血清miR-125b、miR-410水平與視網(wǎng)膜靜脈阻塞患者預(yù)后的關(guān)系

韓月圣 方立建 張佳男 王梅 吳霞 王坤 陳金秋

視網(wǎng)膜靜脈阻塞(retinal vein occlusion，RVO)是一種常見的視網(wǎng)膜血管性疾病，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜靜脈迂曲擴(kuò)張、視網(wǎng)膜出血和水腫，是第二大常見視網(wǎng)膜血管病。RVO在老年人中發(fā)病率較高，與高血壓、高血脂、糖尿病、動脈粥樣硬化等疾病發(fā)生有關(guān)。RVO治愈率低，且RVO患者預(yù)后與患病嚴(yán)重程度、就診時(shí)間、并發(fā)癥等多種因素有關(guān)[1]。因此，探究RVO預(yù)后相關(guān)因子對臨床檢測RVO患者患病嚴(yán)重程度、評估預(yù)后、制定治療方案有重要意義。微小RNA(micro RNA，miRNA)是一種能調(diào)控多種生物代謝途徑的短鏈非編碼RNA。Li等[2]研究發(fā)現(xiàn)，miR-125b抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，在動脈粥樣硬化癥中發(fā)揮重要作用。研究報(bào)道，miR-125b可通過靶向Ets 1載脂蛋白合成，下調(diào)血漿脂蛋白表達(dá)，降低冠心病、再狹窄發(fā)生率[3]。另有研究發(fā)現(xiàn)，下調(diào)miR-410表達(dá)可抑制低密度載脂蛋白表達(dá)，促進(jìn)人臍靜脈細(xì)胞增殖，減少凋亡[4]。miR-410過表達(dá)與視網(wǎng)膜血管環(huán)路減少、新生血管及內(nèi)皮細(xì)胞減少有關(guān)[5]。本研究通過檢測與血管內(nèi)皮、血脂、動脈粥樣硬化相關(guān)因子miR-125b及miR-410在RVO患者血清中表達(dá)水平，探究二者與RVO疾病進(jìn)展及RVO患者預(yù)后關(guān)系，為RVO疾病治療及RVO患者預(yù)后評估提供一定幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月至2019年3月本院收治的RVO患者103例不患病組，其中男49例，女54例；年齡29～72歲，平均年齡(51.82±11.34)歲。根據(jù)分型標(biāo)準(zhǔn)[6]，按RVO發(fā)生部位不同分為中央視網(wǎng)膜靜脈阻塞(central retinal vein occlu-sion，CRVO)組35例，半側(cè)視網(wǎng)膜靜脈阻塞(hemi-retinal vein occlusion，HRVO)組32例，分支視網(wǎng)膜靜脈阻塞(branch retinalvein occlusion，BRVO)組36例。按是否缺血分為缺血型組43例，非缺血型組60例。按患有并發(fā)癥類型分類黃斑囊樣水腫47例，玻璃體出血20例，新生血管18例，新生血管性青光眼5例，未患有并發(fā)癥13例。另選取同期在本院體檢顯示健康者103例作為對照組，其中男51例，女52例；年齡28～73歲，平均年齡(52.94±12.03)歲。患病組與對照組年齡、性別比比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。所有受試者均對本研究知情并簽署知情同意書，本研究經(jīng)中國核工業(yè)北京四零一醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)臨床診斷確診為RVO者；(2)均為單眼發(fā)病；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并患有其他眼視網(wǎng)膜疾病者；(2)患有心腦血管疾病、腎、肝臟功能嚴(yán)重不足者；(3)嚴(yán)重精神疾病患者。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集:清晨(7∶00～9∶00)采集所有受試者外周靜脈血5 ml，在3 000 r/min、4℃條件下離心15 min(離心半徑為13.5 cm)，取上清液分裝于無菌EP管中，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 qRT-PCR法檢測RVO患者血清miR-125b、miR-410表達(dá)水平:Trizol法提取總RNA，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號：RR047a，日本Takara公司)反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用于qRT-PCR反應(yīng)。使用qRT-PCR試劑盒(批號：RR041a，日本TaKaRa公司)，反應(yīng)體系如下：2 μl cDNA，2 μl上游引物，2 μl下游引物，10 μl SYBR Primix Ex TaqTM，0.4 μl ROX，3.6 μl DEPC水。反應(yīng)步驟如下：95℃，8 min，以上1個循環(huán)；95℃，15 s；62℃，38 s；73℃，15 s；以上40個循環(huán)，一個樣品設(shè)置3次重復(fù)。采用2-ΔΔCT法計(jì)算miR-125b、miR-410表達(dá)水平。見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4 預(yù)后判定標(biāo)準(zhǔn) 治療3個月后，將入組RVO患者按是否發(fā)生低視力或盲目分為預(yù)后良好組和預(yù)后不良組。根據(jù)世界衛(wèi)生組織所制定標(biāo)準(zhǔn)[7]，視力0.05～0.3為低視力；視力≤0.05為盲目。

