不同材質營養袋中全腸外營養液維生素C穩定性考察*

王志恒，劉曉妍，邱 博，楊浩天，龐國勛△

（1.河北省人民醫院藥學部，河北 石家莊050000；2.上海和睦家新城醫院，上海200120）

當胃腸功能嚴重障礙時，腸外營養（PN）可通過胃腸道以外的途徑即靜脈途徑提供機體所需營養物質，改善預后［1］。當患者必需的所有營養物質均從胃腸外途徑供給時，稱為全腸外營養（TPN）。維生素C是體內有效的還原劑，在保護和維持體內一些重要抗氧化物質處于還原狀態中起著重要作用［2］。目前，臨床根據需要，常將維生素C加入TPN液中，為不耐受腸內營養及伴有腸內營養禁忌的重癥患者提供PN治療［3］。維生素C不穩定，極易氧化，受光照、溫度、時間、包裝材料等多種因素影響，其降解速度由氧、光線、吸收和吸附及催化劑決定［4-5］。維生素A、維生素C等遇到空氣會發生氧化反應，遇到紫外線會逐漸分解，而維生素是TPN液中不可缺少的組成部分，故臨床使用TPN液如需加入維生素時，一定要避光輸注［5-6］。本研究中考察了在相同光照及溫度條件下，不同時間點、不同包裝材料對TPN液中維生素C含量的影響，為TPN液的合理應用提供參考。現報道如下。

1 儀器、試藥與材料

1.1 儀器

New Classic MS型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為萬分之一）；TGL-16型高速離心機（山東百歐醫療科技有限公司）；ACQUITY H-Class型超高效液相色譜(UPLC)儀（美國Waters公司）；FE20型實驗室pH計（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）。

1.2 試藥

脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液（商品名卡文，批號為10MD3889，規格為每袋1 440 mL），甘油磷酸鈉注射液（商品名格利福斯，批號為80ME569，規格為每支10 mL∶2.16 g），均購自費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司；脂肪乳注射液（C14-24）［商品名英脫利匹特（20%），批號為80MF072，規格為每瓶250 mL，主要成分為注射用大豆油50 g，注射用卵磷脂3.0 g，注射用甘油5.5 g，適量氫氧化鈉，注射用水］，復方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）（商品名樂凡命，批號為80MG050，規格為250 mL，主要成分為氨基酸21.25 g，氮3.5 g），均購自華瑞制藥有限公司；10%葡萄糖注射液（華潤雙鶴藥業股份有限公司，批號為C201803193，規格為每瓶100 mL∶10 g/250 mL∶25 g）；濃氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司，批號為Y1805052，規格為每瓶100 mL∶10 g）；氯化鉀注射液（中國大冢制藥有限公司，批號為8186K2，規格為每支10 mL∶1.0 g）；葡萄糖酸鈣注射液（成都倍特藥業有限公司，批號為180202，規格為每支10 mL∶0.1 g）；硫酸鎂注射液（天津金耀集團湖北天藥藥業股份有限公司，批號為1805051，規格為每支10 mL∶2.5 g）；維生素C注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號為72180532，規格為每支5 mL∶1 g，含量＞98%）；維生素C對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100425-201504，規格為100 mg，含量為100%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3 材料

三層共擠三腔輸液袋（Biofine膜，費森尤斯卡比華瑞制藥有限公司，批號為10MD3889）；一次性使用靜脈營養輸液袋［乙烯-醋酸乙烯酯共聚物（EVA）材質，江蘇康進醫療器材有限公司，批號為20180905］；一次性使用靜脈營養輸液袋［聚氯乙烯（PVC）材質，上海曹楊醫藥用品廠，批號為20180815］。

2 方法與結果

2.1 處方

參照TPN液中葡萄糖、氨基酸、脂肪乳及其他成分比例制訂基礎處方（表1），并參考美國食品藥物管理局（FDA）與2003年公布的成人PN多種維生素日需要量推薦建議為200 mg/d［5］，于TPN液中加入維生素C。

