淺談豬冷凍精液制作技術要點

姜樹林，寧財，余華陽,鐘志勇

（江西省農業技術推廣中心，江西南昌330046）

生豬生產過程中采用本交或常溫精液稀釋后配種繁育，在儲存、運輸、利用效率、基因質量、生物安全等方面存在諸多問題。尤其在傳染病流行期采取封閉防控措施的情況下，在很大程度上限制了優秀種公豬的運輸和利用，影響了生豬產業的健康持續發展。豬冷凍精液有保存時間長、成本低、易于運輸等優點,在生豬生產中起著非常重要的作用。應用豬冷凍精液可以杜絕公母豬直接接觸，降低病毒垂直傳染的概率，有利于生物安全防控，解決種豬跨地區調運及運輸難題，實現跨區域聯合育種，打破時間和空間限制，利于集中復產配種等[1]。同時，豬冷凍精液技術可高效擴繁優秀基因，大幅度提升種公豬的遺傳效益，降低公豬飼養數量，提高養殖場收益。

自2018年開始，筆者通過數十次冷凍精液制作試驗，并成功運用到地方豬冷凍精液生產實踐，形成了較完善的豬冷凍精液操作規程生產工藝。利用這種生產工藝進行冷凍精液制作，可有效保證精液的凍后活力。

1 種公豬飼養管理

1.1 種豬要求

供精種公豬具有種用性能，符合國家有關規定。

1.2 免疫

種公豬在供精前要進行全面檢疫，并在供精前進行程序性免疫，完成免疫程序15d后方可采精。

1.3 飼養管理

1.3.1 能量飼料。種公豬采精期間要注意營養均衡，但要適當控制能量飼料，防止種公豬過肥，影響性欲和精液質量。

1.3.2 蛋白質需求。精液中蛋白質占14%，所以供精種公豬飼料必須保證充足的蛋白質（不低于17%），特別是在采精期間要適當增加飼料蛋白質水平。有條件的養殖場，采精期間每頭公豬每天可補充1～2枚雞蛋。

1.3.3 維生素。維生素對種公豬的生殖保健有重要作用，如維生素A不足會引起睪丸萎縮，維生素D和E不足會影響精液質量。采精期間要適當補充維生素，每日添加飼喂胡蘿卜和魚肝油[2]。

1.3.4 適當運動。種公豬要適當增加運動，保證正常的新陳代謝和旺盛的性欲，避免發生肢蹄病，影響爬跨。

1.4 采精調教

種公豬10月齡、體重100kg左右開始進行爬跨調教，形成射精反應。種公豬采精頻率為每周2～3次。

2 采精前準備

2.1 采精欄準備

2.1.1 采精前對采精欄進行全面清潔，沖洗干凈，自然干燥后，再用紫外線消毒30min以上。

2.1.2 假臺畜后方放橡膠防滑墊，調整好位置，以保證公豬爬跨時，站立舒適。

2.1.3 采精室應保證冬暖夏涼，控制在16℃～25℃之間。

2.2 種公豬準備

2.2.1 采精前將種公豬趕到采精欄，刷拭掉種公豬體表尤其是下腹及側腹的灰塵和污物。

2.2.2 種公豬的陰毛不能過長，以免粘附污物。采精前，修整公豬的陰毛，一般以不超過2cm為宜。

2.2.3 先用0.1%高錳酸鉀溶液清洗種公豬陰莖包皮，再用滅菌生理鹽水清洗，并用消毒的干凈毛巾擦拭包皮部位，避免采精時殘液混入精液中污染精液。

2.3 集精杯準備

2.3.1 將塑料袋放入集精杯中，然后將塑料袋外翻。將濾紙蓋在集精杯口上，將橡皮筋撐開濾紙固定在集精杯外沿上。濾紙安裝好后，濾紙面向下陷3cm左右，放在35℃～37℃的恒溫箱中預熱備用。

