中藥單體治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的研究進(jìn)展

秦 魏，郭 蒙，李欣雨，李奕衡，孫曉瑩，靳 潔，賈禮伊，曹慧玲，，

references for the clinical treatment and new drug development of DR.

0引言

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病性微血管病變中最重要的表現(xiàn)，是一種具有特異性改變的眼底病變。DR是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，能夠顯著影響患者視力甚至致盲的慢性進(jìn)行性疾病。根據(jù)DR的嚴(yán)重程度將其分為非增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變(NPDR)和增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR)。其中，NPDR的臨床表現(xiàn)為微管瘤形成，視網(wǎng)膜及黃斑水腫，視力下降等。PDR的臨床表現(xiàn)為新生血管生成，玻璃體出血甚至伴有視網(wǎng)膜脫落，視力永久喪失等[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國糖尿病人群中DR的患病率為20.86%，男性DR患病率低于女性，北方和南方糖尿病人群中DR患病率分別為25.32%和14.59%[2]。

DR的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，推測其機(jī)制主要涉及氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、新生血管生成及視網(wǎng)膜神經(jīng)元凋亡等過程[3]。當(dāng)機(jī)體的血糖不能通過正常途徑降解時，會激活細(xì)胞多元醇途徑，從而使細(xì)胞內(nèi)形成高滲透狀態(tài)，損傷視網(wǎng)膜的微循環(huán)。同時，視網(wǎng)膜內(nèi)的高血糖環(huán)境會促進(jìn)糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)的形成，從而進(jìn)一步激活活性氧(ROS)信號通路，促進(jìn)周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。另一方面，高血糖環(huán)境還能夠激活蛋白激酶C(PKC)途徑，上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)，促進(jìn)視網(wǎng)膜新生血管生成。此外，核因子κB(NF-κB)途徑的活化也與PKC途徑的激活密切相關(guān)，從而造成細(xì)胞的炎癥損傷[4-5]。

目前，DR的治療手段主要包括視網(wǎng)膜激光光凝治療、玻璃體切割術(shù)與藥物治療[6]。視網(wǎng)膜激光光凝治療是利用激光破壞視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，使已有新生血管消退并抑制新生血管形成。但是，較強(qiáng)的激光會造成神經(jīng)纖維層、視細(xì)胞及光感受器損傷，同時也會使糖尿病性黃斑水腫加劇。玻璃體切割術(shù)可以將混濁的玻璃體及其皮質(zhì)切除，從而解除纖維增殖膜對視網(wǎng)膜的牽引，該法常用于嚴(yán)重PDR的治療且需要藥物輔助治療。臨床治療藥物包括血管微循環(huán)保護(hù)劑、VEGF抑制劑、糖皮質(zhì)激素等。血管微循環(huán)保護(hù)劑如羥苯磺酸鈣，具有降低血管通透性，改善血管微循環(huán)的功效，多用于DR的預(yù)防和早期治療。VEGF抑制劑包括康柏西普、雷珠單抗及貝伐單抗等，其能夠使新生血管消退，減緩DR進(jìn)程。然而，此類藥物價格昂貴，且隨著藥物濃度降低，新生血管容易再次形成，所以需要長期多次給藥，可大幅增加眼內(nèi)感染風(fēng)險。糖皮質(zhì)激素如地塞米松注射液或緩釋植入劑，其能夠減輕視網(wǎng)膜炎癥反應(yīng)，保護(hù)膠質(zhì)細(xì)胞。但是該藥物價格較高，長期使用可引發(fā)白內(nèi)障等多種不良反應(yīng)[6]。

DR臨床用藥多以對癥治療為主，我國傳統(tǒng)中藥組方與中藥單體在DR治療實(shí)踐中積累了寶貴經(jīng)驗(yàn)，可為DR治療提供有益補(bǔ)充。本文綜述了代表性中藥組方與中藥單體成分在DR治療中的應(yīng)用實(shí)踐與機(jī)制探索，以期為DR的臨床治療與新藥研發(fā)提供參考。