2 結(jié)果

2.1 RVO患者血清中miR-125b、miR-410表達(dá)水平 RVO患病組血清中miR-125b、miR-410表達(dá)水平均明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

表2 對照組和患病組血清中miR-125b、miR-410表達(dá)水平比較

2.2 血清miR-125b和miR-410水平與RVO患者臨床病理特征關(guān)系 不同性別、年齡、不同發(fā)病部位、是否合并糖尿病的RVO患者血清中miR-125b、miR-410表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；治療前視力>0.4、0.1～0.4、<0.1 RVO患者血清miR-125b和miR-410水平依次降低，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；缺血型RVO患者血清miR-125b、miR-410表達(dá)水平均明顯低于非缺血型RVO患者(P<0.05)；合并高血壓、高血脂RVO患者血清miR-125b和miR-410水平明顯低于未合并高血壓、高血脂RVO患者(P<0.05)；有并發(fā)癥RVO患者miR-125b、miR-410表達(dá)水平顯著低于無并發(fā)癥RVO患者(P<0.05)。見表3。

表3 血清miR-125b和miR-410水平與RVO患者臨床病理特征關(guān)系

2.3 血清miR-125b和miR-410水平與RVO患者預(yù)后關(guān)系 預(yù)后不良組患者血清miR-125b、miR-410表達(dá)水平及預(yù)后視力均顯著低于預(yù)后良好組患者(P<0.05)。見表4。

表4 miR-125b和miR-410水平與RVO患者預(yù)后關(guān)系

2.4 影響RVO患者不良預(yù)后危險(xiǎn)因素分析 由Logistic回歸分析可知，本研究合并患有高血壓、出現(xiàn)并發(fā)癥、治療前視力<0.1、miR-125b低表達(dá)、miR-410低表達(dá)均是RVO患者發(fā)生不良預(yù)后危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表5。

表5 影響RVO患者不良預(yù)后危險(xiǎn)因素分析

3 討論

RVO患者主要癥狀為不同程度視力障礙，若不及時(shí)治療，易引起黃斑囊樣水腫、視網(wǎng)膜新生血管、青光眼、玻璃體積血等并發(fā)癥，導(dǎo)致RVO患者視力嚴(yán)重下降。RVO患者會出現(xiàn)視力障礙，阻塞部位、視網(wǎng)膜是否缺血、是否出現(xiàn)并發(fā)癥等均可能影響RVO患者預(yù)后。因此，探究更明確的預(yù)后影響因子和生物標(biāo)志物對RVO患者預(yù)后評估和治療方案確定有重要意義。

研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a在老年性黃斑變性患者眼球中表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)miR-146a抑制VEGF表達(dá)，可能是老年性黃斑變性診斷標(biāo)志物[8]。大腦中動脈阻塞后大鼠腦組織中miR-195表達(dá)明顯下調(diào)，miR-195過表達(dá)抑制靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞體外侵襲和成管能力[9]。以上研究表明，miRNA在視網(wǎng)膜及血管障礙疾病中有重要作用。有研究表明，miR-215b在嬰兒血管瘤組織中低表達(dá)，過表達(dá)可抑制血管瘤細(xì)胞生長[10]。