2.3.2 將消毒紙巾盒、P E手套、集精杯放在實驗室與采精欄之間的壁櫥內，關上壁櫥門。

2.3.3 采精時拿出集精杯并蓋上蓋子，然后傳遞給采精人員。

2.3.4 當處理室距采精欄較遠時，應將集精杯放入泡沫保溫箱中，然后帶到采精欄。

2.4 精液營養液、冷凍稀釋液、BTS解凍液配制

2.4.1 營養液配制。葡萄糖1.5g，乳糖3g，甘氨酸0.8g，加雙蒸餾水至100mL。

2.4.2 冷凍稀釋液配方。葡萄糖6.12g、EDTA 0.3g、雙蒸餾水75mL、蛋黃20mL、甘油5mL、乙二醇0.83mL、青鏈霉素各10萬U、咖啡因0.2mg/mL。

2.4.3 BTS解凍液配方。葡萄糖3.7g、無水檸檬酸鈉0.6g、碳 酸 氫 鈉0.125g、EDTA 0.125g、氯 化 鉀0.075g、雙蒸餾水100mL。

3 采精

3.1 采精引導

采精員右手戴兩層手套,站在假臺畜的頭部，輕輕敲擊假臺畜以引起公豬的注意，并通過模仿發情母豬聲音或在假臺畜上灑發情母豬尿液等方式引導公豬爬跨。當公豬爬跨有交配行為時，采精員迅速用右手按摩擠壓公豬包皮囊，將其中的包皮積液擠凈，然后用消毒紙巾將包皮口擦干凈。

3.2 精液采集

3.2.1 采精方法。當公豬爬跨假臺畜時，采精員應輔助公豬保持正確的姿勢，避免側向爬或陰莖壓在假臺畜上。手握龜頭呈節奏性松緊給予壓力進行刺激，鎖定龜頭，脫去右手的外層手套，右手呈空拳，當龜頭從包皮口伸入空拳后，用中指、無名指、小指鎖定龜頭，并向左前上方拉伸，龜頭一端略向左下方。為了防止未擠凈的包皮積液順著陰莖流入集精杯中，采精時要保證陰莖龜頭端的最高點高于包皮口。

3.2.2 精液收集。最初射出的精液不含精子不能收集，當公豬射出乳白色的精液時，左手將集精杯口向上接近右手小指正下方。最后的精液稀薄基本不含精子，不要收集。要保證公豬的射精過程完整。采精過程中，即使最后射出的精液不收集，也不要中止采精，直到公豬陰莖軟縮，試圖爬下假母豬，再慢慢松開公豬的陰莖。取掉集精杯上的濾紙，蓋好集精杯蓋，標明公豬耳號，送入化驗室櫥窗。

4 品質檢測

用帶有恒溫設施的顯微鏡進行檢測，載溫臺溫度應恒溫維持在37℃。檢測指標主要有：外觀（淡乳白色或灰白色，均勻一致，無雜質）、氣味（略帶腥味，無異味）、活力（≥70%。）、畸形率（≤15%）。

5 鮮精處理

5.1 精液稀釋要求

最終稀釋密度為4億/mL。

5.2 預稀釋

營養液先預熱到32℃。將活力檢測合格的鮮精，記錄好精液密度、劑量等相關數據，按1：1比例與營養液混合均勻。預稀釋后的精液放入17℃恒溫箱內，等同溫至17℃后，進行離心操作。

5.3 離心

將預稀釋精液裝入100mL的離心管內，在恒溫17℃和重力900g條件下離心15min。精液離心后，吸走離心管的上清液。

5.4 稀釋

冷凍稀釋液預熱至17℃。以每毫升4億的最終稀釋濃度，計算出需要的冷凍稀釋液。將2/3冷凍稀釋液加到離心管中，以吸吐方式充分混合均勻、合并，再用剩下的1/3冷凍稀釋液洗滌離心管底，合并。

