血型血清學(xué)檢查方法在交叉配血中的應(yīng)用研究

文/梁超堅(jiān)，陳孝鏵，藍(lán)冬妹，覃敢

輸血是臨床常見的一種救治手段，可以快速補(bǔ)充患者的血容量，保證機(jī)體獲得足夠的氧氣，有效挽救患者生命。但在輸血前需采取有效的交叉配血方法來確立供血者血液是否和受血者匹配，以保證輸血安全[1]。目前臨床對(duì)交叉配血方式選擇較多，如鹽水法、抗球蛋白法及聚凝胺法、微柱凝膠法等。經(jīng)典抗球蛋白法雖然可靠、準(zhǔn)確，但是操作比較繁瑣，用時(shí)比較長(zhǎng)，雖然是金標(biāo)準(zhǔn)，但是不適用于常規(guī)的臨床中[2]。近些年來，其應(yīng)用常見方式為以下兩類：聚凝胺法、微住凝膠法。基于此，本文把2018年1月-2019年12月期間在本院住院輸血患者2796例作為研究對(duì)象，進(jìn)行鹽水法、微柱凝膠法、聚凝胺法三種血型血清學(xué)檢查，分析其應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月-2019年12月期間在本院住院輸血患者2796例，其中女性1575例，男性1221例，年齡1天-55歲。供血者：選取南寧市中心血站獻(xiàn)血者預(yù)留血樣標(biāo)本。

1.2 方法

選取輸血患者2796例，分別選取取鹽水法、微住凝膠法進(jìn)行配血檢查，若檢驗(yàn)結(jié)果中，提示為陽性結(jié)果或標(biāo)本可疑，選取聚凝胺法，再次進(jìn)行復(fù)查審核結(jié)果。

1.2.1 標(biāo)本預(yù)處理

收集患者2ml抗凝靜脈血，離心受血者、獻(xiàn)血者標(biāo)本，分離血漿后備用。

1.2.2 鹽水法

取小試管3支，分別標(biāo)明主側(cè)、次側(cè)、自身，在主側(cè)管中加100μl患者血漿和50μl3%-5%的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞,次側(cè)管中加100μl獻(xiàn)血者血漿和50ul3%-5%的患者紅細(xì)胞，自身管中加100μl患者血漿和50μl3%-5%的患者紅細(xì)胞。搖勻，1000g/min速度下離心15s，觀察結(jié)果。對(duì)試管壁進(jìn)行觀察，判斷是否存在溶血，并斜持試管，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)及彈動(dòng)試管，對(duì)管底反應(yīng)物是否存在凝集情況進(jìn)行觀察。自身管結(jié)果作為對(duì)照。

1.2.3 微柱凝膠法

通過選擇凝膠卡，對(duì)主、次兩孔標(biāo)注后，主孔添加50ul0.8%-1%的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞和25ul患者血漿，次側(cè)孔反之，然后在37℃的專用孵育器中孵育15分鐘，最后再放進(jìn)專用卡式的離心機(jī)中離心10分鐘，然后判定結(jié)果。離心后紅細(xì)胞沉積在微柱尖底的視為陰性結(jié)果，滯留在凝膠上方或者是中間的視為陽性結(jié)果。

1.2.4 聚凝胺法

在鹽水法基礎(chǔ)上，各管加入0.6ml低離子介質(zhì)溶液混勻，室溫孵育一分鐘，之后各滴入2滴聚凝胺溶液混勻，15s后離心，傾去上清液，留取管底0.1ml凝集液，將試管輕輕搖動(dòng)，觀察是否存在紅細(xì)胞凝集情況，若沒有凝集，必須重做。再各滴入2滴重懸液，輕輕搖勻，觀察結(jié)果。如果是非特異性凝集，便會(huì)在1分鐘之內(nèi)散開，如果是特異性凝集，便不會(huì)散開，還可以進(jìn)一步在顯微鏡下面觀察是否出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。若主側(cè)和次側(cè)都沒有凝集，便為配合血。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比三種方法的交叉配血試驗(yàn)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

全文數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行計(jì)算分析，x2用于檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，其中P＜0.05表示數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在2796例交叉配血中，鹽水法真陽性率、假陽性率低于聚凝胺法、微住凝膠法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。見表1和表2。

表1 鹽水法和聚凝胺法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果相比[n＝2796，n(%)]

表2 鹽水法和微柱凝膠法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果相比[n＝2796，n(%)]

