組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)預(yù)測(cè)卵巢癌預(yù)后的臨床意義

朱怡

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)的常見(jiàn)惡性腫瘤，其死亡率占女性惡性腫瘤之首，并且在我國(guó)近年來(lái)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅和影響女性的身體健康和生命安全[1]。卵巢癌的發(fā)病無(wú)典型的臨床特征和體征，發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)屬于晚期。CXCL13在結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌和宮頸癌等多種腫瘤浸潤(rùn)，血管形成和腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有明顯的相關(guān)性[2-4]。雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶1b(Dyrk1b)在乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和胃癌等腫瘤呈高表達(dá)，而在正常組織呈表達(dá)或者不表達(dá)，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法對(duì)卵巢癌組織進(jìn)行檢測(cè)，觀察其表達(dá)與臨床病理因素和預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2012年1月至2016年1月在我院行手術(shù)治療的卵巢癌患者116例為卵巢癌組，年齡31～76歲，平均年齡(56.37±12.38)歲；組織類型：漿液性101例，非漿液性15例；分化程度：高分化29例，中分化23例和低分化64例；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期98例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移61例，無(wú)轉(zhuǎn)移55例；腹腔積液：有71例，無(wú)45例。患者均行病理確診卵巢癌；術(shù)前未行化療和放療；病歷資料完整。選擇同期在我院行卵巢良性腫瘤98例，為良性腫瘤組，年齡25～72歲，平均年齡(55.76±14.19)歲；以卵巢良性腫瘤無(wú)病變區(qū)域的組織標(biāo)本30例為對(duì)照組，所有標(biāo)本經(jīng)醫(yī)院病理科高年資的醫(yī)師復(fù)核。

1.2 隨訪分組 卵巢癌患者術(shù)后以門(mén)診、電話和微信等隨訪方式進(jìn)行隨訪，患者均隨訪2年，其中死亡患者62例，為死亡組，生存患者54例為生存組。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 卵巢癌，卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織采用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)行染色。取出石蠟切片，用4 μm切片機(jī)連續(xù)切片，經(jīng)過(guò)脫水和水化后，使用檸檬酸液體進(jìn)行抗原修復(fù)2 min，用PBS沖洗3次，5 min/次，然后經(jīng)過(guò)3%過(guò)氧化氫進(jìn)行水浴10 min，然后用PBS沖洗3次，5 min/次，加入山羊血清50 μl封閉好抗原，并在37℃溫度下孵育，時(shí)間為15 min。去除山羊血清，加入CXCL13和Dyrk1b一抗(1∶100)，在室溫下孵育1 h，用PBS沖洗，在室溫下孵育15 min后，行DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色4～5 min，自來(lái)水沖洗后用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，PBS沖洗后返藍(lán)，梯度乙醇脫水后，使用二甲苯脫水，用中性樹(shù)脂封片，并固定。陽(yáng)性表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)為出現(xiàn)黃色、棕黃色和棕褐色為陽(yáng)性表達(dá)。通過(guò)顯微鏡和圖像采集軟件Zoom Browser Ex在40倍物鏡下，隨機(jī)采取陽(yáng)性部位的圖像，每個(gè)組織隨機(jī)采集10個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞的視野，使用Imagepro Plus圖像分析軟件測(cè)試每個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞視野的灰度值。根據(jù)參考文獻(xiàn)[6]，計(jì)算出代表陽(yáng)性染色的相對(duì)陽(yáng)性單位(positive unit，PU)，每張切片陽(yáng)性密度最高的區(qū)域隨機(jī)選擇5個(gè)視野，并求出平均值PU。

1.4 觀察指標(biāo) 比較3組表達(dá)CXCL13和Dyrk1b量的差別，卵巢癌組織表達(dá)CXCL13和Dyrk1b量與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系，隨訪2年后生存組和死亡組的差異，預(yù)測(cè)死亡的靈敏度和特異性。

2 結(jié)果

2.1 3組組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量比較 卵巢癌組組織表達(dá)CXCL13和Dyrk1b的量明顯高于良性卵巢瘤組和正常對(duì)照組(P<0.01)，而良性腫瘤組明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 3組組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量比較 PU值,

2.2 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量與臨床指標(biāo)的關(guān)系 卵巢癌組織表達(dá)CXCL13和Dyrk1b量與分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液、CA125水平和對(duì)化療藥物敏感性具有明顯的相關(guān)性(P<0.01)，而與年齡年齡、絕經(jīng)、組織類型和腫瘤直徑無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)圖1，表2。

表2 卵巢癌患者組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量與臨床指標(biāo)的關(guān)系 PU值,

2.3 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量與預(yù)后的關(guān)系 死亡組的卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量明顯高于生存組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量與預(yù)后的關(guān)系 PU值,

2.4 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量在預(yù)測(cè)預(yù)后的臨床價(jià)值 卵巢癌組織表達(dá)CXCL13和Dyrk1b量在預(yù)測(cè)死亡方面，通過(guò)受試者曲線進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量在預(yù)測(cè)死亡具有較高的靈敏度和特異性，并且發(fā)現(xiàn)兩個(gè)指標(biāo)通過(guò)二元Logistic分析得曲線0.265X CXCL13+0.216XDyrk1b-19.111，形成聯(lián)合檢測(cè)指標(biāo)，其靈敏度87.1%，特異性88.9%，曲線下面積明顯優(yōu)于單純指標(biāo)CXCL13(Z=2.200，P=0.028)和Dyrk1b(Z=2.573，P=0.010)，而在預(yù)測(cè)死亡方面CXCL13和Dyrk1b兩指標(biāo)無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表4，圖2。

