Livin和Survivin在卵巢癌中的表達及相關性研究

劉若男　陳奎生

【摘要】 目的 探討Livin、Survivin是否與卵巢癌的發生、發展有關并評價兩者的相互關系。方法 利用免疫組化法檢測76例卵巢癌、24例卵巢良性上皮性腫瘤標本中Livin、Survivin蛋白表達的情況。結果 卵巢癌中Livin陽性率為81.58%， 顯著高于卵巢良性上皮性腫瘤的33.33%（P<0.05）。卵巢癌中Survivin陽性率為63.16%， 明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤的25.00%（P<0.05）。Livin蛋白表達陽性的卵巢癌中， Survivin的陽性表達率為64.52%；Livin蛋白表達陰性的卵巢癌中， Survivin的陽性表達率為57.14%， 相關分析表明兩者表達無相關性（χ2=0.267， P>0.05）。結論 Livin、Survivin與卵巢癌的發生密切相關， 但兩者在卵巢癌中的轉錄途徑可能具有差異。

【關鍵詞】 卵巢癌；Livin；Survivin；凋亡；免疫組化

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.07.002

Research of expression and correlation of Livin and Survivin in ovarian cancer LIU Ruo-nan， CHEN Kui-sheng. Department of Gynecological Tumor， Affiliated Tumor Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450008， China

【Abstract】 Objective To investigate relationship of Livin and Survivin with occurrence and development of ovarian cancer， and evaluate correlation between them. Methods Immunohistochemistry test was applied to detect expression of Livin and Survivin in 76 ovarian cancer cases and 24 benign ovarian epithelial tumor cases. Results Positive rate of Livin in ovarian cancer was much higher as 81.58% than 33.33% in benign ovarian epithelial tumor （P<0.05）. Positive rate of Survivin in ovarian cancer was much higher as 63.16% than 25.00% in benign ovarian epithelial tumor （P<0.05）. In ovarian cancer with positive Livin protein， the positive expression rate of Survivin was 64.52%， which was 57.14% in ovarian cancer with negative Livin protein. The analysis showed no correlation between them （χ2=0.267， P>0.05）. Conclusion Livin and Survivin are closely related with occurrence of ovarian cancer， while there may be difference in transcription way between them in ovarian cancer.

【Key words】 Ovarian cancer； Livin； Survivin； Apoptosis； Immunohistochemistry

卵巢癌是女性生殖系統三大惡性腫瘤之一， 晚期患者5年生存率僅為25%～30%。研究揭示凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein， IAP）在細胞凋亡的調控中發揮非常重要的作用， 其中Livin、Survivin為最引人注目的兩個成員。Survivin在許多腫瘤包括在卵巢癌中的表達國內外已有許多報道。Livin和Survivin一樣， 在某些惡性腫瘤細胞和轉化細胞中高表達， 但在卵巢癌中的表達方式至今仍不清楚[1]。基于以上考慮， 本研究擬采用免疫組織化學SP法檢測Livin、Survivin蛋白在良、惡性卵巢上皮性腫瘤組織中的表達， 分析卵巢癌組織中Livin與Survivin蛋白表達的相關性， 旨在加深對卵巢癌變分子基礎的了解， 為卵巢癌的防治提供重要的理論基礎和手段， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 組織標本收集鄭州大學附屬腫瘤醫院病理科保存的上皮原發性卵巢腫瘤石蠟標本共100例， 所有標本常規HE染色， 請兩名病理專家認定。其中卵巢癌標本76例， 供體年齡25～76歲， 平均年齡（53.70±7.43）歲， 手術前均未接受放、化療等治療；包含45例漿液性乳頭狀囊腺癌， 22例粘液性囊腺癌， 8例子宮內膜樣腺癌， 1例透明細胞癌；高分化癌18例， 中分化癌31例， 低分化癌27例；Ⅰ期卵巢癌7例， Ⅱ期卵巢癌17例， Ⅲ期卵巢癌46例， Ⅳ期卵巢癌6例。卵巢良性上皮性腫瘤標本24例， 供體年齡28～69歲， 平均年齡（46.30±7.28）歲；包含19例漿液性乳頭狀囊腺瘤， 5例粘液性囊腺瘤。

1. 2 研究方法 本研究參照說明書行免疫組織化學SP法， 光學顯微鏡下Livin和Survivin免疫組化產物為棕黃色細顆粒狀， 多位于細胞質， 偶可見于細胞核。隨機觀察10個高倍鏡下視野并參照文獻[2]：據陽性細胞數占所有腫瘤細胞數的百分比計算出Livin和Survivin蛋白的表達率， 同時根據細胞染色強度分別記錄為：（++）陽性細胞的面積≥50%， 深染色；（+）陽性細胞的面積≥10%， <50%， 較深染色；（-）無明顯陽性細胞或陽性細胞面積<10%， 淺染色。

1. 3 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗；使用Spearman相關檢驗方法分析指標間有無相關性。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 卵巢腫瘤中Livin的表達情況 76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤組織中， Livin蛋白表達的陽性數分別為62例和8例， 陽性表達率分別為81.58%、33.33%， 兩種病理類型陽性表達情況比較， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 卵巢腫瘤中Survivin的表達情況 76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤組織中， Survivin蛋白表達的陽性數分別為48例和6例， 陽性表達率分別為63.16%和25.00%， 兩種病理類型陽性表達情況比較， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2. 3 卵巢癌中Livin和Survivin表達的相關性 62例Livin蛋白陽性表達的卵巢癌組織中， Survivin蛋白陽性表達40例， 其陽性表達率為64.52%；14例Livin蛋白表達陰性組織中， Survivin蛋白陽性表達8例， 其陽性表達率為57.14%。通過Spearman相關分析表明兩者的表達無相關性（χ2=0.267， P>0.05）。見表3。

