Survivin和mmp-9在宮頸上皮內瘤樣變及宮頸癌中表達及臨床價值

孫紅娜 王月榮 黃勇華 安志強

宮頸癌是常見婦科惡性腫瘤之一，其發病率僅次于乳腺癌，居婦科腫瘤第二位。隨著現代女性生活方式的改變以及工作壓力的增加，宮頸癌的發病率不僅逐年上升，還出現了年輕化趨勢[1-2]。相關研究表明：宮頸癌通常是由宮頸上皮內瘤變發展而來，因此癌前病變的準確診斷及治療有利于對該腫瘤的進一步惡化和發生進行有效控制[3-4]。本研究以86例宮頸癌及宮頸上皮內瘤樣變患者為研究對象，分析Survivin和mmp-9在宮頸上皮內瘤樣變及宮頸癌中表達及其臨床價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇濮陽市第三人民醫院2017年1月至2020年3月收治的86例宮頸癌及宮頸上皮內瘤樣變(CIN Ⅰ～Ⅲ)患者作為本次研究對象，均經臨床病理學確診。收集所有患者手術后病理組織樣本，其中宮頸癌組織22例，患者年齡25～60歲，平均(39.71±4.22)歲；CIN Ⅰ期患者25例，患者年齡25～58歲，平均(39.44±4.19)歲；CIN Ⅱ期患者22例，患者年齡26～59歲，平均(39.90±5.13)歲；CIN Ⅲ期患者17例，患者年齡27～60歲，平均(39.88±4.40)歲；另取宮頸癌癌旁組織20例為對照，患者年齡26～60歲，平均(40.20±5.19)歲。5組患者一般資料對比差異無統計學意義，可進行比較。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化(SP法)檢測Survivin和mmp-9陽性率 收集所有患者手術切除后的病理標本，取適量福爾馬林固定，根據石蠟切片常規步驟脫水、透明、包埋，然后進行連續切片(厚度約5 μm)，然后采用Survivin和mmp-9免疫組化試劑盒(購自上海碧云天生物技術有限公司)進行染色，具體步驟根據試劑盒說明進行操作，最后DBA顯色，顯微鏡下觀察并拍照。蛋白陽性判定標準見表1。

1.2.2 Western Blot檢測Survivin和mmp-9相對表達量 收集患者手術切除后的病理標本，取適量研磨為組織勻漿，總蛋白提取試劑盒(購自上海碧云天生物技術有限公司)提取組織勻漿中蛋白質，BCA蛋白定量試劑盒(購自上海碧云天生物技術有限公司)進行蛋白定量，然后上樣，SDS-PAGE電泳(100 V 90 min)，轉膜，染色，封閉，加一抗孵育，洗膜，二抗孵育，洗膜后曝光、觀察并拍照，Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件獲取Survivin和mmp-9蛋白表達的條帶灰度值。

表1 免疫組化染色陽性判定標準[5]

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 不同宮頸病變類型組織中Survivin陽性表達結果比較

與癌旁組織相比，CIN Ⅰ～Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin陽性表達率均顯著上升(P均<0.05)；與CIN Ⅰ期相比，CIN Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin陽性表達率也均顯著上升(P均<0.05)，而CIN Ⅱ期Survivin陽性率無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 不同宮頸病變類型組織Survivin陽性表達結果比較

2.2 不同宮頸病變類型組織中mmp-9陽性表達結果比較

與癌旁組織相比，CIN Ⅱ、Ⅲ期及宮頸癌患者組織中mmp-9陽性表達率均顯著上升(P均<0.05)，而CIN Ⅰ期患者mmp-9陽性表達率無顯著差異(P>0.05)；與CIN Ⅰ期患者相比，CINⅢ期及宮頸癌患者組織中mmp-9陽性表達率也均顯著上升(P均<0.05)，而CIN Ⅱ期mmp-9陽性表達率無顯著差異(P>0.05)。見表3。