表4 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量在預(yù)測(cè)預(yù)后的臨床價(jià)值

3 討論

卵巢癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤，由于卵巢癌位置較深，早期癥狀不典型，發(fā)現(xiàn)往往屬于晚期，所以卵巢癌是婦科預(yù)后較差的惡性腫瘤。趨化因子參與了腫瘤的血管形成，在腫瘤細(xì)胞黏附，侵襲，增殖和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中具有重要的作用。CXCL13是趨化因子中的重要成員，在調(diào)節(jié)炎癥和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面具有作用，對(duì)腫瘤的血管形成和腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有重要作用[7]。本研究表明卵巢癌組織標(biāo)本表達(dá)CXCL13的量明顯高于卵巢良性腫瘤和正常對(duì)照組，并且發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織表達(dá)CXCL13量與分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液、CA125水平和對(duì)化療藥物敏感性具有明顯的相關(guān)性，說(shuō)明CXCL13參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，并且與卵巢癌的惡性程度具有相關(guān)性，同時(shí)本研究提示CXCL13指標(biāo)顯示CXCL13與卵巢癌患者化療耐藥具有一定的聯(lián)系。對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織表達(dá)CXCL13明顯高于正常組織，并且發(fā)現(xiàn)與患者的預(yù)后不良具有顯著的關(guān)系[7]。另一項(xiàng)肺癌的研究中，發(fā)現(xiàn)CXCL13在肺癌組織的表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常肺組織，并且其陽(yáng)性率與腫瘤的分化程度，脈管內(nèi)癌栓和淋巴轉(zhuǎn)移等具有相關(guān)性[9]。本研究還發(fā)現(xiàn)2年隨訪出現(xiàn)死亡患者卵巢癌組織CXCL13表達(dá)量明顯高于存活者，說(shuō)明CXCL13表達(dá)量與患者的預(yù)后密切相關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織CXCL13表達(dá)量在預(yù)測(cè)患者2年死亡方面具有較高的靈敏度和特異性，當(dāng)卵巢癌組織標(biāo)本CXCL13蛋白表達(dá)量>38.6 PU，其靈敏度79.0%，特異性88.9%，曲線下面積0.881，說(shuō)明當(dāng)卵巢癌組織標(biāo)本表達(dá)CXCL13到一定的量，可能預(yù)示著預(yù)后不良，提示我們對(duì)這部分患者進(jìn)行早期干預(yù)。

圖2 卵巢癌組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量在預(yù)測(cè)死亡的效能

本研究還顯示卵巢癌組織Dyrk1b表達(dá)量明顯高于卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織，并且發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織Dyrk1b表達(dá)量與分化程度、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹腔積液、CA125水平和對(duì)化療藥物敏感性具有明顯的相關(guān)性，說(shuō)明Dyrk1b不僅參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，還與卵巢癌患者的預(yù)后和化療耐藥具有明顯的相關(guān)性。Dyrk1b是屬于Minibrain/Dyrk家族成員，具有11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子，除骨骼肌細(xì)胞外在大多數(shù)細(xì)胞呈低表達(dá)，而在結(jié)腸癌，宮頸癌，肺癌和卵巢癌等腫瘤中呈高表達(dá)，在卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平是正常卵巢上皮細(xì)胞的2～17倍[14]。在一項(xiàng)小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)將Dyrk1b敲除的小鼠為引起明顯的表型改變，提示Dyrk1b對(duì)生存能力并無(wú)明顯影響，不是生存必須的蛋白，但對(duì)卵巢癌的發(fā)生發(fā)展具有關(guān)鍵作用[11]。在一項(xiàng)研究中顯示宮頸癌組織Dyrk1b表達(dá)量與化療耐藥具有明顯的相關(guān)性[12]。Dyrk1b在對(duì)宮頸癌患者的影響，顯示隨著并且的進(jìn)展Dyrk1b陽(yáng)性表達(dá)率越高，使用Dyrk1b抑制劑能夠明顯抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞的凋亡[13]。本研究還顯示在卵巢癌患者死亡組卵巢癌組織Dyrk1b表達(dá)量明顯高于存活組，說(shuō)明卵巢癌組織Dyrk1b表達(dá)量是卵巢癌預(yù)后的重要指標(biāo)。本組研究在研究卵巢癌組織Dyrk1b表達(dá)量在預(yù)測(cè)死亡方面的研究，但Dyrk1b表達(dá)量>43.17PU時(shí)，其預(yù)測(cè)2年內(nèi)死亡靈敏度為79.0%，特異性79.6%，曲線下面積0.862，說(shuō)明卵巢癌組織Dyrk1b表達(dá)在預(yù)測(cè)預(yù)后方面具有重要參考價(jià)值。本研究還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量在預(yù)測(cè)2年死亡方面明顯優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)預(yù)測(cè)，其靈敏度高達(dá)87.1%，特異性88.9%，曲線下面積0.935，說(shuō)明聯(lián)合檢測(cè)能夠提高預(yù)測(cè)不良預(yù)后的效能。

綜上所述，CXCL13和Dyrk1b參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測(cè)組織CXCL13和Dyrk1b表達(dá)量對(duì)預(yù)后判斷具有重要的臨床價(jià)值。