熒光 PCR探針熔解曲線法檢測老年肺結(jié)核患者耐藥性的價值

王智慧 董雅坤 池躍朋 邸紅芹 梁亞充 謝蘭品

隨著人口老齡化，老年肺結(jié)核及耐藥患者的逐年增加已成為全世界結(jié)核病流行的普遍現(xiàn)象，若不能及時確診，極易誤診誤治，嚴(yán)重影響老年結(jié)核病患者的治療轉(zhuǎn)歸。因此，對老年耐藥肺結(jié)核患者的早期診斷和治療十分重要。筆者應(yīng)用熒光PCR 探針熔解曲線法檢測老年肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌(MTB)臨床分離株對一線抗結(jié)核藥品的耐藥性，以評價該方法檢測老年耐藥肺結(jié)核患者的臨床應(yīng)用價值。

資料和方法

一、研究對象

回顧性搜集2018年9月至2020年10月河北省胸科醫(yī)院收治的159例年齡≥65歲的老年肺結(jié)核患者作為研究對象，所有患者肺結(jié)核診斷明確[1]，具有影像學(xué)檢查陽性體征、BACTEC MGIT 960培養(yǎng)陽性、對硝基苯甲酸(PNB)鑒別培養(yǎng)基生長試驗(yàn)初步菌種鑒定為MTB，且臨床資料充分。其中，男101例(63.52%)，女58例(36.48%)；年齡范圍65～90歲，平均年齡(70.8±5.6)歲。

二、研究方法

1.試劑和儀器：BACTEC MGIT 960快速全自動分枝桿菌培養(yǎng)及藥物敏感性檢測系統(tǒng)和BACTEC MGIT 960液體藥物敏感性檢測試劑盒(美國BD公司)；EctractorTM34快速核酸提取儀(北京博奧生物集團(tuán)有限公司)；MTB耐藥突變檢測試劑盒(包括利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素)、實(shí)時熒光定量PCR檢測系統(tǒng)、MTB核酸提取試劑均購自廈門致善生物科技股份有限公司；Bio-Rad CFX96 PCR擴(kuò)增儀(美國Bio-Rad公司)。

2.痰標(biāo)本前處理及分離培養(yǎng)：取患者0.5 ml 經(jīng)N-乙酰-L-半胱氨酸(NALC)-NaOH消化液處理過的痰液樣本重懸液加至含MTB添加劑的液體培養(yǎng)管中，混勻后放入BACTEC MGIT 960液體培養(yǎng)系統(tǒng)中，儀器報陽后取培養(yǎng)液進(jìn)行初步菌種鑒定。……