5.5 平衡

將稀釋好的精液放至17℃水浴杯中，一同放進4℃冰箱，平衡4h。

5.6 分裝

細管上應用字母標明生產場、公豬品種、公豬號、生產日期。檢查灌裝好的細管精液，將有氣泡、未灌滿的不合格的細管精液撿出。將分裝好的細管精液鋪放在冷凍支架上。

6 冷凍

6.1 冷凍方式

6.1.1 程序冷凍。在程控冷凍儀的冷凍柜里，以每分鐘下降30℃的速度填充液氮將精液冷凍。

6.1.2 熏蒸冷凍。采用自制冷凍箱或泡沫箱冷凍，可以降低生產成本，冷凍效果較理想。冷凍箱的深度應該在50cm以上，使用前先倒入液氮冷卻10min以上。冷凍支架與液氮面保持2cm，冷凍8min即可。

6.2 包裝

將冷凍好的細管精液包裝好，外包裝上標明品種、豬號、支數、生產日期等。

6.3 質量檢測

6.3.1 解凍。BTS解凍液預熱至26℃。從液氮罐中取出2～3支細管精液，迅速放到38℃水中，解凍15s，或50℃水中，解凍7s。剪開細管精液封口端，擠入數滴精液至1mLBTS解凍液中，攪勻，回溫到37℃，靜置20min。在37℃載溫臺上，檢測精液活力。

6.3.2 凍精品質要求。活力≥30%，精子畸形≤18%，密度≥4億/mL，每支（0.25mL規格細管）菌落數≤800個。

7 討論

7.1 種公豬飼養管理

種公豬飼養管理至關重要，特別是營養均衡方面，要根據種公豬的生產需要進行調配飼料及添加營養物質，保證種公豬的能持續提供符合冷凍制作的優質精液。種公豬從體重70kg開始就要飼喂專門的種公豬飼料[4]，控制能量飼料的投入，防止過胖影響生產性能。運動對種公豬的健康十分重要，不僅能保持種公豬的性欲，還能有效提高精液質量，根據不同情況合理安排種公豬的運動量及運動方式[5]。合理的采精頻率是保障精液質量和延長種公豬利用年限的重要措施，根據種公豬不同的年齡合理安排每周采精頻率，后備種公豬1～2次/周，青年種公豬2～3次/周[5]，具體采精頻率還要根據鮮精品質進行調整，一旦發現精液量減少或精子密度下降，應該適當減少采精頻率或停采一段時間。

7.2 采精時間

種公豬精液品質不僅受營養水平、年齡等因素影響，而且受季節氣溫因素影響。通常夏季高溫高濕，冬季低溫天氣都會對種公豬精液質量有影響，難以制作成功，外界氣溫超過35℃或低于5℃時，建議停采。另外天氣突變，如大幅升降溫對種公豬的精液質量也會有影響，但這種影響通常是短暫的，幾天就能恢復正常。

7.3 溫度控制

溫度控制在豬凍精生產中至關重要。采精及處理鮮精時，所用的器具應保持同等溫度，減少溫差帶來對精子的打擊。在進行4℃平衡時，應放置在17℃水中，同步降溫，減少降溫帶來的冷打擊[6]。現在大多數企業生產生豬凍精多采取程序冷凍，控溫效果較好。但部分企業為了節省成本采用自制冷凍箱或泡沫箱熏蒸冷凍，采用這種方式冷凍時，應該提前倒入液氮，靜置10min以上，讓冷凍箱能充分均溫，才能保證冷凍效果。凍精凍制成功后，應該全部浸沒在液氮中，避免回溫帶來的影響。檢測精液活力時，應確保載溫臺在37℃，才能準確觀察精子活力，溫度過高或過低都會影響判斷。

7.4 凍精保存

凍精制作好后，應該及時投入液氮罐進行深度冷凍。冷凍1～2周后，應該再進行一次凍精質量檢查，將合格精液入庫保存。每罐凍精裝2/3左右，充滿液氮，每周定期檢查，及時補充液氮。凍精庫房應該保持涼爽、干燥、避風、避光，液氮罐外標注品種名、豬號、支數、生產日期等信息，盡量減少不必要的開罐查找精液。