泡囊草生品及不同炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

蘇日嘎拉圖，敖民，烏云嘎，包東明，包明蘭*

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2、通遼市蒙中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究中心，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

0 引言

囊草是茄科植物泡囊草Physochlainaphysaloides(L.)G.Don的干燥根。作為蒙藥“混-好日蘇”始載于藏、蒙醫(yī)藥經(jīng)典著作《無誤蒙藥鑒》中，后《認(rèn)藥白晶鑒》等歷代文獻(xiàn)均有記載。1998年被收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(蒙藥分冊)》，具有殺“黏”，消腫，殺蟲，鎮(zhèn)痛，解痙，清“協(xié)日烏素”，壯陽之功效。用于粘性胃痧，結(jié)喉，發(fā)癥，蟲疾，腦刺痛，頭痛，陽痿[1,2]。現(xiàn)代藥理學(xué)和臨床研究表明泡囊草所含有的有效成分山莨菪堿、莨菪堿、東莨菪堿、紅古豆堿和阿托品具有平喘止咳，安神鎮(zhèn)靜之功效[3]。由于泡囊草有大毒，蒙醫(yī)常將泡囊草采用(1)用文火炒黃[4]；(2)用羊奶中浸泡后在草木灰中煨透[5]；(3)用牛奶浸泡后曬干[2,4,6]；(4)用水煎煮，制膏[2]等炮制方法處理后使用。目前，對泡囊草炮制品(牛奶制和制膏品)的化學(xué)成分及藥效學(xué)研究只限于總生物堿的含量測定及抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌作用[7-8]。

本文采用薄層色譜法對泡囊草生品和炮制品中莨菪堿進(jìn)行了定性鑒別；用HPLC 法對泡囊草生品和炮制品中莨菪堿和山莨菪堿進(jìn)行定量分析，建立了質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

莨菪堿和山莨菪堿對照品是由中國藥品與生物檢驗(yàn)所 購 買。( 批 號：100249-201303；11620-200402)。 泡 囊草由呼倫貝爾盟境內(nèi)采取。泡囊草為茄科植物泡囊草 (PhysochlainaphysaloidesG.Don) 的干燥根，由內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院布和巴特爾教授鑒定為泡囊草干燥根(批號：20180815；20180816；20180819)。薄層色譜硅膠G，硅膠G 均由青島海洋化學(xué)試劑公司提供。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器

BS210S 型(max210g d=0.1mg)電子天平(日本島津)；ZF-1型紫外燈(上海)；HHS21-4 型恒溫水浴鍋(上海)；KQ-100 型雙頻超聲波清洗器(昆山市)。高效液相色譜儀SHIMASZU SPD-M20A LC 20AT 型(日本島津)；SPD-M10AVP 紫外分光光度計(jì)(上海)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備

精密稱取泡囊草生品、牛奶炮制品及浸膏品各2.0g，置于錐形瓶中加10mL 甲醇，加蓋，稱重，超聲40min，置于室溫放凉，稱重，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，過濾，即得泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏品的供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取莨菪堿對照品5.0mg，置于10mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，再從溶液中吸取1mL，置于試管中加3mL甲醇，即得莨菪堿對照品溶液。

3 種供試品溶液和莨菪堿對照品溶液分別吸取3μl，按《中華人民共和國藥典》(2015 版第四部0502)薄層色譜法[9-11]，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G 薄層板上，以乙醚-甲醇-氨水(17:2:1)為展開劑，展開10cm，晾干，在紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，見圖1-1，1-2，1-3；再于硅膠G 薄層色譜板上以乙醚-乙醇-氨水(14:2:1)，正丁醇-乙醇-氨水(8:3:1)作為展開劑，展開驗(yàn)證時得到同樣的結(jié)果，見圖2-1，2-2，2-3；3-1，3-2，3-3。

圖1-1：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.37圖1-2：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.34圖1-3：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.38

圖2-1：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.29圖2-2：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.43圖2-3：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.46

圖3-1：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.24圖3-2：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.25圖3-3：1-3.生品，奶制品，浸膏；4.莨菪堿對照品Rf=0.34

2 定量測定研究

2.1 色譜條件

色譜柱：lnertsil NH2 Columns C18 300mm×4.6mm 5 μm；流動相：甲醇-水(15:85)，檢測波長：215nm，柱溫：35℃，流速：1.0mL/min。

2.2 供試品溶液的制備

樣品溶液的制備：稱取泡囊草生品和炮制品各1.0g，加入錐形瓶中加25mL 甲醇，加蓋，稱重，超聲處理40min，室溫晾干，稱重，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，過濾，濾液吸取1mL 置25mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，備用。