3 討論

腫瘤的發生與發展離不開細胞凋亡/增殖的失衡， 細胞凋亡抑制是正常細胞轉化為腫瘤細胞的重要因素， IAP家族就是一類存在于多個物種中的凋亡抑制蛋白。

3. 1 Livin蛋白在卵巢癌發生與發展中的作用 Livin蛋白含有一個桿狀病毒IAP重復區（baculoviral IAP repeat， BIR）結構， 在羧基端還有一個環指樣結構。BIR結構域是Livin蛋白發揮其抗凋亡活性的最主要因素， 環指樣結構域能夠介導其于亞細胞水平的分布。凋亡刺激信號達到一定強度作用于細胞后， Caspase的酶水解作用就會被激活， 從而執行凋亡功能[3]。Livin的信號通路既有外在途徑（細胞表面死亡受體）， 又有內在途徑（細胞色素C及化學藥物）， 均能夠干擾Caspase的活性而抑制細胞的凋亡。本研究采用免疫組織化學SP法檢測了76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤組織中Livin蛋白的表達， 陽性率分別為81.58%、33.33%。卵巢癌明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤， 這表明Livin與卵巢癌的發生有密切關系。

3. 2 Survivin蛋白在卵巢癌發生與發展中的作用 Survivin在結構上與其他IAP家族成員有所不同， 表現為N端僅有一個半胱氨酸/組氨酸為基礎的鋅指結構——部分保守的BIR， C端無環指結構， 代之以α螺旋纏繞區， 體外實驗顯示缺失該結構可增強其凋亡抑制功能。Survivin通過直接或間接抑制Caspase的活性來阻斷內、外源性兩個凋亡途徑中的最后通路而抑制凋亡， 還可間接借助分子中唯一的BIR結構同線粒體活化因子Smac/DIABLO相作用， 抑制Caspase級聯反應[4]。本研究采用免疫組織化學SP法檢測76例卵巢癌組織和24例卵巢良性上皮性腫瘤中Survivin蛋白的表達， 陽性率分別為63.16%、25.00%。卵巢癌明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤， 這表明Survivin與卵巢癌的發生同樣具有密切聯系。

3. 3 Livin和Survivin在卵巢癌中的相關性 Livin與Survivin雖然同屬于IAP家族， 但它們之間仍存在較多區別。Livin的C端有一個環指樣結構， 而Survivin卻沒有；Livin蛋白只有26.3%的氨基酸序列和Survivin一樣；在腫瘤中Survivin既能調節凋亡也能調節分化， Livin只能調節細胞凋亡[5]。有研究發現正常膀胱組織中Livin不表達， 膀胱癌組織中卻高度表達， 認為Livin可成為早期判斷膀胱癌復發的一個敏感指標， 而不建議Survivin作為判斷膀胱癌是否復發的腫瘤標志物[6]。Yagihashi等[7] 的研究提示胃腸道癌患者Livin抗體表達的陽性率為47.00%， 并且和Survivin抗體沒有相關性。然而在卵巢癌組織中Livin與Survivin的表達有無相關性國內還未見報道， 國外報道也很少。本研究結果顯示， Livin和Survivin蛋白在卵巢癌組織中的含量顯著高于卵巢良性上皮性腫瘤組織（P<0.05）。這表明兩者均在卵巢癌的發生中起了重要的促進作用， 可能具有協同作用。但在實驗中顯示卵巢癌組織中Livin蛋白與Survivin蛋白的表達無相關性， 提示了這兩個基因的轉錄途徑可能具有差異。

參考文獻

[1] Yan B. Research progress on Livin protein： an inhibitor of apoptosis.Mol Cell Biochem， 2011， 357（1-2）：39-45.

[2] Lu S， Zhang B， Wang Z. Expression of survivin， cyclin D1， P21（WAF1）， caspase-3 in cervical cancer and its relation with prognosis. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2005， 25（1）： 78-81.

[3] Premkumar DR， Jane EP， Pollack IF. Cucurbitacin-I inhibits Aurora kinase A， Aurora kinase B and survivin， induces defects in cell cycle progression and promotes ABT-737-induced cell death in a caspase-independent manner in malignant human glioma cells. Cancer Biol Ther， 2015， 16（2）：233-243.

[4] Liu T， Brouha BD. Rapid induction of mitochondrial events and caspase-independent apoptosis in Survivin-targeted melanoma cells. Oncogene， 2004， 23（1）：39-48.

[5] Crnkovi?-Mertens I， Semzow J， Hoppe-Seyler F， et al. Isoform-specific silencing of the Livin gene by RNA interference defines Livin beta as key mediator of apoptosis inhibition in HeLa cells. J Mol Med（Berl）， 2006， 84（3）：232-240.

[6] Xi RC， Sheng YR， Chen WH， et al. Expression of survivin and livin predicts early recurrence in non-muscle invasive bladder cancer. J Surg Oncol， 2013， 107（5）：550-554.

[7] Yagihashi A， Asanuma K， Tsuji N， et al. Detection of anti-livin antibody in gastrointestinal cancer patients. Clin Chem， 2003， 49（7）： 1206-1208.

[收稿日期：2015-10-29]