康艾注射液聯合同步放化療對中晚期子宮頸癌患者細胞凋亡相關因子及免疫狀態的影響

劉暢

【關鍵詞】 子宮頸癌 康艾注射液 凋亡 免疫

[Abstract] Objective： To investigate the effects of Kangai Injection combined with concurrent chemoradiotherapy on apoptosis related factors and immune status in patients with advanced cervical cancer. Method： A total of ninety six patients with advanced cervical cancer diagnosed and treated in our hospital from March 2017 to December 2020 were selected， according to the random number table method， the patients were divided into simple concurrent chemoradiotherapy group and combined group， 48 cases in each group. Simple concurrent chemoradiotherapy group was only treated with concurrent chemoradiotherapy group， and the combination group was treated with Kangai Injection on the basis of simple concurrent chemoradiotherapy group. The levels of apoptosis-related factors and immune cells in peripheral blood before and after treatment were measured respectively. Result： After treatment， the levels of apoptosis-related factors PDCD5， Bax and P53 in both groups were significantly increased， and the levels of PDCD5， Bax and P53 in the combined group were higher than those in the simple concurrent chemoradiotherapy group （P<0.05）. After treatment， CD3+， CD4+， interferon γ， interleukin-2 （IL-2） in the simple concurrent chemoradiotherapy group were lower than those before treatment， and CD8+ was higher than that before treatment （P<0.05）， while the levels of CD3+， CD4+， interferon γ and IL-2 in the combined group were higher than those before treatment， and CD8+ was lower than that before treatment （P<0.05）. After treatment， CD3+， CD4+， interferon γ and IL-2 in the combined group were higher than those in the simple concurrent chemoradiotherapy group， while CD8+ was lower than that in the simple concurrent chemoradiotherapy group （P<0.05）. Conclusion： Kangai Injection combined with concurrent chemoradiotherapy in the treatment of advanced cervical cancer can promote the apoptosis of tumor cells and improve the anti-tumor immune response.

[Key words] Cervical cancer Kangai Injection Apoptosis Immune

First-author’s address： Anshan Cancer Hospital， Anshan 114036， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.26.010

子宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，近年來出現年輕化的趨勢，高發年齡段為35～44歲，嚴重威脅女性健康，研究報道2018年全世界新發子宮頸癌病例將近57萬例，死亡病例近31萬例，患者總體5年生存率約為68%[1-3]。手術、放療和化療為主的綜合治療是子宮頸癌的主要治療手段，對于早期（Ⅰ～ⅡA期）的患者，首選手術切除治療，對于中晚期（ⅡB期及以上），以同步放化療為主[4-5]。但同步放化療由于放化同時進行，治療強度較大，目前存在較多難以避免的不良反應，導致患者出現骨髓造血系統抑制、肝腎功能障礙、惡心嘔吐以及神經系統等毒副作用。尤其是對患者免疫功能的抑制，存在造成腫瘤細胞免疫逃逸，使腫瘤發生遠處轉移的風險，影響患者的治療效果。近年來，中醫藥在減少放化療毒副反應方面的應用越來越多，其效果逐漸受到關注[6-9]。多項研究結果表明康艾注射液可改善人體免疫功能，促進骨髓造血系統恢復[10-13]。袁順平等[14]研究證實，康艾注射液具有促進腫瘤細胞凋亡，增強機體抗腫瘤免疫的作用。但其在子宮頸癌中的應用及機制研究仍然較少，因此本研究通過康艾注射液聯合同步放化療治療中晚期子宮頸癌患者，分析治療前后患者細胞凋亡相關因子及機體免疫功能的變化情況，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性納入2017年3月-2020年12月于本院診治的經病理學證實為中晚期宮頸鱗癌的96例患者。（1）納入標準：①經臨床及病理檢查診斷為中晚期（ⅡB期及以上）子宮頸鱗癌的患者;②預計生存期>6個月;③一般身體狀況較好，KPS評分>70分;④對化療藥物耐受，可耐受同步放化療。（2）排除標準：①合并肝腎功能障礙;②合并其他部位腫瘤。按隨機數字表法將患者分成單純放化療組和聯合組，每組48例。患者及其家屬均已簽署知情同意書，且該研究已經本院倫理委員會批準。

