石蠟切片技術在開放性實驗教學中的應用

何琳莉 黃一凡

摘 要：在組織學和病理學研究中，石蠟切片技術是一種常用的實驗技術。為了實現對學生實驗動手能力的更好培養，更好地幫助其將所學理論知識與實踐緊密結合起來，文章試圖就石蠟切片技術在開放性實驗教學中的應用展開深入的研究探討，幫助學生將該技術的實驗原理、方法牢固掌握，從而為后續免疫組化開放性實驗的開展奠定堅實的基礎。

關鍵詞：病理學 石蠟切片技術 開放性實驗教學

在各種切片制作方法中，石蠟切片技術是一種應用最為普遍的技術。該技術不僅用于病理學、生命科學領域對細胞組織形態變化的觀察，在其他諸多學科領域中也獲得了較為廣泛的應用，在臨床手術中是一種不可或缺的重要診斷方法[1]。將石蠟切片技術應用到開放性實驗教學中來，幫助學生將切片的制作過程順利掌握，學會判斷切片質量好壞。同時學生通過動手制作切片以及閱片，有助于將學生的積極性有效調動起來，以達到培養學生動手實踐能力的目的。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑和器材

試劑：10%甲醛水溶液、75%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠以及石蠟等。

材料：蓋玻片、載玻片、正常小白鼠腎組織標本。

器材：水浴箱、包埋機、烤箱以及萊卡輪轉切片機等。

1.2 實驗過程

取材固定、清晰脫水、透明浸蠟、包埋切片、染色封片等是石蠟切片技術的主要步驟[2]。第一步，教師將石蠟切片技術的原理、石蠟切片的詳細制作過程對學生進行一個細致的介紹，讓學生對該技術有一個大概的認識和了解;第二步，教師借助多媒體播放教學視頻讓學生觀看石蠟切片技術的整個操作步驟以及學習以怎樣的標準來對切片的質量加以判斷;第三步，分小組在教師的安排下前往醫院病理科實地觀摩怎樣制作切片;第四步，在教師指導下于實驗室親自動手運用石蠟切片技術制作石蠟切片。

1.3 實驗步驟

（1）取材固定：取病理科闌尾手術標本作為實驗材料，組織厚度大概為0.2～0.3cm。然后使用10%甲醛對闌尾組織加以固定。固定的目的在于使實驗材料保持固有的結構和形態[3]。

（2）清洗脫水：具體步驟是80%乙醇2h→95%乙醇Ⅰ2h→95%乙醇Ⅱ2h→無水乙醇Ⅰ30min→無水乙醇Ⅱ30min。這一步至關重要，主要目的是為了使組織材料的急劇收縮得以減少，應按照由低到高濃度遞增這樣的順序進行。

（4）透明浸蠟：二甲苯透明0.5h→石蠟Ⅰ1h→石蠟Ⅱ1h→石蠟Ⅲ1h→浸蠟（設置溫度為58℃）。

（5）包埋切片：學生在教師的指導下疊包埋用的材料，然后進行包埋。包埋的時候需要注意順時針對盛有石蠟和組織材料的小瓶輕輕搖晃，搖晃之后倒入事先疊好的包埋材料中，然后把包埋材料緩緩浸入事先準備好的冷水之中，不能完全浸入，直到表層石蠟凝固為止，隨后包埋好的蠟塊再使用刀片加以修整。

（6）染色封片：具體步驟是二甲苯Ⅰ0.25h→二甲苯Ⅱ0.25h→無水乙醇Ⅰ2min→無水乙醇Ⅱ2min→95%乙醇Ⅰ1min→80%乙醇Ⅰ1min→自來水沖洗1min→蘇木素、蒸餾水洗0.25h→蒸餾水洗→1%鹽酸乙醇加以分化→自來水沖洗→1%稀氨水予以返藍→流動自來水沖洗→蒸餾水洗→0.5%伊紅2min→自來水沖洗→80%乙醇20s→95%乙醇30s→無水乙醇Ⅰ1min→無水乙醇Ⅱ1min→二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ3min→最后使用中性樹膠予以封片。染色的主要目的在于讓細胞組織內不同結構能夠呈現出不一樣的顏色，便于學生觀察。

2 結果

本次開放性實驗教學中，石蠟切片技術的教學過程開展順利，達到了預期的教學效果。相較于以前只可以從書本上看到動物組織的顯微結構，此時通過教師的講授、觀看教學視頻、實地參觀最后再在教師的引導下自己動手操作。由于是學生自己動手制作出來的切片，所以使學生對該技術產生了更加深刻的印象，極大地提升了學生對開放性實驗的參加興趣。石蠟切片技術操作簡便，同時有著較強的實用性，將其應用到開放性實驗教學中來，有著尤為深遠的意義。

3 討論

在傳統的實驗教學中，大多是學生肉眼觀察已經制作好的大體標本或者是在顯微鏡下觀察已經事先染色好的組織切片，這樣的教學模式自然很容易使得學生認為太過枯燥無味，未能將實驗教學注重培養學生實驗操作能力的特點很好地體現出來。而將石蠟切片技術應用到開放性實驗教學中來，讓學生能夠親自動手參與到組織制片以及HE染色過程中來，無疑更容易將學生的學習興趣很好地調動起來。同時，在自己動手實驗這個過程中，也有利于學生對照所學知識來判斷切片的質量，了解每一張切片背后都有一個復雜的制作過程，使學生更加真切地認識到組織切片的來之不易，以及其在臨床診斷中的重要性，畢竟直接關乎到病人病情的診斷。

項目名稱：2017年川北醫學院開放性實驗項目;項目編號：川北醫教[2017]7號：10。

參考文獻：

[1] 劉浩，董文文，鐘勝華，等.快速石蠟切片技術在病理檢驗中的臨床價值[J].深圳中西醫結合雜志，2019，29（12）：88-89.

[2] 王秀文.石蠟切片法中染色技術的改良[J].植物研究，2015，35（01）：158-160.

[3] 金銀姬，陳立本，劉曉慶，等.快速石蠟切片技術在病理檢驗中的應用[J].動物醫學進展，2012，33（12）：211-213.

川北醫學院病理教研室（川北醫學院附屬醫院病理科） （四川省南充市 637000）