基于氣相指紋圖譜技術研究鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和干白扁豆花的成分*

河北中醫學院 河北省高校中藥組方制劑應用技術研發中心

劉興超 彭小園 師新穎 張清清 王紅芳 周 莉 李 斯 李愛英 (石家莊 050200)

提要 本研究以白扁豆花為原料，首次通過氣相(GC)色譜指紋圖譜技術，考察鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和曬干白扁豆花成分的差異。色譜柱為DB-1毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，流速為1 mL/min。凍干白扁豆花和鮮白扁豆花的指紋圖譜相似度比值為0.950以上；而曬干白扁豆花和鮮白扁豆花的指紋圖譜相似度比值為0.720左右；采用氣相質譜(GC-MS)方法，鮮白扁豆花共計檢測出13種成分，鮮白扁豆花、凍干扁豆花和曬干扁豆花中成分的種類差異不大，但是相似度數值有差別，凍干扁豆花可替代鮮扁豆花應用于臨床。凍干扁豆花可以更能有效的避免因儲存而導致的有效成分的減少，有利于白扁豆花更好地應用于臨床。

白扁豆花是豆科扁豆屬植物扁豆DolichoslablabL.的干燥花，呈扁平不規則三角形，具有解暑化濕、和中健脾之功效，用于治療痢疾、泄瀉、赤白帶下等癥，在我國具有悠久的應用歷史。經典名方“新加香薷飲”中采用的是鮮白扁豆花，而有的則采用的是干扁豆花，兩者內在成分的差異可能決定了其藥效的差異。本項研究的目的在于研究鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和曬干白扁豆花的成分差異，為凍干扁豆花替代鮮扁豆花提供科學的數據支持，同時，通過氣相質譜(GC-MS)方法對鮮白扁豆花的揮發性化學成分進行鑒定，這些揮發性成分的鑒定，為白扁豆花的藥理和臨床應用提供基礎支持。

1 材料

1.1 儀器與試劑 Agilent 7890B氣相(GC)色譜儀，Agilent 7890B-7000C GC-MS聯用儀(配有Mass Hunter質譜工作站， NIST 14標準譜庫)，中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2012版本；甲醇(色譜純)。

1.2 樣品 白扁豆花采自于河北中醫學院藥草園，白扁豆種子經河北中醫學院王乾老師鑒定為DolichoslablabL.的種子。

2 方法與結果

2.1 樣品的處理

2.1.1 鮮白扁豆花:摘取鮮白扁豆花立即置于-80℃低溫冰箱中，冷凍，而后于液氮中研碎，稱取1 g，加入25 mL容量瓶中，加入15 mL甲醇，回流30 min，放冷至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，進樣1 μL 進行測定。

2.1.2 凍干白扁豆花:摘取鮮白扁豆花立即置于-80 ℃低溫冰箱中，而后于冷凍干燥機內凍干，研碎，稱取1 g，加入25 mL容量瓶中，加入15 mL甲醇，回流30 min，放冷至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，進樣1 μL 進行測定。

2.1.3 干白扁豆花:摘取鮮白扁豆花，曬干，研碎，稱取1 g，加入25 mL容量瓶中，加入15 mL甲醇，回流30 min，放冷至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45 μm濾膜，進樣1 μL 進行測定。

2.2 GC色譜條件

2.2.1 GC色譜指紋圖譜條件:DB-1毛細管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；程序升溫：柱初始溫度為80 ℃，以10 ℃ /min的速率升至300 ℃，保持10 min；進樣口溫度：300 ℃；載氣：N2；載氣流速：1 mL/min；分流比：20 ∶1。

2.2.2 GC-MS色譜條件:色譜柱、升溫程序同GC色譜指紋圖譜條件；載氣：He；載氣流速：1 mL/min；分流比：100 ∶1。EI離子源；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度：150 ℃；電子能量：70 eV；接口溫度：280 ℃；質量范圍：50～600 m/z。

3 結果與討論

3.1 方法學研究 主要針對進樣精密度、樣品重復配制后的重復性以及樣品溶液的穩定性進行研究，以鮮扁豆花為研究對象，將所得的圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012版)，通過各色譜圖之間相似度比值，進而確定方法的適用性。本方法的精密度、重復性和穩定性研究相似度均在0.99以上，說明方法適用性良好。