1中藥組方對DR的治療作用

傳統(tǒng)中醫(yī)將DR歸屬于“消渴內(nèi)障”和“消渴目病”之列，認(rèn)為DR主要與肝腎脾有關(guān)，久病傷陰，氣虛無力推動血行，導(dǎo)致血瘀，最終脈絡(luò)瘀阻，長期目失所養(yǎng)，終成本病。多種中藥組方都具有益氣生津，通絡(luò)明目，活血祛瘀等功效，能夠顯著改善DR患者的不適癥狀[7]。

多種中藥組方已廣泛用于DR臨床治療。芪明顆粒(黃芪、葛根、地黃、枸杞子、決明子、茺蔚子、蒲黃、水蛭)常用于2型糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療。有研究選取16例NPDR患者，觀察使用芪明顆粒治療4、8、12wk后患者視力、眼平均灌注壓、眼底出血面積、糖化血紅蛋白、視網(wǎng)膜血氧飽和度和血管管徑的改變程度。研究發(fā)現(xiàn)，藥物治療后患者的視力水平、眼平均灌注壓、眼底出血面積和視網(wǎng)膜血管管徑的改變并無明顯差異，但糖化血紅蛋白及視網(wǎng)膜靜脈血氧飽和度顯著降低，同時動靜脈血氧飽和度差值顯著升高[8]。表明芪明顆粒可通過增強(qiáng)視網(wǎng)膜血液循環(huán)，改善微血管缺氧和缺血損傷，緩解DR癥狀。

另一研究應(yīng)用復(fù)方血栓通膠囊(三七、黃芪、丹參、玄參)聯(lián)合前列地爾對80例DR患者開展1mo的臨床治療，采用雙盲抽簽法將其分為對照組和聯(lián)合用藥組，對照組僅靜脈滴注前列地爾注射液，聯(lián)合用藥組在此基礎(chǔ)上口服復(fù)方血栓通膠囊。觀察患者的視野灰度值、血管瘤數(shù)量、出血斑面積、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(TAC)、丙二醛(MDA)、白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-10、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、血清活性多肽和富含半胱氨酸酸性分泌蛋白的變化情況。結(jié)果表明，與對照組相比，聯(lián)合用藥組臨床療效總有效率顯著提升，且無明顯不良反應(yīng)發(fā)生，該組患者的視野灰度值、血管瘤數(shù)量及出血斑面積顯著降低。此外，聯(lián)合用藥組SOD和TAC明顯升高，而MDA含量降低，IL-2、TNF-α、血清活性多肽和富含半胱氨酸酸性分泌蛋白水平顯著下調(diào)，且IL-10水平明顯上調(diào)，從而顯著提升了治療效果[9]。表明復(fù)方血栓通膠囊可通過提升機(jī)體對抗氧化應(yīng)激反應(yīng)能力及減少炎癥反應(yīng)，從而減輕視網(wǎng)膜血管和內(nèi)皮細(xì)胞損傷。

血府逐瘀湯(桃仁、紅花、當(dāng)歸、生地、檀香、丹參、牛膝、枳殼、赤芍、柴胡、甘草、桔梗、川芎)是以活血行氣化瘀為主的一味方劑。有研究選取68例DR患者隨機(jī)分為對照組和聯(lián)合治療組，對照組僅用常規(guī)降血糖藥物聯(lián)合激光方式治療，聯(lián)合治療組在上述基礎(chǔ)上服用血府逐瘀湯，治療時長為4wk。觀察患者視力水平、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、TNF-α和IL-6的變化情況。結(jié)果表明，與對照組相比，聯(lián)合治療組患者視力水平明顯提高，同時該治療方案可下調(diào)DR患者體內(nèi)炎癥因子(CRP、TNF-α、IL-6)的水平[10]。提示血府逐瘀湯可能通過減弱炎癥反應(yīng)延緩DR進(jìn)展。

