骨髓細胞學檢查結合免疫標記對全血細胞減少癥診斷價值研究

王 蕊， 金 芳， 孟 偉， 王 艷

1.河北省第七人民醫院 檢驗科，河北 保定 073000；2.河北醫科大學第二醫院血液內科，河北 石家莊 050000

全血細胞減少癥一般由骨髓造血功能降低導致，根據病理生理特點分為骨髓生成障礙和外周血消耗過多兩種，具有治療起效慢、病程長、易復發等特點，早期明確診斷對指導臨床治療具有關鍵性作用[1]。既往臨床多采用骨髓單個核細胞直接抗人球蛋白試驗對其進行診斷，但敏感度和陽性率相對較低，易出現漏診和誤診。有研究報道，骨髓細胞學檢查結合免疫標記可反映骨髓增生情況、形態及分布特點，可為臨床診斷全血細胞減少癥提供重要依據[2]。本研究旨在探討骨髓細胞學檢查結合免疫標記對全血細胞減少癥的診斷價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2016年12月至2018年12月河北省第七人民醫院收治的200例全血細胞減少癥患者為研究對象。納入標準：符合全血細胞減少癥診斷標準，即血常規檢測中至少1次及以上血紅蛋白<110 g/L，白細胞計數<4×109個/L，血小板計數<100×109個/L；臨床資料完整；患者及其家屬知情同意。排除標準：合并心、肝、腎等重要臟器疾病或內分泌疾病等。根據病因不同，將患者分入造血系統疾病組(n=192)和非造血系統疾病組(n=8)。造血系統疾病組中，男性101例，女性91例，平均年齡(49.08±6.02)歲；非造血系統疾病組中，男性5例，女性3例，平均年齡(50.83±5.16)歲。兩組患者性別比例、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器 Sysmex XN-2000細胞分析儀及配套試劑(日本Sysmex公司)；IMCC-20A專用免疫微柱離心機和37℃專用免疫微柱孵育箱(長春博訊生物技術有限責任公司)，以及配套試劑(上海血液生物醫藥有限公司)。

1.2.2 方法 對所有患者進行骨髓細胞學檢查和免疫標記。骨髓細胞學檢查：采集患者手指末梢外周血涂片，并用骨髓穿刺針在髂前或髂后上棘取材，取骨髓(0.2～0.3 ml)穿刺液涂片，經多部位骨髓穿刺和骨髓活檢，制成厚薄均勻的骨髓涂片后劉氏染色，進行骨髓細胞形態學觀察，并根據需要進行細胞化學染色，觀察有核細胞增生程度及是否存在特殊細胞，觀察骨髓增生程度及紅細胞、白細胞等水平。免疫標記：8支微柱凝膠管置入37℃專用免疫微柱孵育箱15 min后，再置入專用免疫微柱離心機內離心，離心速度和時間均嚴格按照廠商推薦標準執行，離心后骨髓細胞均勻沉于微柱管底部為陰性，懸浮于凝膠表面或凝膠中間為陽性。

1.3 觀察指標 比較兩組患者的外周血血小板計數、紅細胞計數、白細胞計數、血紅蛋白水平，計算骨髓細胞學、骨髓細胞學+免疫標記的診斷準確率。

2 結果

造血系統疾病組外周血血小板計數、紅細胞計數、白細胞計數、血紅蛋白分別為(31.26±5.82)×109個/L、(2.03±0.41)×1012個/L、(2.12±0.34)×109個/L、(67.81±8.12)g/L，均低于非造血系統疾病組的(45.25±6.89)×109個/L、(2.77±0.72)×1012個/L、(2.58±0.42)×109個/L、(81.13±7.27)g/L，差異有統計學意義(P<0.05)。骨髓細胞學診斷準確率為98.00%(196/200)，骨髓細胞學+免疫標記診斷準確率為100.00%(200/200)。

3 討論

全血細胞減少癥是指外周血中紅細胞、白細胞、血小板均不同程度減少的疾病的總稱，是臨床比較常見的一種血液學表現。目前認為，全血細胞減少癥的主要病因是再生障礙性貧血、急性白血病、骨髓增生異常綜合征、肝硬化、感染、腫瘤等[3]。了解全血細胞減少癥的病因對診斷、鑒別診斷、治療措施的實施及預后的評價十分重要[4]。既往臨床對全血細胞減少癥的病因診斷首先需要對外周血進行檢查，判斷是否全血細胞減少，再根據患者外周血血象特點初步判斷病因[5]；然后根據臨床表現確定檢查項目，如骨髓象檢查、免疫球蛋白檢查等；如仍未明確病因診斷，則需要開展免疫標記檢驗、染色體檢驗、溶血試驗、抗核抗體譜及其他自身抗體檢查等[6]。

近年來，骨髓細胞學檢查在血液疾病的診斷中發揮了重要的作用，其能夠清晰顯示骨髓細胞形態學改變，有助于提升患者的臨床診斷準確率。骨髓細胞形態學檢查通過制備骨髓涂片并進行觀察，區分形態學的特征及血細胞的類型。形態學檢驗結合免疫標記、遺傳學及分子生物學技術是非常重要的檢驗手段，甚至是某些疾病診斷或鑒別診斷的“金標準”[7]，但如今，由于過度追求檢驗的經濟效益和時效性，再加上自動化理念的引導，部分醫院出現了不重視形態學的現象。骨髓細胞學檢查和免疫標記結合應注重質量控制。一是分析前質量控制。通過加強培訓，對新上崗的臨床醫師及樣本護送人員進行必要的培訓，只有提供完整的臨床資料和合格的檢驗樣本，才能使檢驗報告更加及時、準確、可靠。骨髓涂片到達細胞室后，及時對其進行登記和編號，認真核對申請單與樣本是否屬同一患者，最好把編號和患者姓名一同寫在玻片上，以便在閱片時進行二次核對。二是分析中質量控制。在進行顯微鏡檢查時，閱片前應仔細閱讀臨床資料，不詳之處及時與臨床醫師溝通，從基本病史和普通檢查中發現有價值的線索，有關細胞形態學和細胞化學染色結果的判斷需要由專業資質人員出具檢驗報告，并由雙人審核簽發檢驗報告單。三是分析后質量控制。原始資料做好標記并歸檔保存至少10年，未染色的涂片建議保存1年，以備查證、外送會診或加作其他項目。

本研究結果顯示：骨髓細胞學診斷準確率為98.00%(196/200)，骨髓細胞學+免疫標記診斷準確率為100.00%(200/200)。這提示，骨髓細胞學檢查結合免疫標記診斷全血細胞減少癥的準確率高，有助于提升臨床診斷效果。本研究優勢在于，操作過程中完善全血細胞減少癥首診處理程序，根據全血細胞減少癥的程度明確本院有無診斷和治療條件，根據患者的臨床表現特征，采取正確、合理的檢查手段，為盡快明確病因診斷提供了基礎；同時，骨髓細胞學檢查全面質量控制，制定計劃，明確預期目標，確保報告正確率。

綜上述所，骨髓細胞學檢查結合免疫標記對全血細胞減少癥的診斷價值較高，有較好的臨床應用價值。