2.2 3種包裝材料TPN液配置

在靜脈藥物配置中心，于水平層流臺上，嚴格按無菌操作規程配置。分別將硫酸鎂注射液、葡萄糖酸鈣注射液、氯化鉀注射液、濃氯化鈉注射液及維生素C注射液加入葡萄糖注射液中，注入營養袋內，注入過程中輕輕搖動；將甘油磷酸鈉注射液加入氨基酸注射液中，注入已配置好的營養袋內，注入過程中輕輕搖動；將脂肪乳注射液注入營養袋內，注入過程中不斷搖動；注入完畢，營養袋排氣封口。將配置好的TPN液分別注于EVA與PVC材質一次性使用靜脈營養輸液袋（以下簡稱EVA袋與PVC袋）中。將脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液正放于水平層流臺上，卷起袋子施加壓力，使葡萄糖與氨基酸兩腔垂直封隔打開，2種液體混合均勻；繼續卷動袋子，施加壓力，使脂肪乳隔室的垂直封隔打開；將脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液上下顛倒3次，即混合完全。將配置完成的2種TPN液分別注于PVC袋（A組）、EVA袋（B組）與三層共擠膜營養袋（C組）中，置于室溫（25℃）日常光照下（模擬正常臨床使用情況）。

表1 全腸外營養液處方（mL）Tab.1 The prescriptions of TPN（mL）

2.3 維生素C含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax Eclipse XDB C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：5 mmol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇（60∶40，V/V）；流速：0.7 mL/min；檢測波長：266 nm；柱溫：30℃；進樣量：2μL。

2.3.2 溶液制備

取維生素C對照品20 mg，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得維生素C對照品貯備液；精密吸取1.50 mL維生素C對照品貯備液，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，即得對照品溶液。吸取維生素C注射液0.20 mL，按表1處方加入同比例縮小配置的樣品溶液［即20%脂肪乳注射液（C14-24）17.70 mL，復方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）20.50 mL，10%葡萄糖注射液61.80 mL，甘油磷酸鈉注射液0.48 mL，葡萄糖酸鈣注射液0.15 mL，硫酸鎂注射液0.13 mL，氯化鉀注射液1.25 mL，濃氯化鈉注射液1.04 mL］，吸取1.50 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，吸取適量轉移至離心管中，12 000 r/min離心10 min，取上清液，0.22μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。按供試品溶液制備方法制備去除維生素C的陰性對照品溶液。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取2.3.2項下溶液，按2.3.1項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖（圖1）。結果陰性對照無干擾，表明方法專屬性良好。

線性關系考察：分別精密吸取2.3.2項下維生素C對照品貯備液0.125，0.25，0.5，1.0，1.5，3.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，得終濃度為5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，80.0μg/mL的維生素C溶液，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分色譜峰面積（Y）為縱坐標、對照品質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=1.282 210 4X+2.830 510 3，r=0.999 9(n=6）。結果維生素C質量濃度在5.0～80.0μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2.3.2項下對照品溶液，按2.3.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果維生素C峰面積的RSD為1.75%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：按2.3.2項下方法平行制備6份供試品溶液，按2.3.1項下色譜條件下進樣測定。結果維生素C含量的平均值為58.9μg/mL，RSD為2.37%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一批（批號為72180532）維生素C注射液，精密量取6份，每份50μL，置10 mL棕色容量瓶中，取維生素C對照品10 mg，精密稱定，分別加入6份維生素C注射液中，加流動相稀釋至刻度，準確稀釋100倍，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，并計算含量和回收率。結果見表2。

圖1 超高效液相色譜圖1.vitamin CA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 UPLC chromatograms

表2 維生素C加樣回收試驗結果（n=6）Tab.2 Recovery test of vitamin C（n=6）

2.4 穩定性考察

外觀考察：分別于制備后0，2，4，6，8，24 h時對2.2項下各組TPN液取樣，肉眼觀察溶液。結果3組TPN液顏色均無變化，無分層、沉淀、絮凝現象發生。

pH值測定：分別于制備后0，2，4，6，8，24 h時對2.2項下各組TPN液取樣，平行3份，使用pH計測量pH值。結果見表3。3組各時間點組間比較，差異無統計學意義(P＞0.05)；3組各時間點組內比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。