1.2 方法 單純同步放化療組采用順鉑（生產廠家：齊魯制藥有限公司，批準文號：國藥準字H20023461，規格：20 mg/支），40 mg/m2，靜脈滴注，聯合多西他賽（生產廠家：深圳萬樂藥業有限公司，批準文號：國藥準字H20060127，規格：40 mg/支），80 mg/m2，靜脈滴注，1次/周，4周為一療程，共治療兩個療程，同步放療采用三維適形放射治療技術，靶區包括腫瘤病灶、宮旁組織、距離腫瘤病灶足夠長的陰道邊緣、骶前淋巴結及其他高危淋巴結區，處方劑量約45 Gy/25 F，5次/周。

聯合組在此基礎上加用康艾注射液（生產廠家：長白山制藥股份有限公司，批準文號：國藥準字Z20026868，規格：10 mL/支）治療，500 mL 0.9%氯化鈉溶液+40 mL康艾注射液，1次/d，靜脈滴注，持續至化療結束。治療過程中每周復查血常規、肝腎功能、生化等，密切監測放化療毒副反應，如出現需及時對癥處理。

1.3 觀察指標 （1）比較兩組治療前后的凋亡相關因子的表達情況。分別于治療前及治療后收集患者早晨空腹肘靜脈血5 mL，2 500 r/min離心10 min，分層后，移液槍吸取上清液，采用Elisa試劑盒進行操作，檢測PDCD5、Bax、P53的表達量。（2）比較兩組治療前后的外周血免疫細胞水平。采集患者2 mL空腹肘靜脈血，采用EDTA抗凝管，分別孵育熒光標記的CD3、CD4、CD8抗體，最后通過流式細胞儀測定患者抗凝血中CD3+、CD4+、CD8+細胞數量。（3）比較兩組治療前后的免疫相關細胞因子水平。于治療前后收集患者早晨空腹肘靜脈血2 mL，離心后分離血清，通過放射免疫法檢測γ干擾素、白細胞介素-2（IL-2）。

1.4 統計學處理 使用SPSS 26.0軟件，對于符合正態分布的數據，采用（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗，非正態分布的數據采用M（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 聯合組：年齡35～75歲，平均（50±11）歲;ⅡB期15例，Ⅲ期21例，Ⅳ期12例。單純同步放化療組：年齡36～73歲，平均（51±12）歲;ⅡB期17例，Ⅲ期18例，Ⅳ期13例。兩組年齡及病理分期比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組凋亡相關因子比較 聯合組與單純同步放化療組治療前的PDCD5、Bax、P53表達比較，差異均無統計學意義（P>0.05）;治療后，兩組PDCD5、Bax、P53的表達較治療前均升高，聯合組治療后的PDCD5、Bax、P53升高更為明顯，均高于單純同步放化療組，差異均有統計學意義（t=9.218、8.435、5.574，P<0.001）。見表1。

2.3 兩組免疫細胞比較 聯合組與單純同步放化療組治療前的CD3+、CD4+、CD8+水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05）;治療后，聯合組CD3+、CD4+水平均較治療前升高，CD8+較治療前降低，差異均有統計學意義（P<0.05）;治療后，單純同步放化療組CD3+、CD4+水平均較治療前降低，CD8+水平升高，差異均有統計學意義（P<0.05）;治療后，聯合組CD3+、CD4+水平均高于單純同步放化療組，CD8+水平低于單純同步放化療組，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.4 兩組免疫相關細胞因子比較 聯合組與單純同步放化療組治療前的γ干擾素、IL-2比較，差異均無統計學意義（P>0.05）;治療后，聯合組γ干擾素、IL-2均較治療前升高，差異均有統計學意義（P<0.05）;治療后，單純同步放化療組γ干擾素、IL-2均較治療前降低，差異均有統計學意義（P<0.05）;治療后，聯合組γ干擾素、IL-2水平均較單純同步放化療組升高，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

子宮頸癌是嚴重危害中老年女性健康的惡性腫瘤，近年來出現年輕化的趨勢，發病率逐年上升，所有患者中約80%都需要進行外照射治療或放化同步治療，其療效較為肯定，但其造成的骨髓造血系統的損傷，機體免疫功能的抑制仍然不可忽視[15-17]。康艾注射液是一種具有益氣扶正，促進腫瘤細胞凋亡，增強患者免疫功能作用的中成藥，其主要成分為人參、黃芪和苦參。研究報道其對化療后惡心嘔吐等消化道癥狀的預防亦起作用，其在臨床放化療不良反應預防中的應用越來越廣泛，療效也得到了肯定[18]。