2中藥單體對DR的治療作用

中藥單體是指中草藥中的單一活性成分，其化學(xué)結(jié)構(gòu)明確且具有多種藥理活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗菌等，同時也是目前新藥研發(fā)的重要來源。中藥單體兼具中藥和化學(xué)藥物的雙重優(yōu)勢，一方面中藥單體具有傳統(tǒng)中藥療效確切、安全可靠、毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)，另一方面中藥單體具有化學(xué)藥物結(jié)構(gòu)明確的優(yōu)點(diǎn)，可為新藥研發(fā)提供新母核與新思路。

2.1石斛多糖石斛是一味名貴的傳統(tǒng)中藥材，最早見于《神農(nóng)本草經(jīng)》。石斛的已知化學(xué)成分包括多糖、生物堿、聯(lián)芐類和香豆素等多種類型。其中，石斛多糖是其主要成分，具有降血糖和抗氧化等重要作用。

李靜文等[11]采用鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射構(gòu)建糖尿病SD大鼠模型，建模6wk后，石斛多糖(100、200、300mg/kg)灌胃給藥治療8wk。采用Western blotting檢測視網(wǎng)膜中IL-6、TNF-α、VEGF的表達(dá)水平，采用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測血清中IL-6和TNF-α的含量，采用免疫組織化學(xué)法檢測視網(wǎng)膜中NF-κB的表達(dá)水平。結(jié)果表明，與模型組相比，不同劑量的石斛多糖均能夠下調(diào)大鼠視網(wǎng)膜中IL-6、TNF-α、VEGF及NF-κB的表達(dá)水平，同時下調(diào)血清中IL-6和TNF-α的含量。

DR患者多表現(xiàn)出視網(wǎng)膜微血管損傷，而內(nèi)皮細(xì)胞受損是血管病變的早期階段。張貝貝等[12]在體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞系(HUVEC)并進(jìn)行高濃度葡萄糖(22mmol/L)誘導(dǎo)干預(yù)，同時設(shè)置不同劑量石斛多糖處理組(50、300、500mg/L)，作用時間24、48h。采用MTT法檢測HUVEC細(xì)胞凋亡情況，采用RT-PCR法檢測HUVEC細(xì)胞中B細(xì)胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白和BCL2關(guān)聯(lián)X(Bax)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與單一高糖誘導(dǎo)相比，隨著培養(yǎng)基中石斛多糖濃度的增加，HUVEC細(xì)胞形態(tài)逐步趨于正常，石斛多糖以劑量依賴方式抑制HUVEC細(xì)胞凋亡，顯著上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表達(dá)水平，下調(diào)促凋亡蛋白Bax mRNA表達(dá)水平。

上述研究表明，石斛多糖可通過NF-κB信號通路下調(diào)炎癥因子和VEGF水平，抑制大鼠視網(wǎng)膜中的炎癥反應(yīng)及新生血管形成。同時，石斛多糖可通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，預(yù)防糖尿病血管病變。但是，目前石斛多糖并未見相關(guān)DR臨床實(shí)踐的報道。

2.2葛根素葛根素是從豆科植物野葛的根部組織中提取得到的一種黃酮類中藥單體。葛根素涉及眼部疾病的研究報道十分廣泛，如擴(kuò)張視網(wǎng)膜血管，改善視網(wǎng)膜微循環(huán)等。DR的常見癥狀為視網(wǎng)膜新生血管形成，從而導(dǎo)致視網(wǎng)膜水腫、出血甚至脫離等嚴(yán)重后果。有報道指出，葛根素可抑制大鼠視網(wǎng)膜中新生血管的形成過程，提示該中藥單體可用于DR的臨床治療。

