姜藤茶對寒凝血瘀痛經大鼠的影響

孟 君，秦畫置?，周 揚，李 丹，劉昊奇，鄧郊梅，楊 知

（1.株州千金藥業股份有限公司，株州 412000；2.湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，長沙 400125）

痛經（dysmenorrhea）是一種較為常見的婦科疾病，已經嚴重影響婦女正常工作和生活。痛經是指出現在月經期和月經期前后的周期性下腹痛，常發生在月經前和月經期，偶爾發生在月經期后數日內[1-3]。痛經的癥狀：下腹部呈痙孿性疼痛，有的會痛引腰骶，甚至嚴重者可能會出現劇痛難忍，并伴有惡心嘔吐，頭昏厥逆[4-5]。痛經分為原發性和繼發性兩種痛經。原發性痛經是指痛經在初潮后的幾年內發生且生殖器官無器質性病變者[6]。中醫認為痛經的病機是邪氣內伏，氣血阻滯造成不通則痛或者說不榮則痛。痛經患者的食療方法主要有以下幾種：姜棗紅糖水（將干姜切片，紅棗去核，煎煮后把紅糖放下溶開，喝湯吃大棗，具有溫經通絡的作用）、當歸生姜羊肉湯（在煲羊肉的時候適當的放入當歸和生姜，既可以去腥又可溫通經絡，食用時可加適量的黃酒，對治療痛經十分有效）、山楂葵瓜子紅糖湯（將山楂和葵瓜子煎炒后磨成粉，用紅糖沖服）。其中姜和紅糖是痛經食療中比較常用的食材。而藤茶，不是茶，殊勝茶。藤茶是一種藥食兩用的植物，《中國中草藥匯編》記載：藤茶味甘淡，性涼，具有清熱解毒，降暑生津，祛風濕，強筋骨，消炎利尿，抗心律失常，抗心肌缺血，緩解酒精作用等功效。長期飲用對皮膚癬癩，黃疸性肝炎，感冒風熱，咽喉腫痛，急性結膜炎，痛癤，高血壓，高血脂，高血糖，護扶養顏等都有極好作用。姜藤茶由紅糖、姜、藤茶、低聚木糖和菊花等組成，具有舒緩痛經等功能。本實驗對姜藤茶的藥理作用進行實驗研究，為姜藤茶開發提供了試驗依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 藥品和試劑

姜藤茶（原料成分為紅糖、姜、藤茶、低聚木糖和菊花），批號 20180930：株州千金藥業股份有限公司；痛經寶（原料成分為紅花，當歸，肉桂，三棱，莪術，丹參，五靈脂，木香和延胡索（醋制）），批號180901：仲景宛西制藥股份有限公司；阿司匹林（原料成分為乙酰水楊酸），批號 1802086：阿斯利康制藥有限公司；苯甲酸雌二醇，批號180802：四川省泰信動物藥業有限公司；縮宮素，批號170816：馬鞍山豐原制藥有限公司；鹽酸腎上腺素注射液，批號180104：丹東醫創藥業有限責任公司；大鼠 6酮前列腺素F1α試驗盒，批號 2018-12、大鼠 β-內腓肽試驗盒，批號2018-12：江蘇晶美生物科技有限公司。

1.1.2 儀器

ES-1000E 電子天平：長沙湘平科技有限公司；16號灌胃器：東西儀器（北京）科技有限公司；一次性使用人體靜脈血樣采集容器：湖南省瀏陽市醫用儀具廠；一次性使用血樣采集針：山東省奧賽特醫療器械有限公司；SA-6000全自動血液動態粘度分析儀：北京賽科希德科技發展有限公司。

1.1.3 實驗動物

SD大鼠：湖南斯萊克景達實驗動物有限公司（實驗動物生產許可證號SCXK（湘）2016-0002，實驗動物使用許可證號SYXK（湘）2014-0012，實驗動物質量合格證號 No.43004700054992、No.43004700055436，湖南省實驗動物設施使用證明No.00091337、No.00091531）。

1.2 方法

1.2.1 對痛經模型大鼠的影響

1.2.1.1 分組及造模 SD大鼠，雌性，70只，隨機分為7組：空白對照組，模型組，姜藤茶低、中、高劑量組，痛經寶顆粒組，阿司匹林組。除空白組皮下注射生理鹽水外，其余60只，皮下注射苯甲酸雌二醇，連續10 d，1次/d（第1 d：0.5 mg/只，第 2～9 d：0.2 mg/只，第 10 d：0.5 mg/只）。

1.2.1.2 治療方法 造模同時給藥，空白、模型組（蒸餾水），姜藤茶低、中、高劑量組（1.8、3.6、7.2 g/kg），痛經寶顆粒組（3.6 g/kg），阿司匹林組（0.1 g/kg），灌胃體積10 mL/kg，1次/d，連續10 d。

