液基細胞學聯合細胞塊免疫組化檢測在診斷肺癌組織中的應用

李紅全，譚超華，李立，李成之，蔡曉燕

（廣東省臺山市人民醫院 病理科，廣東 臺山 529200）

0 引言

肺癌是一種常見的惡性腫瘤，流行病學調查顯示其發病率呈增長趨勢，以非小細胞肺癌為主，具有較高發病率和病死率，嚴重威脅患者生命安全。由于非小細胞肺癌早期癥狀較為隱匿，通常確診時已屬中晚期，失去了最佳治療時機。因此，采取及時有效的診斷早期非小細胞肺癌方法尤為重要。纖維支氣管鏡下刷取細胞學檢查是肺癌的一種主要診斷手段。其中采用傳統細胞學制片涂片中的細胞通常由于血液和黏液的覆蓋、細胞重疊及退變等原因影響診斷準確性。液基細胞學主要采用濕固定方法，且于制片中去除了過多的黏液和血液，減少了細胞重疊。細胞病理學檢查方案可在腫瘤早期及微小病變時檢查[1]。而免疫細胞化學利用免疫學方法將抗體由不可見變成可見，來尋找檢測組織細胞中抗原。臨床上常將免疫細胞化學與細胞蠟塊相聯合，從而顯著提高對惡性肺組織中腫瘤細胞的檢出率[2]。但目前，液基細胞學檢查技術聯合細胞蠟塊免疫細胞化學技術在肺癌的診斷應用中相對較少，臨床研究證據也相對局限，為探討其在肺癌的診斷價值，本研究擬采取經支氣管鏡活檢取樣組織病理檢查作為金標準，對液基細胞學檢查技術、細胞蠟塊免疫細胞化學技術聯合方法對肺癌患者進行診斷，探討聯合診斷方法的優勢與臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1 月至2019年12 月年本醫院病理科診斷的42例肺癌患者的臨床資料及輔助檢查結果（實驗室檢查結果、影像學資料和組織病理學等）作為研究對象。男性23例、女性19例，年齡在40～70 周歲，平均（55.93±10.83）周歲。所有患者均簽署研究知情同意書，并經醫院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

①取樣：所有患者均經同一位醫師根據CT 檢查結果進行支氣管針吸活檢術，抽取適量的胸水，放置在樣本瓶內送至細胞室檢查。②液基細胞學：取樣后置入細胞保存液內，待離心5min(速度1500r/min，離心半徑10cm)后去除上清液并加入25mL 清洗液，對樣本進行稀釋，再次離心，速度 半徑與上次一致，再次去除上清液，沉淀，裝入thinPrep細胞保存液并振蕩器混勻。超薄細胞圖片制定后用95%乙醇固定15 分鐘。巴氏染色并封固。③細胞蠟塊技術：將濃度為10%的中心福爾馬林固定液加入送檢樣本內過夜，次日清晨去除上清液，將細胞沉淀混勻后倒入50mL 離心管內，2500rpm 常溫下離心5min，離心后去除上清液，取細胞沉淀物。對細胞沉淀物進行包裹、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，最后進行H&E 染色，脫水處理后，將其放入二甲苯I、二甲苯II 中，各5min。應用中性樹膠封片。④免疫細胞化學技術：將細胞蠟塊切片厚度為4μm，放置在65℃烤箱內烤60min，移出后放置冷卻至室溫。將樣本依次放入二甲苯I、二甲苯II 中，浸潤10min 后再依次放入無水乙醇I、無水乙醇II各5min、95%乙醇、80%乙醇各1-2 分鐘，PBS 沖洗3 次，每次5min；然后進行檸檬酸鹽緩沖液抗原修復，阻斷內源性過氧化物酶，并對樣本進行滴加一抗、加酶標二抗、二氨基聯苯胺(DAB)顯色，最后進行復染、脫水、透明、封片。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件分析，所得數據均應用計數資料“%”代表，應用“χ2”檢驗、當P＜0.05 具有統計學意義。

2 結果

2.1 液基細胞學、細胞蠟塊免疫細胞化學檢測與聯合檢測結果及診斷

42例肺癌患者組織病理學檢查結果顯示，鱗癌28例,腺癌11例,小細胞癌2例,其它1例。根據組織病理結果，單獨檢測中，液基細胞學檢出30例，細胞塊免疫組化檢出38例,聯合檢出為40例。其中液基細胞學假陽性2例，細胞塊免疫組化假陽性為1例，詳見表1。