岑璐莎[13]采用氧誘導(dǎo)法構(gòu)建初生SD大鼠的新生血管模型，該法的優(yōu)點(diǎn)是可排除血糖因素對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。建模成功后，葛根素處理組(250、500mg/kg)灌胃給藥治療4wk。采用熒光素眼底血管造影結(jié)合眼底照相檢測大鼠眼底視網(wǎng)膜中新生血管形成及滲漏區(qū)域改變情況。采用免疫熒光染色法檢測視網(wǎng)膜中血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(PECAM-1)的表達(dá)水平。采用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測玻璃體中VEGF的表達(dá)水平。結(jié)果表明，與空白組相比，隨著葛根素濃度的升高，大鼠視網(wǎng)膜新生血管滲漏程度逐漸下降，且葛根素處理(500mg/kg)能夠顯著下調(diào)PECAM-1的表達(dá)水平，而其小劑量組未見明顯改變。此外，不同劑量葛根素處理均能夠顯著下調(diào)VEGF的表達(dá)水平。

宋晗等[14]采用STZ腹腔注射構(gòu)建糖尿病Wistar大鼠模型，葛根素(80mg/kg)依次腹腔注射給藥1、3、5mo。采用HE染色法和透射電子顯微鏡分析糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的病變情況。研究發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，葛根素處理組大鼠的體質(zhì)量和血糖改變不顯著。1mo時，模型組大鼠表現(xiàn)出輕微的視網(wǎng)膜病變癥狀，而到5mo時，該組大鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)明顯水腫和新生血管，色素上皮細(xì)胞色素顆粒顯著減少，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞受損。與之相比，直至5mo時，葛根素處理組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)依然維持正常，色素上皮細(xì)胞色素顆粒下降且神經(jīng)節(jié)細(xì)胞形態(tài)僅發(fā)生輕微改變。

張衛(wèi)廣[15]隨機(jī)將69例DR患者分為對照組和聯(lián)合用藥組，對照組給予降血糖等常規(guī)治療，聯(lián)合用藥組在上述基礎(chǔ)上給予葛根素靜脈滴注治療(每次400mg)，治療15d，觀察臨床療效(視力、微血管瘤、眼底出血程度)和視網(wǎng)膜平均光敏度的變化情況。結(jié)果表明，與對照組相比，葛根素可明顯提升臨床療效總有效率，同時顯著改善視網(wǎng)膜平均光敏度。

2.3川芎嗪川芎嗪是一種提取自傳統(tǒng)中藥川芎的生物堿類中藥單體，具有鈣離子拮抗劑和清除氧自由基的作用，從而提升機(jī)體抗氧化應(yīng)激水平。

欒守婧等[16]采用STZ腹腔注射構(gòu)建糖尿病Wistar大鼠模型，川芎嗪(150mg/kg)灌胃給藥16wk。采用免疫組織化學(xué)法檢測視網(wǎng)膜中Bcl-2和Bax表達(dá)水平。采用透射電子顯微鏡觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)。同時，檢測AGEs變化水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與糖尿病組相比，川芎嗪處理組AGEs含量顯著減少，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡程度明顯減輕，細(xì)胞中Bcl-2表達(dá)顯著上調(diào)，而Bax表達(dá)下調(diào)。

時姣[17]隨機(jī)將93例NPDR患者分為小劑量(每次120mg)和大劑量(每次240mg)鹽酸川芎嗪注射液治療組，連續(xù)給藥14d后停藥14d，隨后再次連續(xù)給藥14d，觀察臨床療效。采用彩色多普勒超聲檢測患者視網(wǎng)膜中央動脈舒張末期血流速度(EDV)、收縮期峰值血流速度(PSV)和阻力指數(shù)(RI)。采用鐵離子還原法、硫代巴比妥酸法和黃嘌呤氧化酶法分別檢測TAC、MDA和SOD水平。研究發(fā)現(xiàn)，與小劑量組相比，大劑量組整體血流動力學(xué)水平顯著改善，其中EDV和PSV水平明顯增高且RI水平明顯減弱，TAC和SOD水平顯著上升，而MDA水平顯著下降，其臨床療效總有效率顯著提升。兩組之間不良反應(yīng)發(fā)生率無明顯差異。推測由于小劑量川芎嗪進(jìn)入人體后半衰期較短，其有效作用時間縮短，導(dǎo)致療效欠佳，而大劑量給藥之后既能增強(qiáng)治療效果，又有良好的安全性。

