HR-HPV感染患者微量元素與陰道微環境中細胞因子的相關性研究

王珊珊，任靜靜，程旭紅

（新鄉市中心醫院檢驗科，河南新鄉 453700）

高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）持續感染是宮頸癌發生的必要因素，但僅存在HR-HPV 感染不足以將已感染細胞轉化為腫瘤細胞，也可能是HR-HPV 感染病程中炎性反應和免疫反應的調控發生了改變［1-2］。微量元素通過多種途徑調節炎癥反應及免疫細胞因子的分泌，多項研究證實，微量元素含量異常與HPV 感染、宮頸高級別病變及宮頸癌有密切關系［3-6］，但HR-HPV 患者微量元素與細胞因子的相關性研究報道較少且不全面。本研究探討HR-HPV 感染患者血清微量元素及陰道微環境中細胞因子的差異，以及微量元素與細胞因子間的相關性，為尋找HPV 的治療開辟新思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017 年1 月至2019 年5 月新鄉市中心醫院收治的66 例感染HR-HPV 宮頸病變患者，根據臨床診斷分為宮頸上皮內瘤（CIN）Ⅰ組20 例［平均年齡（43.02±8.43）歲］、CIN Ⅱ～Ⅲ組25 例［平均年齡（42.17±9.62）歲］及宮頸癌組21 例［平均年齡（45.17±8.89）歲］。擇取同期該院體檢的20 例健康女性作為對照組［平均年齡（47.33±7.81）歲］。納入標準：①年齡≥24 周歲；②HR-HPV 感染經病理診斷確診為CIN 患者、宮頸癌Ⅰ期患者；③無其他宮頸疾病和惡性腫瘤；④無自身免疫疾病或使用免疫抑制劑治療史。排除標準：①妊娠、哺乳期婦女；②1 周內有性行為、陰道用藥；③心、肺、肝、腎功能異常。本研究通過醫院倫理委員會批準，患者及其家屬知情同意。4 組一般資料比較，差別無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 陰道微環境中細胞因子檢測 生理鹽水充分沖洗陰道壁上1/3 及宮頸陰道部，用專用試劑管于后穹窿吸取灌洗液，離心取上清分裝，-80℃保存備用。恢復室溫后采用酶聯免疫吸附法檢測γ干擾素（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-10（IL-10）、轉化生長因子-β（TGF-β）水平，試劑盒購自武漢優爾生生命科學裝備有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.2.2 清微量元素檢測 采集外周靜脈血分離血清，采用電子耦合-等離子體原子發射光譜儀進行檢測血清中鋅、硒、鐵、錳、鈷等微量元素。

1.3 統計學方法

數據分析采用SSPSS 19.0 統計軟件。計量資料以均數±標準差（）表示，比較用方差分析，進一步兩兩比較用SNK-q 檢驗；相關性分析用Pearson 法；P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4 組血清中微量元素水平比較

4 組鐵、錳、鈷等微量元素含量比較，差異無統計學意義（P＞0.05），但均在正常值范圍內。對照組血清中鋅、硒水平＞CINⅠ組＞CIN Ⅱ～Ⅲ組＞宮頸癌組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 4 組陰道微環境中細胞因子水平比較

4 組陰道微環境中細胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-10、TNF-α 水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 血清中鋅含量與陰道微環境中細胞因子的相關性分析

血清鋅含量與陰道中IFN-γ、TNF-α 水平呈正相關（r=0.573 和0.612,P=0.007 和0.009）；而與陰道中IL-10、TGF-β 水平呈負相關（r=-0.193和-0.416,P=0.002 和0.003）。

表1 4 組血清中微量元素水平比較（）

表1 4 組血清中微量元素水平比較（）

注：1）與對照組比較，P＜0.05；2）與CIN Ⅰ組比較，P＜0.05；3）與CIN Ⅱ～Ⅲ組比較，P＜0.05。

表2 4 組陰道微環境中細胞因子水平比較（,pg/mL）

表2 4 組陰道微環境中細胞因子水平比較（,pg/mL）

注：1）與對照組比較，P＜0.05；2）與CIN Ⅰ組比較，P＜0.05；3）與CIN Ⅱ～Ⅲ組比較，P＜0.05。

3 討論

微量元素對人類的生存和健康起著至關重要的作用，已有研究證實，微量元素與感染性疾病及惡性腫瘤的發生密切相關［3-7］。本研究發現，HR-HPV 患者的鋅含量明顯降低，且隨著臨床分期的加重鋅含量顯著降低，而各組鐵、錳、鈷水平比較無差異，這與ABULIZI 等［8］研究指出血清鎳和硒低水平與HPV 感染和CIN Ⅱ有關的結果不一致，而與張媛媛等［9］和文彩虹［10］研究鋅是宮頸疾病組、宮頸癌的保護性因素的結果一致。本研究結果提示，鋅含量的降低與HR-HPV 感染的發生及宮頸病變的進展有關，這可能與微量元素是維持機體免疫自穩、免疫監測和免疫應答所必需、其在體內的失衡可造成免疫調節的紊亂有關。

IFN-γ、TNF-α 主要是由Th1 細胞分泌的炎性因子，參于細胞免疫發揮抑制病毒復制和抗腫瘤作用［11-13］。IL-10 是下調或抑制炎性因子分泌的Th2 細胞因子［14］，具有免疫抑制活性。TGF-β 是一類多肽類的生長因子，能夠抑制機體淋巴因子活化殺傷細胞（ILAK）的產生和NK 細胞的活化、減少細胞因子的產生［14］。本研究結果顯示，隨著宮頸病變的發展，血清中IFN-γ、TNF-α 水平逐漸降低，而血清中IL-10、TGF-β 水平在CIN 組及宮頸癌組明顯升高，表明HR-HPV 感染患者發生了免疫應答的紊亂及多種免疫細胞因子的異常，即機體發生了細胞免疫的調節異常，偏向于免疫抑制的Th2 細胞優勢應答，且隨著病變發展Th2 優勢應答越明顯，這與研究報道Th1/Th2 漂移是HRHPV 持續感染和宮頸癌發生的重要因素一致［15-17］。

本研究結果還發現，機體鋅含量與陰道微環境中IFN-γ、TNF-α 呈正相關，而與陰道微環境中IL-10、TGF-β 呈負相關。這提示HR-HPV 感染病程中鋅的缺乏與Th2 優勢應答密切相關、造成CD4+T 細胞免疫應答紊亂，這可能是由于鋅參與多種催化酶活性中心的構成。當機體內輕度缺鋅時，血清胸腺素的活性顯著下降，影響T 細胞功能，包括異基因細胞毒、抑制功能及IL-12 的產生功能等，造成Th1 和Th2 細胞功能的不平衡［18-19］。本研究HR-HPV 病毒載量CIN Ⅰ組＜CINⅡ～Ⅲ組＜宮頸癌組也證實Th1 細胞清除HPV 及抗腫瘤能力減弱。IL-10 通過激活JAK1/STAT3 信號傳導通路促進E6、E7 癌基因蛋白表達，加劇癌變的發生；同時E6、E7 癌基因蛋白反式激活IL-10 過表達，形成惡性循環［20］。總之Th1/Th2 漂移是HR-HPV 持續感染和宮頸癌發生的重要因素。

綜上所述，HR-HPV 感染患者血清微量元素鋅顯著降低，其與疾病發生、發展中免疫反應的異常密切相關。