CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌組織中的表達及其與預后的關系 ①

王 磊，劉 燕

(1.開封市中心醫院病理科，河南 開封 475000；2.開封市人民醫院腫瘤科，河南 開封 475002)

膀胱癌是泌尿系生殖系統常見惡性腫瘤之一，其發病率居常見惡性腫瘤的第9位，病死率位于13位[1]。隨著生活環境的改變以及醫療水平的進步，使膀胱癌的發生率及檢出率明顯提高，成為影響人們健康狀況的主要疾病[2]。近年來，在膀胱癌的發生、發展中，表觀遺傳學作用機制受到臨床重點關注。抑癌基因表達的降低或其功能喪失，極易誘發各種惡性腫瘤，且在發生、發展中起到關鍵性作用[3]。尾型同源盒轉錄因子2(CDX2)與同源框蛋白A9(HOXA9)是與人類關系最為密切的抑癌基因，其結構改變會促使細胞轉化為惡性。CDX2是人體內特異性表達的核轉錄因子，其表達與調控的過程復雜，是一個多因子、多渠道參與，在基因結構改變以及啟動子區域的甲基化，均會導致CDX2蛋白表達降低[4]。HOXA9蛋白是同源盒基因內的一員，HOX基因可編碼DNA，結合轉錄因子，起到調節基因表達、分化作用[5]。本研究分析CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌組織中的表達及其與預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分析2014-12～2016-12在開封市中心醫院行膀胱癌根治術100例患者的臨床資料。男61例，女39例；年齡40～73歲，平均(58.41±9.18)歲；病變直徑2～7cm，平均(3.97±1.02)cm；低分化25例，中分化16例，高分化59例；淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移72例；T1期25例，T2期31例，T3期28例，T4期16例。另選取同期行良性膀胱炎而進行手術患者100例作為對照組，男65例，女35例；年齡40～75歲，平均(59.01±9.23)歲；兩組患者基線資料比較無統計學意義(P>0.05)，可進行比較。

1.2 納入及排除標準

納入標準：(1)患者術前均未接受放化療治療；(2)所有患者均有膀胱組織標本，具備完整的檢查、治療及隨訪資料；(3)具備隨訪條件。排除標準：(1)術前接受放化療治療；(2)妊娠期或哺乳期女性；(3)伴其他惡性腫瘤者；(4)臨床資料欠缺者。

1.3 檢測方法

CDX2和HOXA9蛋白表達檢測，膀胱癌組留取膀胱癌組織及癌旁組織標本，其標本超過4cm；對照組留取膀胱正常黏膜組織，組織標本以30g/L甲醛溶液固定，石蠟包埋后切片，約4μm。免疫組織化學法測定CDX2和HOXA9蛋白表達，人鼠抗人CDX2單克隆抗體(上海信裕生物科技有限公司)、人鼠抗人HOXA9多克隆抗體(上海煊翎生物科技有限公司)，按照免疫組化學法測定步驟，烤片溫度低于60℃，1～2h。石蠟切片行二甲苯脫蠟，脫水至水化，用PBS沖洗。行抗原修復采用熱修復，阻斷滅活內源性過氧化物酶，將PBS甩去后，加入正常血清工作液37℃，孵育15～20min。滴加CDX2和HOXA9一抗，4℃冰箱內孵育、過夜。雙重染色后，自來水沖洗停止顯色，蘇木素復染，鹽酸酒精進行分化、藍化，脫水、封片，鏡檢，行病理觀察。每個組織切片隨機選取5個染色均勻的高倍視野進行觀察，統計視野內陽性細胞染色情況。陰性：視野內無陽性細胞染色；弱陽性：陽性細胞染色<1/4；中陽性：陽性細胞染色在1/4～1/2；強陽性：陽性細胞染計數超過1/2。低表達：CDX2和HOXA9蛋白陽性細胞染色為陰性或弱陽性；高表達：CDX2和HOXA9蛋白陽性細胞染色為中陽性或強陽性。

1.4 隨訪

膀胱癌組患者均獲得隨訪，無失訪、脫落患者，隨訪至2019年12月31日，統計患者3年累積生存率。

1.5 統計學方法

采用SPSS20.0統計學軟件處理數據，計數資料經n(%)表示，采取χ2檢驗；采用Spearman相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同標本組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率表達

膀胱癌組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率分別為47.0%、65.0%，均高于癌旁組織、正常黏膜組織，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同標本組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率表達[n(%)]