郝堯等[18]隨機(jī)將104例NPDR患者分組，其中川芎嗪治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予川芎嗪注射液(240mg/L)聯(lián)合治療15d，觀察川芎嗪對患者氧化應(yīng)激反應(yīng)和黃斑水腫的影響。采用葡萄糖氧化酶法檢測血糖含量。采用鐵離子還原法、硫代巴比妥酸法和黃嘌呤氧化酶法分別檢測TAC、MDA和SOD的水平。結(jié)果表明，與治療前相比，川芎嗪治療組空腹血糖和餐后2h血糖含量均顯著下降，但與常規(guī)治療的對照組相比，上述血糖含量的改變無明顯差異。與對照組相比，川芎嗪治療能夠明顯升高TAC和SOD水平，同時降低MDA水平，且川芎嗪治療組黃斑水腫發(fā)生率顯著下降，臨床治療有效率顯著升高。但該研究臨床樣本量有限且未開展長期隨訪工作，最終的治療效果有待深入研究。

上述研究表明，川芎嗪可通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡，下調(diào)AGEs含量等多個途徑延緩DR發(fā)展進(jìn)程。

2.4β-欖香稀β-欖香稀是一種提取自傳統(tǒng)中草藥莪術(shù)根莖部位的單體成分，具有抗腫瘤活性。有報道指出，機(jī)體持續(xù)的高血糖環(huán)境會促進(jìn)視網(wǎng)膜中炎癥因子的大量釋放。然而，β-欖香稀可通過抑制炎癥因子和VEGF的表達(dá)水平減輕DR中視網(wǎng)膜的損傷。但是，目前并無β-欖香稀用于治療DR的臨床研究報道。

李寶華等[19]采用STZ腹腔注射構(gòu)建糖尿病SD大鼠模型，β-欖香稀處理組(40、80mg/kg)灌胃給藥12wk。采用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測大鼠視網(wǎng)膜組織、房水和血清中細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1)和IL-1β含量。采用免疫組織化學(xué)法和Western blotting檢測視網(wǎng)膜中ICAM-1和IL-1β表達(dá)水平。研究表明，與模型組相比，β-欖香稀治療可顯著降低血清和視網(wǎng)膜中ICAM-1和IL-1β含量，且大劑量組(80mg/kg)下調(diào)更明顯。另外，β-欖香稀大劑量組下調(diào)視網(wǎng)膜中ICAM-1和IL-1β蛋白表達(dá)水平的作用更強(qiáng)。值得注意的是，大鼠房水中ICAM-1和IL-1β的含量在治療前后均未見明顯改變。表明β-欖香稀能夠以劑量依賴的方式抑制視網(wǎng)膜中炎癥因子的表達(dá)，提示其可以應(yīng)用于DR的防治過程。

帥天姣等[20]采用STZ腹腔注射構(gòu)建糖尿病Wistar大鼠模型，β-欖香稀處理組玻璃體腔注射給藥干預(yù)。采用RT-PCR法檢測視網(wǎng)膜中沉默信息調(diào)節(jié)因子(SIRT1)表達(dá)水平。采用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測玻璃體中VEGF表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，β-欖香稀干預(yù)處理能夠顯著上調(diào)視網(wǎng)膜中SIRT1表達(dá)水平，同時下調(diào)玻璃體中VEGF表達(dá)水平。提示β-欖香稀治療DR的作用機(jī)制與促進(jìn)SIRT1表達(dá)，抑制VEGF表達(dá)密切相關(guān)。

2.5人參皂苷人參皂苷Rg3是一種分離自名貴中藥人參中的四環(huán)三萜類單體成分，具有抗腫瘤活性，同時也表現(xiàn)出良好的抗氧化功效。有研究指出，人參皂苷可減弱大鼠視網(wǎng)膜的氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡和新生血管形成，保護(hù)視網(wǎng)膜。但是，目前臨床上尚未見人參皂苷用于治療DR的研究實(shí)踐。