3 討論

輸血安全是當(dāng)前臨床輸血面臨的重大挑戰(zhàn)，輸血科既要保證交叉配血的準(zhǔn)確性，又要快速地向臨床提供安全血液，挽救生命。因此將各種交叉配血方法靈活的應(yīng)用起來，根據(jù)實(shí)際情況選用最適宜的配血方法是臨床輸血檢驗(yàn)的重中之重。交叉配血試驗(yàn)中，鹽水配血法方便快捷、操作簡(jiǎn)單，能夠快速檢查出IgM類血型抗體，但對(duì)人體血液中存在的IgG免疫性抗體敏感性較低，造成鹽水法交叉配血時(shí)漏檢率較高，安全性不高[3]。上述方式應(yīng)用中，可彌補(bǔ)聚集胺法及抗人球蛋白法所引起假陰性率，日常開展試驗(yàn)中，作為一類不可淘汰試驗(yàn)方式[4]。聚凝胺法原理應(yīng)用中，通過實(shí)現(xiàn)高價(jià)陽離子季胺鹽多聚物，當(dāng)溶解過后，正電荷產(chǎn)生較多，中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，紅細(xì)胞之間距離減少，紅細(xì)胞可發(fā)生可逆性非特異性聚集，若顯示為抗體致敏紅細(xì)胞，此時(shí)可被聚凝胺凝集。對(duì)含有枸櫞酸鈉假凝集清除液作用下，枸櫞酸根負(fù)電荷及聚凝胺正電荷中和[5]。聚凝胺法操作快速簡(jiǎn)便，進(jìn)行一次交叉配血只需要10分鐘便可以完成，因此是急診配血的首選方法。并且聚凝胺法的試劑成本比較低，也是一些小型醫(yī)院的常規(guī)方法。聚凝胺法還具有檢測(cè)出假陽性概率低等優(yōu)點(diǎn)，但其具有易受肝素、藥物影響，無法檢測(cè)較低濃度抗體，結(jié)果不直觀等缺點(diǎn)[6]。微柱凝膠法試驗(yàn)基于離心技術(shù)、生物化學(xué)凝膠過濾技術(shù)，技術(shù)設(shè)計(jì)過程中遵循免疫化學(xué)抗原特性，此時(shí)紅細(xì)胞血型抗原及抗體表現(xiàn)為特異性結(jié)合，結(jié)果可呈現(xiàn)為凝集，離心的時(shí)候凝集塊不能夠通過凝膠的間隙便會(huì)留在凝膠的上層，依照凝集的強(qiáng)弱也可以彌散在凝膠中，沒有結(jié)合的紅細(xì)胞，便會(huì)通過凝膠的間隙沉在管尖的底部，呈陰性反應(yīng)[7]。微柱凝膠法因其標(biāo)本用量少，操作方便靈活，不需要洗滌，重復(fù)性好，靈敏度高，準(zhǔn)確度高，結(jié)果觀察直觀，保存時(shí)間長(zhǎng)易于標(biāo)準(zhǔn)化，適合自動(dòng)化批量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，目前成為臨床交叉配血試驗(yàn)主要操作方法[8]。現(xiàn)階段臨床對(duì)微住凝膠法應(yīng)用干預(yù)上往往存在一定不足之處，如試驗(yàn)開展中離心時(shí)間長(zhǎng)，并不適用于急診手術(shù)配血。對(duì)其原因分析得出，試驗(yàn)開展中因樣本檢測(cè)中對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求高，若患者樣本中抗凝不全，則呈現(xiàn)纖維蛋白絲消耗完全情況，后續(xù)難以判斷配血類型，若結(jié)果提示為假陽性，則表明出錯(cuò)率顯著偏高[9-10]。本文通過對(duì)我院2796例輸血患者臨床交叉配血進(jìn)行研究表明，聚凝胺法和微柱凝膠法交叉配血不合檢出真陽性率均高于鹽水法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05，同時(shí)，分析微住凝膠法及聚凝胺法效果，對(duì)其交叉配血結(jié)果分析得出，兩類檢測(cè)陽性率無差異性。研究結(jié)果與金勇,李繼東,余小平[11]研究報(bào)道結(jié)果一致，但周雪瑩[12]、孔存權(quán)[13]、毛娟[14]等研究報(bào)道微柱凝膠法檢出率高于聚凝胺法，微柱凝膠法在臨床輸血檢驗(yàn)中具有更高的準(zhǔn)確率，比聚凝胺法更具有優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，3種交叉配血法各有優(yōu)缺點(diǎn)，鹽水法適用于日常基礎(chǔ)試驗(yàn)，聚凝胺法簡(jiǎn)單、快速，適用于急診輸血；微柱凝膠法靈敏度高、安全可靠，可作為平常首選配血方法。聯(lián)合鹽水法、聚凝胺發(fā)及微住凝膠法能提升臨床陽性檢測(cè)率，確保安全輸血。