表3 TPN液pH值測定結果（±s，n=3）Tab.3 Determination results of pH value of TPN（±s，n=3）

表3 TPN液pH值測定結果（±s，n=3）Tab.3 Determination results of pH value of TPN（±s，n=3）

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維生素C含量測定：分別于制備后0，2，4，6，8，24 h時吸取2.2項下各組TPN液2.0 mL，置10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，依法制備供試品溶液，按2.3.1項下色譜條件進樣測定含量，計算不同時間各組溶液中維生素C的相對含量（以每組0 h含量計為100%，計算各時間點的相對百分含量）。結果見表4。可見，3組維生素C的含量均隨時間的延長而逐漸減少，A組（PVC袋）TPN液中維生素C含量下降最明顯，在室溫下放置2 h時降至91%，6 h時降至71%，24 h時降至33%；B組（EVA袋）維生素C含量下降較緩慢，4 h時降至90%，6 h時降至86%，24 h時降至43%；C組（三層共擠膜營養袋）中維生素C含量變化最小，放置24 h時僅降至91%。

表4 TPN中維生素C相對百分含量測定結果（±s，%，n=3）Tab.4 Determination of relative percentage content of vitamin C in TPN（±s，%，n=3）

表4 TPN中維生素C相對百分含量測定結果（±s，%，n=3）Tab.4 Determination of relative percentage content of vitamin C in TPN（±s，%，n=3）

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3 討論

TPN液經靜脈途徑為患者提供水、葡萄糖、氨基酸、脂肪乳、電解質、多種微量元素、維生素及某些藥理營養素（如谷氨酰胺、ω-3脂肪酸等）或藥物（如胰島素），所有這些添加物和添加順序、添加方式及包裝材料均可能影響TPN液的穩定性和相容性［4，7-8］。在進行混合、儲藏及輸注過程中，制劑穩定性有所下降，若實際輸注的營養成分含量不達標，或因成分不穩定而發生某些物理化學變化，會對患者身體造成損傷，甚至威脅生命。目前，影響TPN液穩定性的因素包括各營養成分的降解及脂肪乳的穩定性、TPN液的各項參數(如pH值、不溶性微粒等)，以及營養物質間的穩定性［9-10］。

TPN液成分復雜，影響維生素C含量的因素較多，本研究中以5 mmol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇（60∶40，V/V）為流動相，采用UPLC法短時間完成一次含量分析，相比2015年版《中國藥典（二部）》中的碘量法和滴定法［11］，分離效果及分析效率均更優。通過方法學驗證，本研究中所建立的含量測定方法合理準確、簡便可行。

pH值是影響TPN液穩定性的重要因素。當pH＜5時，會使脂肪乳喪失穩定性；當pH值偏高時，維生素C和維生素B6等結構不穩定，易失效［12］，pH值控制在5.0～6.5時可保持TPN液的相對穩定［10］。本研究中，3組TPN液的pH值范圍為5.50±0.02～5.70±0.02，變化不明顯，介于穩定范圍內，表明不同材質營養袋及維生素C的加入對TPN液的pH值影響較小。

配置TPN液需將多種注射液混合，調配過程中易殘余部分溶液，使實際溶液體積與理論不符，故將各組0 h時維生素C含量記為100%，計算不同時間點的相對百分含量，以減小誤差。不適宜的營養袋材質可能引起TPN液中各活性成分的遷移、附著、吸附，甚至發生化學反應，影響其療效［4］。結果表明，所有材質營養袋中維生素C在24 h內含量均呈下降趨勢。其中，PVC材質營養袋對維生素C含量變化影響最顯著，可能是由于PVC材料較強的吸附性及較差的密封性，導致維生素C的吸附與氧化。EVA材質營養袋中維生素C放置4 h時下降10%，可能與EVA相較于三層共擠膜氧氣更易滲透進入，加速維生素C的氧化有關。三層共擠膜營養袋放置24 h后維生素C含量變化最小，說明相較于其他2種材質，其更適合用于含維生素C的TPN液的保存。由于本試驗未對高、中、低不同濃度維生素C的穩定性進行考察，維生素C的濃度對自身穩定性是否有影響仍有待進一步研究。