表3 不同宮頸病變類型組織中mmp-9陽性表達結果比較

2.3 不同宮頸病變類型組織中Survivin和mmp-9相對表達量比較

與癌旁組織相比，CIN Ⅰ～Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin和mmp-9相對表達量均顯著升高(P均<0.05)，與CIN Ⅰ期相比，CIN Ⅱ、Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin和mmp-9相對表達量也均顯著升高(P均<0.05)。見表4。

表4 不同宮頸病變類型組織中Survivin和mmp-9相對表達量比較

3 討論

相關研究表明：宮頸癌的發病原因是細胞生物學和病理學相關的多因素、多途徑、多基因共同作用的結果，該腫瘤發病機制目前尚未完全明確[6-7]。Survivin蛋白是與凋亡調控作用相關的蛋白之一，可通過相關信號傳導通路抑制細胞凋亡或調節細胞周期，通常在胚胎中表達，在已分化組織中低表達或不表達，在惡性腫瘤中高表達[8-9]。本研究結果顯示：與癌旁組織相比，CINⅠ～Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin陽性率均顯著上升(P均<0.05)；與CINⅠ期患者相比，CINⅢ期及宮頸癌患者組織中Survivin陽性率也均顯著上升(P均<0.05)，而CINⅡ期Survivin陽性率無顯著差異(P>0.05)。與癌旁組織相比，CIN Ⅰ～Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin相對表達量均顯著升高(P均<0.05)，與CIN Ⅰ期相比，CIN Ⅱ、Ⅲ期及宮頸癌患者組織中Survivin相對表達量也均顯著升高(P均<0.05)。表明：Survivin蛋白的陽性表達率及相對表達量一定程度上隨宮頸上皮內瘤癌變程度加深而顯著升高，且在宮頸癌組織中Survivin蛋白陽性表達率及相對表達量均達到最高。

mmp-9是蛋白水解酶家族的一員，相關研究顯示：該蛋白水平與惡性腫瘤血管形成密切相關，且其在多種腫瘤細胞的增殖、轉移、侵襲等中起重要調控作用[10-11]。宮頸癌相關研究提示：宮頸癌組織中mmps信號通路活化水平與患者預后呈顯著正相關，且早期宮頸癌患者mmp-9的表達與淋巴結轉移有關[12-13]。而在本研究中：與癌旁組織相比，CIN Ⅱ、Ⅲ期及宮頸癌患者組織中mmp-9陽性率均顯著上升(P均<0.05)，而CIN Ⅰ期患者mmp-9陽性率無顯著差異(P>0.05)；與CIN Ⅰ期患者相比，CINⅢ期及宮頸癌患者組織中mmp-9陽性率也均顯著上升(P均<0.05)，而CIN Ⅱ期mmp-9陽性率無顯著差異(P>0.05)。與癌旁組織相比，CIN Ⅰ～Ⅲ期及宮頸癌患者組織中mmp-9相對表達量均顯著升高(P均<0.05)，與CIN Ⅰ期相比，CIN Ⅱ、Ⅲ期及宮頸癌患者組織中mmp-9相對表達量也均顯著升高(P均<0.05)。表明：在宮頸上皮內瘤樣變及宮頸癌中mmp-9蛋白的表達情況與Survivin蛋白類似，即隨宮頸上皮內瘤樣病變程度加深而顯著升高，且在宮頸癌組織中Survivin蛋白陽性表達率及相對表達量均達到最高，但二者調控作用不同。以上結論與前人相關研究中上述指標在癌癥中表達結論類似[14-15]。另外，本研究不足之處在于樣本量較小，且未能對不同宮頸癌病變類型組織中Survivin和mmp-9相對表達量對該腫瘤診斷價值的具體數值進行深入分析，這些將在后續延長樣本納入年限并擴大樣本量展開深入探討。

總之，Survivin和mmp-9在不同宮頸上皮內瘤樣變及宮頸癌中的陽性表達率及表達量存在顯著差異性，可考慮將其表達水平的變化作為宮頸癌病變的診斷依據。