抗結核藥物超敏反應患者PBMCs中T淋巴細胞亞群及CD69、CD40L的表達意義*

吳于青，姜國強，劉 ，周燕紅，張梁偉

(江西省胸科醫院結核科，南昌 330006)

超敏反應是結核病患者在藥物治療過程中常見不良反應之一，約占抗結核藥物不良反應的1/5[1-3]；患者在治療過程中出現超敏反應后，輕者中斷治療延誤病情，而對于出現嚴重的皮膚不良反應患者，如藥物反應伴嗜酸性粒細胞增多和系統癥狀(DRESS)、Sterens-Johnson綜合征(SJS)、中毒性表皮壞死松解癥(TEN)等，則可導致死亡。抗結核藥物超敏反應的發生機制尚不清楚，目前觀點認為主要以遲發型超敏反應為主，由抗原特異性T淋巴細胞介導，在致敏藥物刺激后，藥物特異性的T淋巴細胞活化并在其表面表達多個活化標記物，如CD25、CD69、CD71、CD40L等，淋巴細胞活化后分泌相關的細胞因子，產生炎性反應[4]。

本研究通過對抗結核藥物超敏反應患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中T淋巴細胞亞群Th1細胞、Th2細胞、CD4+CD25+Treg及CD69、CD40L表面分子的表達變化進行檢測，探討抗結核藥物超敏反應的細胞免疫特性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2019年1月至2020年1月符合初治肺結核治療過程中出現超敏反應診斷的患者60例作為病例組，其中男26例，女34例，平均年齡37.9歲(18～65歲)。本研究經過本院倫理委員會討論并通過，所有研究對象均簽訂知情同意書。初治肺結核診斷標準：初治肺結核患者均符合中華人民共和國衛生行業標準-肺結核診斷(WS 288-2017)。抗結核藥物超敏反應的判斷[5-6]：患者臨床表現及實驗室檢查符合2010年出版《中國臨床皮膚病學》中藥物超敏反應的診斷，并由2名專科醫師共同診斷為藥物超敏反應(同時判斷出皮疹的類型)。排除標準：(1)合并獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染者；(2)合并自身免疫性相關疾病或長期服用激素類藥物者；(3)采血前1周內有輸血史或做過PET-CT檢查者；(4)采血前已行抗過敏治療并使用了免疫抑制劑者；(5)既往有藥物過敏史者。對照組選擇同期抗結核治療過程中未出現超敏反應的患者，根據性別、年齡、來源與病例組1∶1匹配，所有患者抗結核治療方案均為2H(異煙肼)R(利福平)Z(吡嗪酰胺)E(乙胺丁醇)/4HR，患者入組以后，統一于清晨空腹用肝素抗凝管采外周靜脈血備檢，標本室溫保存，4 h內送檢。

1.2 方法

采用流式細胞儀檢測PBMCs中Th1細胞比例、Th2細胞比例、CD4+CD25+Treg比例及CD69、CD40表達水平。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 入組患者的一般特征

病例組患者入組后，根據性別、年齡(相差不超過3歲)、患者來源1∶1匹配對照組，使兩組患者具有可比性，兩組患者的一般情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 病例組和對照組患者社會人口統計學特征

2.2 患者PBMCs中Th1細胞、Th2細胞、CD4+CD25+Treg表達比較

經流式細胞儀結果分析，病例組患者PBMCS中的CD4+IFN-γ+Th1細胞比例較對照組明顯升高(P<0.01)，CD4+IL-4+Th2細胞比例較對照組升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，病例組患者PBMCS中CD4+CD25+Treg比例較對照組降低，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 病例組和對照組患者外周血T淋巴細胞亞群表達比較