2.2 不同CDX2和HOXA9蛋白表達患者3年累積生存率比較

CDX2和HOXA9蛋白高表達患者3年累積生存率分別為38.10%、39.39%，均低于CDX2和HOXA9蛋白低表達患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同CDX2和HOXA9蛋白表達患者3年累積生存率比較[n(%)]

2.3 CDX2和HOXA9蛋白表達與患者預后的相關性分析

Spearman 檢驗分析，CDX2和HOXA9蛋白表達與患者預后呈正相關性(r=0.401，0.508，P<0.05)。

3 討論

膀胱癌作為危害人類身心健康主要惡性腫瘤，其免疫、放化療取得一定進展，但仍未獲得理想效果，預后差。而且現今膀胱癌存在的腫瘤分子標記物仍不能充分反映惡性腫瘤的生物學特征，給術后輔助治療及預后判斷帶來一定難度。因此，如何開辟一條新的治療途徑，為治療及術后復發提供依據，成為臨床研究熱點。

CDX2蛋白隸屬于尾相關性同源盒基因家族，由3個外顯子及2個內含子組成，以螺旋-環-螺旋方式，與DNA相結合，形成轉錄因子調節DNA的表達。當前CDX2蛋白在胃癌、結直腸癌組織中的具有典型特征基因，并呈陽性表達，且在腸上皮演變逐漸發展至癌變占據著重要作用[6]。HOXA9蛋白是HOX基因的A簇同源盒基因，可調節內皮細胞分化、活化，并具有促使胚胎發育的作用。有研究顯示[7]，HOXA9蛋白對DNA不斷編碼，并與轉錄因子的結合，可能是基因突變或移位，造成DNA編碼錯誤，進而使HOXA9蛋白不斷蓄積，導致HOXA9蛋白呈高表達。CDX2蛋白表達位于正常腸黏膜上皮細胞，是維持腸黏膜正常發育、分化的重要蛋白因子，在正常黏膜組織內無表達。若蛋白水平增加，誘導了黏膜上皮化生，促使腫瘤侵襲性的發生。HOXA9蛋白是調節細胞分化、發育以及增殖的重要調節因子，隨著腫瘤進展，惡性腫瘤的形成，或基因突變及移位，導致編碼錯誤，造成腫瘤細胞內HOXA9蛋白的高表達。本組研究中，膀胱癌組織CDX2和HOXA9蛋白陽性率分別為47.0%、65.0%，均高于癌旁組織、正常黏膜組織，差異有統計學意義(P<0.05)。此次研究結果表明，在膀胱癌組織標本內，CDX2和HOXA9蛋白呈高表達，其陽性率明顯增加。可能是膀胱癌的形成，惡性腫瘤細胞的形成以及遷移，致CDX2和HOXA9蛋白表達升高[8]。張健鋒等[9]研究分析CDX2蛋白與胃癌之間的關系發現，CDX2蛋白表達與胃癌浸潤深度、胃癌的TNM 分期、有無淋巴轉移有關。張盛等[10]研究發現，在漿液性卵巢癌中HOXA9蛋白表達陽性率為75.8%明顯高于良性漿液性腫瘤的34.8%，與卵巢癌的分級和預后轉歸具有一定相關性，差異有統計學意義(P<0.05)。因此CDX2和HOXA9蛋白在惡性腫瘤的發生、進展中占據著重要作用。

患者預后方面，CDX2和HOXA9蛋白高表達患者3年累積生存率分別為38.10%、39.39%，均低于CDX2和HOXA9蛋白低表達患者，差異有統計學意義(P<0.05)。Spearman 檢驗分析，CDX2和HOXA9蛋白表達與患者預后呈正相關性。本研究提示，CDX2和HOXA9蛋白高表達促使膀胱癌的進展，其原因可能是CDX2和HOXA9蛋白高表達會促進惡性腫瘤的生長及侵襲，腫瘤惡性程度高，使患者預后差。因此根據CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌發生、發展中的作用，通過抑制CDX2和HOXA9蛋白的表達，或許可作為治療膀胱癌的新方法。

綜上所述，膀胱癌組織中尾型同源盒轉錄因子2與同源框蛋白A9表達均有所提高，兩種蛋白表達與患者預后密切相關，高表達患者生存率越低，在膀胱癌中的發生、發展中占據著重要作用，并為臨床治療方案的選擇及制定提供新的思路。