馥感啉口服液中野菊花薄層鑒別研究

莊滿賢，蕭雪瑩

(廣州一品紅制藥有限公司，廣東 廣州 510760)

馥感啉口服液是廣州一品紅制藥有限公司獨家兒童用藥，具有清熱解毒、止咳平喘、益氣疏表的功效，用于小兒氣虛感冒所引起的發(fā)燒、咳嗽、氣喘、咽喉腫痛癥狀的治療[1]。馥感啉口服液由鬼針草、野菊花、西洋參、黃芪、板藍根、香菇、浙貝母、麻黃、白花前胡、甘草10味藥材提取而來，其中野菊花具有清熱解毒、瀉火平肝的功效，發(fā)揮主要藥效作用[2]。

馥感啉口服液現(xiàn)行質量標準為WS-10230(ZD-0230)-2012Z，未對野菊花進行質量控制。薄層色譜鑒別法作為中藥質量控制的有效手段，可行性已得到驗證[3-5]。為了加強馥感啉口服液的質量控制，本實驗建立其藥效物質野菊花的薄層鑒別方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CPA225D電子天平(德國賽多利斯股份公司)；Xp6電子微量天平(梅特勒儀器有限公司)；GoodSee-20E薄層成像系統(tǒng)(上海科哲生化科技有限公司)；KQ300DB超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑

蒙花苷對照品(111528-201107)、野菊花對照藥材(120995-201105，120995-201105)均購自中國食品藥品檢定研究院；聚酰胺薄膜(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)；馥感啉口服液(批號：20160406、20160408、20160502，廣州一品紅制藥有限公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液制備

取馥感啉口服液20 mL，采用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，萃取液置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣用2 mL甲醇溶解，即得供試品溶液。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取蒙花苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg蒙花苷的溶液，作為對照品溶液。

2.3 對照藥材溶液制備

精密稱取野菊花對照藥材0.3 g，置于具塞錐形瓶中，加水25 mL，加熱回流1 h，放冷，過濾，濾液用乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，萃取液置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，用2 mL甲醇溶解，即得對照藥材溶液。

2.4 樣品測定

參照薄層色譜法《中國藥典》2015年版四部0502通則)，吸取對照品溶液5 μL、對照藥材溶液2 μL以及供試品溶液2 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)為展開劑展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁溶液，熱風吹干，置于紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.5 方法學驗證

2.5.1 專屬性試驗 按馥感啉口服液處方比例，取除野菊花藥材外的處方藥材，按照馥感啉口服液生產工藝制備缺野菊花的陰性樣品。取缺野菊花的陰性樣品，參照“2.1”項下方法制備缺野菊花的陰性對照供試品。

按照“2.4”項下方法，采用蒙花苷對照品、野菊花對照藥材、供試品、缺野菊花陰性對照品進行實驗，結果供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾，說明該方法專屬性較好。結果見圖1。

1.蒙花苷對照品；2.野菊花對照藥材；3～5.供試品溶液，批號分別為20160502、20160406、20160408；6.缺野菊花的陰性樣品

2.5.2 靈敏度試驗 按照“2.4”項下鑒別方法，比較供試品(批號：20160406)不同點樣量(1 μL、2 μL、3 μL、4 μL、5 μL)下斑點顯色情況。結果點樣量為1～5 μL時顯色效果較好，斑點清晰可見，結果見圖2。

1.蒙花苷對照品；2.野菊花對照藥材； 3～7.供試品溶液，點樣量分別為1～5 μL

2.5.3 耐用性試驗 (1)不同相對濕度的影響。按照“2.4”項下鑒別方法，平行點樣2個薄層板，分別在18%、88%的相對濕度條件下展開，比較顯色的差異。結果顯示兩種極端濕度條件下顯色結果良好，提示常規(guī)實驗室條件下相對濕度對薄層顯色無明顯影響，結果見圖3。

(2)不同溫度的影響。按照“2.4”項下鑒別方法操作，平行點樣2個薄層板，分別在4℃、35℃溫度條件下展開，比較TLC圖譜的差異。結果提示環(huán)境溫度4～35℃不影響薄層鑒別結果。結果見圖4。

3 討論

本實驗前期采用3種方法制備供試品溶液，方法1為取供試品20 mL水浴蒸干后用甲醇溶解并定容至25 mL，方法2為采用正己烷萃取后將萃取液濃縮至2 mL，方法3為采用乙酸乙酯萃取后將乙酸乙酯蒸干，再用2 mL甲醇溶解。經(jīng)考察，方法3制備的供試品溶液斑點清晰，分離度較好，因此采用方法3作為供試品溶液制備方法。

1.蒙花苷對照品；2.野菊花對照藥材；3～5.供試品溶液(批號分別為20160502、20160406、20160408)

前期通過對硅膠G、聚酰胺薄膜進行考察，發(fā)現(xiàn)聚酰胺薄膜分離效果較好，因此采用聚酰胺薄膜作為固定相；通過對不同展開劑乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶15∶6∶4∶1)、乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)、乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)進行考察，結果發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯-丙酮-甲酸(10∶3∶1)分離效果最好；考察展距分別為10 cm、20 cm的分離效果，結果展距為20 cm時分離效果較好；考察展開后直接觀察和用2%三氯化鋁溶液顯色后觀察的效果，發(fā)現(xiàn)采用2%三氯化鋁溶液顯色后斑點更清晰，因此采用2%三氯化鋁溶液作為顯色劑。

一系列考察結果表明，本實驗方法專屬性強，穩(wěn)定性、重復性、耐受性均較好。點樣量的多少雖對Rf值無明顯影響；由于不同產地以及批次中藥材的質量差異較大，每批樣品的鑒別應根據(jù)實際情況調節(jié)點樣。所建立的方法可用于馥感啉口服液中野菊花的薄層鑒別，為該產品的質量控制提供參考。