莨菪堿對照品溶液的制備：精密稱取莨菪堿對照品12.5mg，置5mL 容量瓶中加甲醇至刻度，混勻，備用。

山莨菪堿對照品溶液的制備：精密稱取山莨菪堿對照品12.5mg，置5mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，備用。

2.3 線性關(guān)系及其工作范圍的考察

上述制備的對照品溶液中分別精密吸取5.0μL，7.0μL，10.0μL，12.0μL，15.0μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積(A)，并以峰面積(Y)對對照品的進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得莨菪堿回歸方程：Y=136224.6072X -6206.3726，r=0.9999。結(jié)果表明，莨菪堿對照品進(jìn)樣量在0.75μg ～2.25μg 范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)性顯著；山莨菪堿回歸方程：Y=34845.2654X-3612.5605，r=0.9999。結(jié)果表明，山莨菪堿對照品進(jìn)樣量在3.00 ～ 9.00μg 范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)性顯著。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系檢測結(jié)果

2.4 精密度試驗(yàn)

從“2.2”制備樣品溶液中精密吸取10μL，按上述色譜條件進(jìn)樣6 次，計(jì)算其峰面積RSD%。結(jié)果泡囊草生品、牛奶制炮制品和浸膏中莨菪堿和山莨菪堿的峰面積RSD(%)分別為：0.60、0.36,0.45、0.87,0.46、0.53。表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

從“2.2”制備樣品溶液中精密吸取10μL，按上述色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12h 進(jìn)樣一次，計(jì)算其峰面積RSD(%)，結(jié)果泡囊草生品、牛奶制炮制品和浸膏中莨菪堿和山莨菪堿的峰面積RSD(%)分別為：1.00、0.64，,080、0.83,0.82、0.38。表明供試品溶液在12h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

泡囊草(批號20180815)樣品精密稱取1.0g(5 份)，照“2.2”方法制備供試品溶液5 份，分別精密吸取10μL，按上述色譜條件，測定其峰面積，并計(jì)算含量，結(jié)果泡囊草生品中莨菪堿和山莨菪堿的平均含量(mg/g)為2.67、11.62，RSD(%)為0.83、0.56；泡囊草牛奶炮制品中莨菪堿和山莨菪堿的平均含量(mg/g)為1.10、5.07，RSD(%)為0.65、1.06；泡囊草浸膏炮制品中莨菪堿和山莨菪堿的平均含量(mg/g)為2.65、13.66，RSD(%)為0.73、0.47。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取泡囊草牛奶炮制品約0.10g，6 份。分別加莨菪堿對照品及山莨菪堿對照品，照上述方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下測定峰面積，按公式計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果見表2。

回收率(%)=[測得量(mg)—樣品中含量(mg)/加入對照品量(mg)] ×100%

2.8 含量測定

按照“2.2”法制備的樣品溶液，精密吸取10μL，按上述色譜條件下測峰面積，計(jì)算其含量，泡囊草生品及不同炮制品中莨菪堿和山莨菪堿的含量結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

用3 種不同展開系統(tǒng)對泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏炮制品中莨菪堿進(jìn)行薄層鑒別研究。結(jié)果在本試驗(yàn)條件下，在泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏炮制品中均能檢出與莨菪堿對應(yīng)的清晰的薄層斑點(diǎn)。用HPLC 法測定泡囊草生品、牛奶炮制品和浸膏炮制品中莨菪堿和山莨菪堿的含量。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)條件下，莨菪堿和山莨菪堿的含量在牛奶制泡囊草中的含量比泡囊草生品中的含量明顯降低而浸膏品中的含量比生品有所增加。

泡囊草主含的山莨菪堿、莨菪堿、東莨菪堿、阿托品、紅古豆堿等既是泡囊草的有效成分也是毒性成分。泡囊草經(jīng)炮制降低毒性而增強(qiáng)臨床療效。泡囊草經(jīng)牛奶浸泡莨菪堿和山莨菪堿的含量降低。臨床上經(jīng)牛奶浸泡后入湯、散劑內(nèi)服而保障臨床安全有效與所含的莨菪堿和山莨菪堿含量可能有關(guān)。泡囊草浸膏品中的莨菪堿和山莨菪堿的含量有所增加，浸膏多外用，主要用于腫毒、乳腺炎、腮腺炎等嚴(yán)重病的治療，認(rèn)為通過炮制提高有效成分含量而增強(qiáng)其腫毒、乳腺炎、腮腺炎等嚴(yán)重病的治療效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合蒙醫(yī)辯證治療理論和通過臨床需要來辯證炮制理論。

本研究方法操作簡便、可行可靠，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可用于泡囊草及含泡囊草蒙藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供方法學(xué)基礎(chǔ)。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 含量測定結(jié)果