1.2.1.3 檢測指標 最后一次給藥后1 h，腹腔注射縮宮素10 U/只，觀察30 min內大鼠疼痛反應，以扭體反應（大鼠腹部收縮內凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側肢體內旋）為子宮強烈收縮（痛經）的指標。30 min后，大鼠麻醉，腹主動脈取血，3 000 r/min 離心15 min，取上清液，ELISA試劑盒測定β-內腓肽（β-EP）和6酮前列腺素F1α的濃度。取子宮、卵巢，固定于福爾馬林溶液中，HE染色，觀察組織形態的變化。

1.2.2 對寒凝血瘀模型大鼠的影響

1.2.2.1 分組及給藥 SD大鼠，雌性，70只，隨機分為7組：空白對照組（蒸餾水），模型組（蒸餾水），姜藤茶低、中、高劑量組（1.8、3.6、7.2 g/kg），痛經寶顆粒組（3.6 g/kg），阿司匹林組（0.1 g/kg）。灌胃給藥，1次/d，連續7 d，給藥體積10 mL/kg。

1.2.2.2 造模 第6、7 d給藥1 h后，皮下注射鹽酸腎上腺素注射液 0.6 mg/kg，大鼠浸入冰水（0～2 ℃）刺激1次，4 h后再次注射鹽酸腎上腺素注射液，造成大鼠寒凝血瘀證模型。

1.2.2.3 指標檢測 次日腹主動脈取血，SA-6000全自動血液動態粘度分析儀測定大鼠血液流變學指標（全血粘度、血漿粘度）及紅細胞壓積。

1.3 統計分析方法

2 結果

2.1 對痛經模型大鼠的影響

2.1.1 對扭體次數、β-內腓肽和6酮前列腺素F1α的影響

與空白對照組比較，模型組扭體次數顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，姜藤茶低、中、高劑量組、痛經寶組和阿司匹林組大鼠扭體次數顯著降低（P＜0.01）。與空白對照組比較，模型組大鼠β-內腓肽（β-EP）和6酮前列腺素F1α顯著降低（P＜0.01），與模型組比較，姜藤茶高劑量組和痛經寶組大鼠 β-EP顯著升高（P＜0.01），且痛經寶組大鼠6酮前列腺素F1α顯著升高（P＜0.01）。結果見表1。

表1 姜藤茶對扭體次數、β-內腓肽和6酮前列腺素F1α的影響（±SD，n=10）Table 1 Effect of jiangtengcha on writhing times,β-endorphin and 6-keto-prostaglandin F1α (±SD,n=10)

表1 姜藤茶對扭體次數、β-內腓肽和6酮前列腺素F1α的影響（±SD，n=10）Table 1 Effect of jiangtengcha on writhing times,β-endorphin and 6-keto-prostaglandin F1α (±SD,n=10)

注：與空白對照組比較，“*”表示 P＜0.05，“**”表示 P＜0.01；與模型組比較，“Δ”表示 P ＜0.05，“ΔΔ”表示 P ＜0.01。

組別 扭體次數/（次/30 min) β-內腓肽/（pg/mL） 6酮前列腺素F1α/（ng/L）空白對照組 0.00±0.00 3 774.86±391.82 954.23±83.00模型組 10.90±0.99** 2 913.26±270.43** 747.72±137.99**低劑量組 7.30±0.67ΔΔ 2 983.79±145.79 751.40±93.14中劑量組 5.00±0.67ΔΔ 3 113.41±261.51 769.03±54.03高劑量組 3.10±0.74ΔΔ 3 424.75±229.93ΔΔ 817.61±52.86痛經寶組 3.30±0.67ΔΔ 3 679.55±388.71ΔΔ 908.31±99.29ΔΔ阿司匹林組 2.50±0.53ΔΔ 3 176.31±315.06 800.36±115.00

2.1.2 對子宮和卵巢組織學的影響

子宮和卵巢組織學顯示，空白對照組動物卵巢結構和形態發育正常，卵泡形態結構清楚，無異常；子宮內膜間質內均可見嗜酸性粒細胞浸潤，屬于正常發情期變化。模型組卵巢結構和形態發育正常，卵泡形態結構清楚，無異常；子宮內膜無嗜酸性粒細胞浸潤，無發情期變化。姜藤茶低劑量組卵巢結構和形態發育正常，卵泡形態結構清楚，無異常；1例正常發情期變化，子宮內膜間質內可見嗜酸性粒細胞浸潤。姜藤茶中劑量組和痛經組卵巢結構和形態發育正常，卵泡形態結構清楚，無異常；2例正常發情期變化，子宮內膜間質內可見嗜酸性粒細胞浸潤。姜藤茶高劑量組和阿司匹林組卵巢結構和形態發育正常，卵泡形態結構清楚，無異常；3例正常發情期變化，子宮內膜間質內可見嗜酸性粒細胞浸潤。結果見圖1。

圖1 子宮和卵巢組織學圖（HE）Fig.1 Histology of uterus and ovary (HE)

2.2 對寒凝血瘀模型大鼠的影響

2.2.1 對紅細胞壓積的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠紅細胞壓積顯著增加（P<0.05）；與模型組比較，藥物組紅細胞壓積均有減少，但都未見明顯差異（P＞0.05）。結果見表2。

表2 姜藤茶對紅細胞壓積的影響（X ± SD，n=10）Table 2 Effect of jiangtengcha on hematocrit (X ± SD,n=10)