表1 兩種檢查與聯合檢測結果及診斷

液基細胞學HE 染色癌細胞的細胞形態:鱗癌液基細胞學制片：多大小形狀不等，單個散在，可呈多邊形、圓形，染色質均勻分布，核仁不明顯；腺癌液基細胞學制片：常聚集成實性團，胞質豐富，細胞大小規律，細胞核多呈圓形，染色質較細，并且核仁較明顯；小細胞癌液基細胞學制片：多松散聚集成堆，胞質稀少如裸核狀，核深染，部分帶棱角或呈短梭形。

細胞及組織HE 染色結果顯示，肺癌患者的細胞呈現小圓形、梭形或橢圓形，呈團狀分布。細胞核較大，染色較深，呈現深藍紫色，核內細小染色質顆粒清晰可見，呈現經典“椒鹽樣”特征，核仁較小或無。

2.2 液基細胞學、細胞蠟塊免疫細胞化學檢測與聯合檢測的靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值

細胞塊免疫組化靈敏度94.87%、準確率92.86%、陰性預測值50%明顯高于液基細胞學檢測方法（75.68%、73.81%、25%）,差異有統計學意義（P＜0.05）；聯合檢測靈敏度97.56%、準確度97.62%、陰性預測值100%明顯高于兩種方法單獨檢測，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 液基細胞學、細胞蠟塊免疫細胞化學檢測與聯合檢測的診斷率

3 討論

中國腫瘤登記處相關數據顯示[3,4]，我國新發肺癌病理約有73.33 萬，其位于惡性腫瘤首位。病理學診斷中主要包括組織病理學、細胞病理學和免疫病理學，而目前組織病理學作為診斷肺部惡性腫瘤的金標準，尤其是肺癌。但受病灶位置、大小及其他因素影響，加之在檢查術中及術后可出現不同程度的并發癥，致部分組織病理取樣難以令人滿意的同時，患者及家屬也同樣不能接受[5]。此外，無法得到病理標本更易致疾病病理診斷及分型延遲[6]。

細胞病理學作為近年來較熱的病理學檢查方法，對極早期腫瘤甚至是細胞微小病變有著非常有效診療手段，如隱匿性肺癌等[7]。本研究對液基細胞學、細胞蠟塊免疫細胞化學檢測與聯合檢測診斷肺癌進行分析，結果顯示，細胞塊免疫組各項診斷率明顯高于液基細胞學檢測方法（P＜0.05），而聯合檢測明顯高于兩種方法單獨檢測（P＜0.05），這提示，兩種檢測方法聯合診斷肺癌起到了較好的補充診斷作用，使得其在診斷速度優于單獨檢測[8]。

細胞病理學檢查中液基細胞學檢查主要應用在惡性腫瘤的檢測。此外，該檢查方式制作方便的同時，較少對腫瘤細胞閱讀的干擾，保持細胞的原始狀態和有效細胞數量及質量，使得細胞細微結構清晰可見，并通過機械化處理可提升支氣管鏡檢查效率。而液基細胞學檢查是臨床診斷肺癌病變的主要手段，是近年臨床上一種新型的細胞學檢查方法，顯著彌補了常規檢查方法存在的不足，且取出的脫落細胞后立刻送檢，制成薄層涂片更有利于對異常的細胞進行清晰的觀察。另外，液基細胞學檢查時，取材更方便、準確性、靈敏性均比較高，是一種無創檢查手段。但是，單純的進行液基細胞學檢查時的結果有一定的誤差，無法對全部的病變范圍進行觀察，各級別病變在細胞形態上會有部分重疊，因此，不能將液基細胞學檢查作為最終的檢查依據，如需要聯合其他檢查方法，這對于保證最終的診斷結果準確性非常重要 。

而細胞蠟塊則是通過胸腹積液等體液樣本，經細胞沉淀及離心方式以及組織病理學等技術處理，在利用光學顯微鏡診斷[9-10]。該方式可富集更多數量的腫瘤細胞，提高診斷靈敏度，并經過固定、脫水等過程最大程度保留細胞結構完整性和保存時間。免疫細胞化學又稱為免疫組織化學及時，其可輔助細胞蠟塊快速尋找診斷依據，并通過免疫組織化學染色進行準確定位，對胸腹腔積液中較少腫瘤細胞數量的病例，細胞蠟塊免疫細胞化學檢測可顯著提高對惡性腫瘤細胞的檢出率[11-14]。

綜上所述，液基細胞學、細胞蠟塊免疫細胞化學檢測方法聯合診斷肺癌起到了較好的補充診斷作用，使得其在診斷速度上優于單獨檢測。雖通過液基細胞學、細胞蠟塊免疫細胞化學檢測方法聯合檢查，準確度較高，但是，該聯合診斷只是一種輔助手段，所提供的信息有助于臨床進行進一步診斷與治療，不能將最終的診斷結果作為確定診斷的唯一依據，應該將肺部病灶組織病理活檢作為確診，以便提高診斷準確性。