叢輝等[11]在冠狀動脈粥樣硬化性心臟病研究中發(fā)現(xiàn)，冠狀動脈無狹窄組患者miR-125b表達(dá)水平明顯高于狹窄組患者，且隨冠狀動脈病變程度加深，miR-125b表達(dá)水平逐漸降低。本研究結(jié)果顯示，RVO患者血清中miR-125b表達(dá)水平顯著低于對照組，與叢輝等[11]研究結(jié)果相似，提示miR-125b表達(dá)水平可能與RVO患者患病有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-125b在化膿性汗腺炎組織中低表達(dá)，可能在化膿性汗腺炎中發(fā)揮調(diào)控作用，可能與疾病發(fā)生中炎癥通路有關(guān)[12]。研究表明，體外過表達(dá)miR-125b可降低VEGF表達(dá)和膽管細(xì)胞增殖，為膽道疾病中異常膽管細(xì)胞生長提供治療方法[13]。有研究證實(shí)，過表達(dá)miR-125b可通過調(diào)控上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移[14]。提示miR-125b水平下降可能通過調(diào)控視網(wǎng)膜炎性反應(yīng)、VEGF表達(dá)或上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，參與RVO進(jìn)展。

Wu等[15]研究表明，miR-410在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)水平明顯下調(diào)，過表達(dá)miR-410可通過調(diào)控上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，抑制腫瘤生長。本研究結(jié)果顯示，治療前，miR-410在RVO患者血清中表達(dá)水平明顯低于對照組，與Wu等[15]在乳腺癌中miR-410表達(dá)結(jié)果一致。有研究報(bào)道，miR-410過表達(dá)可降低細(xì)胞活力，抑制心肌損傷后線粒體自噬[16]。Hu等[17]在動脈粥樣硬化研究中發(fā)現(xiàn)，下調(diào)miR-410表達(dá)可促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖，抑制凋亡。Dong等[18]研究證實(shí)，miR-410可通過促進(jìn)人臍間充質(zhì)干細(xì)胞增殖，影響肺腺癌細(xì)胞生長。提示miR-410可能通過影響上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，調(diào)控RVO患者視網(wǎng)膜靜脈細(xì)胞或靜脈血管的異常增殖和形成，影響RVO發(fā)生發(fā)展。

缺血型RVO患者預(yù)后視力較非缺血型RVO患者差，缺血型RVO產(chǎn)生黃斑囊樣水腫、新生血管性青光眼等并發(fā)癥可能性更大[19]。高血壓、高血脂、動脈粥樣硬化等疾病是RVO患病危險(xiǎn)因素[20]。本研究結(jié)果顯示，RVO患者血清中miR-125b和miR-410水平與治療前視力、缺血狀態(tài)、高血壓、高血脂及并發(fā)癥情況有關(guān)，提示miR-125b、miR-410表達(dá)水平降低與合并高血壓和高血脂、治療前視力較低、缺血性RVO有關(guān)，可能影響RVO患者預(yù)后情況。本研究還發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良組RVO患者血清miR-125b、miR-410表達(dá)水平顯著低于預(yù)后良好組RVO患者，提示miR-125b、miR-410水平與RVO患者發(fā)生盲目、低視力等不良預(yù)后有關(guān)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)合并高血壓、出現(xiàn)并發(fā)癥、治療前視力<0.1、miR-125b低表達(dá)、miR-410低表達(dá)是影響RVO患者發(fā)生不良預(yù)后危險(xiǎn)因素。進(jìn)一步提示miR-125b、miR-410低表達(dá)可能在RVO患者不良預(yù)后發(fā)生中具有一定作用。

綜上所述，miR-125b、miR-410在RVO患者血清中明顯降低，二者與RVO患者發(fā)生盲目、低視力等不良預(yù)后有關(guān)。但由于本研究樣本量較小、方法較為簡單，具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步驗(yàn)證。