2.3 患者PBMC中CD40L和CD69的表達比較

經流式細胞儀結果分析，病例組患者PBMCS中的細胞表面CD40L和CD69的表達水平較對照組均明顯升高(P<0.05)，見表3。

表3 病例組和對照組患者PBMCS中的細胞表面CD40L和CD69的表達比較

3 討 論

超敏反應是結核病患者在治療過程中常見的藥物不良反應之一，到目前為止，抗結核藥物導致的超敏反應的發生機制尚不清楚。患者出現超敏反應后往往需要中斷治療，從而導致治療不規則影響我國結核病的防控。臨床觀察發現抗結核藥物超敏反應的臨床表現主要以各種皮膚損害為主，部分患者伴有發熱、肝腎損害、血嗜酸細胞比例升高等[7-8]，符合Ⅳ型(遲發型)超敏反應的表現。目前有觀點認為，藥物作為抗原或半抗原初次接觸T淋巴細胞后引起T淋巴細胞活化，形成藥物特異性T淋巴細胞克隆長期存留于組織和血液中，當記憶性T淋巴細胞再次接觸致敏藥物后便迅速活化并增殖，產生不同的炎癥因子而引起各種臨床表現。CD4+CD25+Treg細胞是一組具有免疫抑制功能的T淋巴細胞，能抑制自身反應性T細胞和B淋巴細胞的活化、增殖、免疫球蛋白的分泌及各種炎性細胞因子的產生。

本研究運用流式細胞儀檢測抗結核藥物超敏反應患者PBMCs中T淋巴細胞亞群、Treg及細胞表面分子CD69、CD40L的表達，并與同期抗結核治療過程中未出現超敏反應的初治肺結核患者比較，結果發現，抗結核藥物超敏反應患者PBMCs中CD4+IFN-γ+Th1細胞比例和細胞表面CD69、CD40L的表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，CD4+CD25+Treg細胞比例低于對照組(P<0.05)，但CD4+IL-4+-γ+Th2細胞比例兩組比較差異無統計學意義(P>0.05)。據此筆者認為，在抗結核藥物超敏反應發生過程中，患者特異性T淋巴細胞表面CD69、CD40L等分子表達上調，細胞活化增殖，其中以Th1細胞活化增殖為主，成為針對此藥物抗原的殺傷性T淋巴細胞,而具有免疫抑制功能的Treg細胞比例下降，外周血中促炎因子分泌增多，而抗炎因子釋放減少，導致組織器官損害，與部分研究結果[9-13]類似。

在細胞免疫中,當抗原提呈細胞(APC)將抗原提呈給幼稚T細胞形成主要組織相溶性復合體-T淋巴細胞受體(MHC-TCR)復合物時,T淋巴細胞表面的CD40L表達上調，一般在復合物形成之后4 h內,T淋巴細胞表面的CD40L與APC上的CD40結合,并刺激APC產生協同刺激分子,在抗原信號及協同信號雙重作用下,T淋巴細胞被激活為針對某種抗原的殺傷T淋巴細胞,產生相應的細胞因子而發揮效應功能。由于抗結核藥物是聯合運用，患者在抗結核藥物超敏反應發生后，致敏藥物的快速識別一直是工作中的難點，本研究中，抗結核藥物超敏反應患者外周血T淋巴細胞表面CD69、CD40L等分子表達迅速增加聚集，并較好地體現出此類患者機體的免疫應答，提示檢測該類分子在遲發型超敏反應患者外周淋巴細胞中的改變可用于遲發型超敏反應的診斷及致敏藥物的識別，這也是筆者今后研究的方向。

CD4+T淋巴細胞根據其產生的細胞因子分為不同的亞群：Th1細胞、Th2細胞和Treg等，其中Th1細胞和CD4+CD25+Treg的比率決定了免疫反應的發生和程度，以及疾病的進程[14-16]。本研究顯示抗結核藥物超敏反應發生過程中患者以Th1淋巴細胞活化增殖為主，變化符合遲發型超敏反應發生特點，下一步將繼續對相關的細胞因子表達水平進行研究，將來基于誘導或增強能夠抑制過敏性炎性反應的Treg的新型治療策略也許是可取的。