3.2 各類白扁豆花成分的差異 對鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和干扁豆花的成分進行分析，每個種類的樣品分別重復檢測3次，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012版)對結果進行分析。分析結果見圖1、表1。

注：S1、S2、S3-鮮白扁豆花；S4、S5、S6-凍干白扁豆花；S7、S8、S9-曬干白扁豆花。

表1 各種扁豆花相似度評價結果

從圖1的結果可以看出，鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和干白扁豆花種類內部之間，差異較小，說明該方法的重現性較好；鮮白扁豆花和凍干白扁豆花之間的相似度在0.950以上，說明相似度非常接近；鮮白扁豆花和干白扁豆花之間的相似度在0.720左右，有較大的差異。根據氣相圖譜可以看出，鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和干扁豆花之間成分的種類并無顯著的差異，僅是成分的含量差異較大。從提取溶液的顏色來看，鮮白扁豆花和凍干白扁豆花為綠黃色，而干白扁豆花為淺黃色。

3.3 鮮白扁豆花揮發性成分 本項研究對鮮白扁豆花進行GC-MS分析，得到揮發性成分的總離子流圖(見圖2)。采用NIST標準質譜庫檢索結合文獻資料，對揮發性成分進行定性鑒別，根據正反匹配率≥800，共得到13種成分，成分鑒定結果詳見表2。

圖2 GC-MS總離子流圖

表2 鮮白扁豆花揮發性成分

從表2可以看出，通過GC-MS方法檢測出白扁豆花揮發性成分13種，其主要成分是脂肪酸及其酯，其中含量最高的是棕櫚酸，是一種飽和高級脂肪酸，具有降血清中膽固醇和促進骨折愈合的作用[1]，還可以誘導L6細胞產生胰島素抵抗[2]和抑制肝星狀細胞增殖[3]。月桂酸有較強的抗菌活性，其可通過破壞細胞壁，干擾細胞的信號轉導，調控相關因子的轉錄來發揮殺菌作用，且不易使病原菌產生抗藥性[4]。而肉豆蔻酸具有很好的抗菌作用，常用于治療寒痢、腹脹、腹痛及消化不良等癥狀[5]。棕櫚酸甲酯則是生物柴油、化妝品和植物殺螨劑的原料[6]，同時也是具有抗結核和抗纖維前景的藥物。肉豆蔻油酸具有潛在的控制體質量，預防二型糖尿病、心血管病、酒精性脂肪肝和抗炎等作用。

3.4 提取條件的考察 GC法測定白扁豆花中揮發性成分時，考察了超聲提取、回流提取和索式提取3種方法，根據GC指紋圖譜的檢測結果，發現回流提取的揮發性成分涵蓋超聲提取和索式提取的產物，故上述結果中，僅列出了回流提取的結果。

4 結論

首次通過GC色譜指紋圖譜技術比較鮮白扁豆花、凍干白扁豆花和曬干白扁豆花成分的差異，鮮扁豆花，凍干扁豆花和曬干扁豆花中成分的種類差異不大，但是，鮮白扁豆花和凍干白扁豆花之間的相似度在0.950以上，說明相似度非常接近；鮮白扁豆花和干白扁豆花之間的相似度在0.720左右，具有較大的差異，其中鮮扁豆花成分中含有甘露醇、野漆樹苷、草木犀素-7-O葡萄糖苷等成分，會因儲藏環境和方法不當而導致其質量降低，減弱或改變其藥效[7]。使用質量較低的中藥飲片對患者進行治療可導致其發生多種用藥不良反應，威脅其健康和生命安全[8-9]。因而某些經典名方中特意標注應用鮮白扁豆花，而不是干白扁豆花。而凍干扁豆花則可以減少成分變性和失活，保留藥材的活性成分，而且攜帶方便。綜上所述，若考慮鮮白扁豆花的長久使用性、有效性、便利性，可采用凍干白扁豆花，也使得白扁豆花更好的應用于臨床，提高臨床療效。同時本研究采用了GC-MS方法，鮮白扁豆花共計檢測出13種成分，這些揮發性成分為白扁豆花的藥理和臨床應用提供了理論依據，也為后續的綜合利用提供更充分的理論依據。