王皎皎等[21]采用STZ腹腔注射構(gòu)建糖尿病SD大鼠模型，人參皂苷Rg3處理組(0.5、5mg/kg)腹腔注射給藥28d。采用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法檢測SOD和MDA含量，采用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測乳酸脫氫酶(LDH)含量。采用TUNEL染色法和HE染色分別檢測細(xì)胞凋亡程度和視網(wǎng)膜組織形態(tài)。采用免疫組織化學(xué)法檢測視網(wǎng)膜中ICAM-1和VEGF表達(dá)水平。采用Western blotting檢測ICAM-1、VEGF、Bcl-2、Bax、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、磷脂酰肌醇-3-羥激酶(PI3K)、絲氨酸/蘇氨酸激酶(Akt)和p-Akt表達(dá)水平。采用LY294002抑制劑(0.5mg/kg)靜脈注射給藥28d，驗(yàn)證PI3K-Akt/PKB 通路。研究表明，與模型組相比，人參皂苷Rg3以劑量依賴的方式顯著緩解視網(wǎng)膜病變程度。與小劑量組相比，人參皂苷Rg3大劑量組上調(diào)SOD水平且下調(diào)MDA和LDH水平的作用更強(qiáng)。同時，大劑量組ICAM-1和VEGF表達(dá)水平顯著下降，且細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯減少(Bcl-2表達(dá)增高，Bax和cleaved-Caspase-3表達(dá)減少)。此外，大劑量人參皂苷Rg3干預(yù)能夠顯著上調(diào)PI3K和p-Akt表達(dá)，而Akt表達(dá)水平未見明顯變化。LY294002抑制劑的驗(yàn)證結(jié)果也證明了上述結(jié)論的正確性。推測上述作用機(jī)制與PI3K-Akt/PKB信號通路激活之間存在密切聯(lián)系。

人參皂苷Rg1是一種來源于中藥人參的三醇類單體化合物。劉松[22]采用STZ腹腔注射構(gòu)建糖尿病Wistar大鼠模型，人參皂苷Rg1處理組(2g/kg)灌胃給藥12wk。采用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測大鼠血清中胱抑素C與趨化素含量。采用全自動生化分析儀檢測大鼠空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及尿白蛋白量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，人參皂苷Rg1治療后能夠顯著降低FPG、HbA1c、TG、TC、LDL-C、hs-CRP、尿白蛋白量及胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。此外，人參皂苷Rg1處理可顯著下調(diào)胱抑素C與趨化素水平。提示DR進(jìn)程中胱抑素C與趨化素水平升高可能與脂質(zhì)和血糖代謝紊亂，胰島素抵抗提升等生理變化過程有關(guān)。

2.6綠原酸和營清熱方(金銀花、當(dāng)歸、玄參、生地黃、枸杞子、黃精、蒲公英、牛蒡子)在臨床上主要用于治療早期DR，其作用機(jī)制可能與抑制AGEs合成關(guān)系密切。經(jīng)高效液相色譜鑒定表明，該中藥組方的主要單體成分包括綠原酸、阿魏酸和牛蒡子苷[23]。

王蕾蕾等[23]在體外以葡萄糖和果糖為反應(yīng)底物合成構(gòu)建了AGEs模型，同時設(shè)置不同濃度綠原酸處理組(0.08、0.4、2、10mmol/L)予以干預(yù)。采用熒光光譜儀檢測熒光強(qiáng)度以判定綠原酸對AGEs合成作用的影響。結(jié)果表明，與模型組相比，綠原酸處理組(0.4、2、10mmol/L)能夠顯著抑制葡萄糖-AGEs的合成過程，而綠原酸處理組(2、10mmol/L)可顯著抑制果糖-AGEs的合成過程。值得注意的是，阿魏酸和牛蒡子苷不僅無法抑制AGEs合成，反而表現(xiàn)出促進(jìn)AGEs合成的效果，該作用機(jī)制暫不明確，仍需深入探討。推測綠原酸是和營清熱方發(fā)揮抗AGEs合成作用的重要原因。但是，綠原酸并非是該組方中唯一或含量最高的單體成分，提示中藥組方中單體成分的藥理作用與其含量之間并非是簡單的正相關(guān)關(guān)系。

