與BUB1B促進肺癌細胞生長、轉移有關。本研究結果顯示，預測肺腺癌患者預后的最佳血清BUB1B臨界值為148.05 μg/L，可預測肺腺癌患者預后。低表達組患者治療總有效率明顯高于高表達組，表明高表達BUB1B的肺腺癌患者可能對AP方案產生抵抗；Cox模型分析顯示，血清BUB1B≥148.05 μg/L、伴有淋巴結轉移可能是影響肺腺癌患者生存時間的獨立危險因素，提示該類患者生存期可能較短。本研究存在化療方案單一、樣本量有限等不足，研究結果仍需要大樣本多中心研究的進一步證實。

綜上所述，晚期肺腺癌患者血清BUB1B水平較健康人群明顯升高，與肺腺癌患者的生存時間和臨床病理特征密切相關，可作為預測肺腺癌監測的臨床病理特征和預后的生物學指標。