2.2.2 對寒凝血瘀證大鼠血液流變學指標的影響

與空白對照組比較，寒凝血瘀證模型組大鼠全血低、中、高切粘度，低切相對值，紅細胞聚集指數都顯著增高（P＜0.01），卡松粘度明顯增加（P<0.05）；與模型組比較，姜藤茶中劑量組全血低切粘度和低切相對值有明顯降低（P<0.05）；姜藤茶高劑量組全血低、中、高切粘度，低切相對值和紅細胞聚集指數顯著降低（P＜0.01），卡松粘度明顯降低（P<0.05）；痛經寶組全血低、中、高切粘度顯著降低（P＜0.01），低切相對值和卡松粘度明顯降低（P<0.05）；阿司匹林組全血低、中、高切粘度，低切相對值，紅細胞聚集指數和卡松粘度顯著降低（P＜0.01），高切相對值明顯降低（P<0.05）。結果見表3、4。

表3 對寒凝血瘀證大鼠血液流變學的影響（X ± SD，n=10）Table 3 Effect on Hemorheology of rats with cold blood stasis syndrome (X ± SD,n=10)

表4 對寒凝血瘀證大鼠血液流變學的影響（X ± SD，n=10）Table 4 Effect on Hemorheology of rats with cold blood stasis syndrome (X ± SD,n=10)

3 討論

“痛經”最早來自《金匱要略》中提到的“經水不利，少腹滿痛”。《中醫婦科學》教材中，將痛經分為以下類型：氣滯血瘀、寒凝血瘀、濕熱蘊結、氣血虛弱、腎氣虧損[7]。現代醫學普遍認為，神經內分泌失調引起的子宮張力增加和過度痙攣性收縮都可引起原發性痛經，而激素水平失調、催產素、加壓素以及某些自主神經系統遞質如內皮素等與痛經的發病直接相關[8-9]。

方玲等[10]考察臨床經驗方劑經前三劑止痛方（JQF）對痛經模型大鼠子宮前列腺素和雌激素、孕激素的調節作用，JQF能夠有效調節痛經模型大鼠子宮組織中前列腺素和雌激素、孕激素水平，從而抑制子宮平滑肌收縮，降低子宮平滑肌緊張度，可能是其治療痛經的作用機制。朱世鵬[11]用粗針深刺結合手法與細針淺刺不做手法的刺激量對寒凝型痛經大鼠都有鎮痛效果，兩者比較有顯著性差異。不同針刺刺激量對子宮LTB4含量存在不同的調節趨勢，其具體機制有待于進一步研究證明。

本實驗采用苯甲酸雌二醇和縮宮素構建痛經模型時，腹腔注射縮宮素30 min內，模型組大鼠出現劇烈扭體反應，而空白對照組無扭體反應，且兩者扭體反應有顯著性差異，說明痛經模型構建成功[12-15]。而姜藤茶劑量組與模型組比較，扭體反應有顯著差異，說明姜藤茶對痛經模型大鼠有較好的療效，對痛經改善有改善作用。大量文獻研究表明[16-18]，β-內啡肽（β-EP）具有內源性鎮痛作用。β-EP是新的神經遞質或神經調節物質同時具有嗎啡樣活性的神經多肽，在鎮痛及激素的分泌等調節起到作用。其參與生殖內分泌的調節，調控下丘腦-垂體的功能方面起重要作用[19-21]。在痛經模型試驗中，對血清中 β-EP濃度進行檢測，模型組β-EP含量降低，使其鎮痛作用降低，動物模型痛經的發生可能與 β-EP的釋放和活性降低等因素有關，而與模型組比較，姜藤茶高劑量組大鼠β-EP顯著升高，從扭體方面可以得到驗證發現表明姜藤茶對痛經機理有一定影響。

另外，寒凝血瘀，使血流速度減慢，血滯于脈絡，造成血瘀[22-23]。采用冰浴+鹽酸腎上腺素制備寒凝血瘀模型[24-25]時，與空白對照組比較，模型組大鼠全血低、中、高切粘度，低切相對值，紅細胞聚集指數都顯著增高，表明寒凝血瘀模型構建成功。與模型組比較，姜藤茶中劑量組全血低切粘度和低切相對值有明顯降低；姜藤茶高劑量組全血低、中、高切粘度，低切相對值和紅細胞聚集指數顯著降低，卡松粘度明顯降低，說明姜藤茶能降低寒凝血瘀模型大鼠全血粘度及血漿粘度，表明姜藤茶對寒凝血瘀證有一定的改善作用。

4 結論

本實驗通過對痛經和寒凝血瘀兩種模型鼠的一系列研究，實驗結果表明：姜藤茶能減輕痛經大鼠的扭體次數，提高了β-內腓肽和6酮前列腺素F1α水平含量，對痛經有一定改善作用。姜藤茶能降低寒凝血瘀模型大鼠全血粘度及血漿粘度，對寒凝血瘀有一定治療效用。但姜藤茶對痛經和寒凝血瘀模型大鼠在作用機制還不明確，還需進一步研究。