板芩金蕎口服液最佳提取工藝研究

姚靜，王繼安，唐瀛，吳衛東，李州

（1.菏澤市動物疫病預防控制中心山東菏澤 274000；2.鄄城縣畜牧服務中心山東菏澤 274600；3.山東省菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院山東菏澤 274000）

板芩金蕎口服液是根據中醫辨證理論，通過大量反復實踐研發的新獸藥，主要由板藍根、魚腥草、黃芩、金蕎麥等十一味藥材組成，具有清熱解毒、利尿通淋、健脾補腎、提高機體免疫力之功效[1,2]，對腎型雞傳染性支氣管炎有很好的防治效果。本試驗采用正交試驗設計，以干膏收率、（R，S）-告依春、黃芩苷的含量為指標，對提取工藝進行優選，旨在建立更科學、更有效的提取工藝，為板芩金蕎口服液申報新獸藥提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器安捷倫1100 型高效液相色譜儀；HH-2 型恒溫水浴鍋（江蘇金壇江南儀器廠）；ME104 型電子天平（梅特勒-托利多）；202 型電熱恒溫鼓風干燥箱（濰坊精鷹）；YZN50 動態熱回流提取濃縮煎藥機（宏圖藥化）。

1.1.2 材料板藍根、魚腥草、黃芩、金蕎麥等十一味中藥材均購自菏澤市醫藥公司藥材批發部，經鑒定均符合《中華人民共和國獸藥典》2015 年版有關規定；（R，S）-告依春（批號111753-201603）及黃芩苷對照品（批號110715-201602）均購自中國食品藥品檢定研究院，水為超純水，甲醇等為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 口服液水提工藝考察按照處方比例分別稱取各藥材9份，按表1 黃芩熱浸后混同群藥一起進行動態熱回流提取[3]，主要考察提取次數、提取時間、加水量3 個因素，并選擇三個水平進行L9（34）正交試驗，以干膏收率、（R，S）-告依春、黃芩苷含量為評價指標，篩選最佳提取工藝條件，因素水平見表1。

表1 因素水平表

1.2.2 板藍根的含量測定色譜條件：色譜柱為安捷倫C18（300mm×4.0mm，10μm），以甲醇-磷酸溶液（10:90:0.02）為流動相；檢測波長為245nm；流速為1.0mL/min；柱溫為室溫，理論板數按（R，S）-告依春峰計算應不低于5,000[4]。

對照品溶液的制備：取（R，S）-告依春對照品適量，精密稱量，加甲醇制成每1mL含40μg 的溶液，即得。

供試品溶液的制備：精密量取本品2mL，置25mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

1.2.3 黃芩苷的含量測定色譜條件：色譜柱為安捷倫C18（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（45:55:0.6）為流動相；流速為1.0mL/min；紫外檢測波長為278nm；柱溫為室溫，理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2,000[5]。

對照品溶液的制備：精密稱取黃芩苷對照品適量，置100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲振蕩使溶解，放至室溫，用50%甲醇稀釋制成每1mL含80μg 的溶液。

供試品溶液的制備：精密量取本品2mL，置100mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀測定，即得。

2 結果

2.1 口服液水提工藝考察

結果見表2、3。由直觀分析表明，各因素對提取效果的因素大小順序為加水量＞提取次數＞提取時間，經方差分析，加水量對提取效果有極顯著影響（P＜0.01）；而提取次數和提取時間對提取效果的影響較小，各水平間差異不顯著，考慮到大生產需要節約時間和能源，降低成本，提取工藝確定A2B2C3，為藥材加12 倍量水提取2 次，2h/ 次。

2.2 驗證性試驗結果

按照處方比例分別稱取各藥材3 份，根據正交試驗確定的最佳提取工藝，即黃芩熱浸后混同群藥材加12 倍量水動態熱回流提取2 次，2h/ 次，進行放大驗證試驗，結果見表4。3 批樣品的平均干膏收率為27.8%，RED 為0.40%；（R，S）-告依春的平均含量為

表2 正交試驗結果

表3 方差分析

4 工藝驗證結果

3 討論

中藥有效成分復雜，提取工藝路線的設計關系到中藥制劑的質量及臨床療效，不當的提取工藝不僅耗時長、有效成分含量低、提取效率不高，而且會影響臨床療效，是復方中藥制劑的關鍵技術[6]。本研究所選處方中板藍根清熱解毒，輔以黃芩增強其消腫利咽之功效，為本制劑的君藥，現代藥理學研究表明，（R，S）-告依春是板藍根主要抗病毒活性成分[7]，黃芩苷是黃芩中的主要藥效活性成分[8]，干膏收率是中藥提取的一個重要指標，在一定程度上反映藥材的優劣，因此本研究將干膏收率、（R，S）-告依春、黃芩苷含量作為工藝考察的評價指標，通過正交試驗設計篩選最佳提取工藝，同時考慮生產成本，最終得到板芩金蕎口服液最佳提取工藝。本研究為板芩金蕎口服液的規模化生產提供了基礎，為新獸藥申報奠定了數據基礎。