本研究通過將中晚期子宮頸癌患者隨機分為單純同步放化療組和聯合組，分別測定治療前后外周血中凋亡相關因子及免疫細胞水平。發現治療后兩組凋亡相關因子PDCD5、Bax、P53的表達量均顯著升高，但是聯合組的升高程度較單純組更為明顯，提示康艾注射液可促進腫瘤細胞的凋亡，提高治療效果。莫宗權等[19]通過使用生物信息學方法分析了康艾注射液殺傷腫瘤細胞的分子機制，其結果表明康艾的作用靶點主要為COX1/2、熱休克蛋白90等，其中的苦參堿、黃酮、人參皂苷組分可以抑制腫瘤細胞增殖能力、促進腫瘤細胞發生凋亡，調節機體免疫反應等功能，從而重塑腫瘤局部微環境，發揮殺傷腫瘤細胞的作用。趙玲俊等[20]通過在實驗室進行體外細胞實驗，探討了康艾注射液對乳腺癌細胞（MDA-MB-435S、MDA-MB-231、SK-BR-3、HCC-1937）的增殖、克隆形成和凋亡的影響，其結果表明康艾注射液可能通過AMPK/mTOR通路促進腫瘤細胞發生凋亡。張騰騰等[21]通過對體外結腸癌Lovo細胞加入康艾注射液，研究其對結腸癌細胞凋亡和增殖的影響，使用流式細胞儀檢測結腸癌Lovo細胞凋亡及Ki-67的表達情況，通過實時熒光定量PCR法檢測結腸癌細胞caspase-3、Bcl-2表達水平，結果顯示：加入康艾注射液的結腸癌細胞發生凋亡的比例升高，達到57.02%，而對照組僅為7.28%，差異有統計學意義（P<0.05）。且加入康艾注射液的結腸癌細胞Ki-67的陽性表達率明顯低于對照組（65.84% vs 95.79%），提示其細胞增殖明顯受到抑制。以上研究均和本文研究結果一致，提示康艾注射液可通過促進腫瘤細胞的凋亡，抑制腫瘤的增殖，從而發揮殺傷腫瘤細胞的作用。

本文還發現單純同步放化療組中CD3+、CD4+水平降低，CD8+水平升高，γ干擾素、IL-2降低，而聯合組中CD3+、CD4+水平升高，CD8+水平降低，γ干擾素、IL-2均升高，均高于對照組。表明同步放化療會造成機體免疫系統的抑制，影響淋巴細胞的分化。而康艾注射液可以促進淋巴細胞的成熟，提高抗腫瘤免疫應答。楊景景[22]納入86例非小細胞肺癌患者，對照組（43例）給予含鉑化療方案，實驗組（43例）在對照組基礎上加用康艾注射液治療，結果表明，相比于對照組，實驗組中CD4+細胞數增多，CD8+細胞數減少。劉曉燕等[23]也通過康艾注射液聯合GP方案（順鉑+吉西他濱）治療晚期非小細胞肺癌，其結果表明，聯合組外周血中CD3+、CD4+細胞數增多，CD8+細胞數降低;對照組外周血中CD3+、CD4+細胞數降低，CD8+細胞數增多。李沅耕[24]通過細胞動物實驗證實康艾注射液可以增強RAW 264.7細胞的免疫活性，對抗X射線所致小鼠外周血白細胞和骨髓有核細胞數的減少，并升高小鼠白細胞數，其次可以明顯提高免疫功能低下小鼠血清溶血素以及TNF-α和IL-6含量。劉建[25]通過聯合康艾注射液和TP方案（順鉑+紫杉醇）治療晚期卵巢癌，結果顯示，相比于單純TP方案，聯合組外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+數目明顯較高，且聯合組患者中位生存期、無進展生存期明顯優于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。以上研究均表明放化療對機體免疫系統存在抑制作用，影響效應免疫細胞的分化成熟，降低機體的抗腫瘤免疫應答。而康艾注射液具有保護機體免疫功能的作用，且具有良好的免疫增強作用，從而激活人體免疫系統，促進免疫細胞對腫瘤的殺傷作用。

綜上所述，康艾注射液聯合同步放化療治療中晚期子宮頸癌可以促進PDCD5、Bax、P53等凋亡相關因子的表達，促進腫瘤細胞發生凋亡，從而起到殺傷腫瘤的效果;其次可促進T淋巴細胞的活化成熟，提高血液中γ干擾素、IL-2的水平，激活人體免疫系統，提高抗腫瘤免疫應答，是治療中晚期子宮頸癌較佳的選擇。

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（收稿日期：2021-07-29） （本文編輯：張爽）