劉嫻等[24]采用脂多糖(100ng/mL)誘導(dǎo)構(gòu)建視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞模型，同時設(shè)置不同劑量綠原酸處理組(10、20、50μmol/L)。采用CCK-8法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測細(xì)胞增殖與凋亡。采用Western blotting檢測Ki67、Bcl-2、Bax、Caspase-3、p65和磷酸化p65表達(dá)水平。采用ELISA檢測TNF-α、IL-6和IL-10含量。研究表明，10、20μmol/L綠原酸處理不會顯著影響內(nèi)皮細(xì)胞活力，但50μmol/L綠原酸處理會使細(xì)胞活力減弱。與脂多糖處理組相比，當(dāng)綠原酸大于10μmol/L時，其可以恢復(fù)細(xì)胞增殖能力且抑制細(xì)胞凋亡，同時顯著上調(diào)Ki67和Bcl-2表達(dá)，增加IL-10水平，下調(diào)Bax和Caspase-3表達(dá)，降低TNF-α和IL-6水平。另外，磷酸化p65與p65比值顯著下降。

上述研究表明，綠原酸可通過抗AGEs合成能力影響DR的發(fā)生與發(fā)展。另一方面，其可阻礙p65活化過程，從而抑制視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與炎癥反應(yīng)發(fā)生。但是，目前臨床應(yīng)用上仍未見綠原酸治療DR的文獻(xiàn)報道。

3結(jié)語

白藜蘆醇、枸杞多糖、柚皮苷、黃芪多糖、黃芪甲苷、姜黃素及五味子乙素等中藥單體也具有改善DR的作用。柚皮苷可以干預(yù)DR中Müller細(xì)胞的增殖，并通過NF-κB信號途徑提高抵抗氧化應(yīng)激反應(yīng)能力，抑制炎癥反應(yīng)進(jìn)程，保護(hù)視網(wǎng)膜[25]。需要注意的是，DR是由于胰島素代謝異常引起的眼組織及血管微循環(huán)改變，最終發(fā)展為視功能損壞。所以，DR最根本的治療手段是控制糖尿病，將血糖控制到正?；蚪咏Ｋ?，在此基礎(chǔ)上，采用中藥單體或中藥組方輔助治療DR。

目前，中藥單體或中藥組方在DR治療中依舊存在一定問題，如臨床應(yīng)用中病例樣本數(shù)量不足，臨床療效評價不準(zhǔn)確等。同時，現(xiàn)有中藥單體對DR治療作用機(jī)制的探討相對比較粗淺。因此，未來DR的治療工作可以圍繞以下四點(diǎn)展開：(1)繼續(xù)發(fā)掘傳統(tǒng)經(jīng)典中醫(yī)組方，同時探索新型中藥單體或配伍在DR治療中的應(yīng)用；(2)增加中藥單體臨床應(yīng)用的樣本數(shù)量，探索中藥單體和其它DR治療手段聯(lián)合應(yīng)用的可行性；(3)中藥單體治療DR的臨床療效評估可參考DR嚴(yán)重程度量表(DRSS)，同時可以聯(lián)合超廣角熒光素眼底血管造影、光相干斷層掃描(OCT)及OCT血管成像等影像學(xué)技術(shù)進(jìn)行療效的綜合評價[26]；(4)在細(xì)胞或動物實(shí)驗(yàn)層面開展更為深入的中藥單體對DR治療作用的分子機(jī)理研究。相信隨著藥物篩選與研究的深入開展，更多具有優(yōu)良活性的中藥單體會被發(fā)掘，從而為中藥單體類DR治療藥物研發(fā)提供新思路。