胃癌組織Trx-1、FN1表達及其與臨床病理特征和患者生存的關系

張麗柯 汪建光 劉德純

胃癌是常見消化道惡性腫瘤，近年來隨著人們生活習慣及飲食習慣的改變，胃癌發病率逐漸升高[1]。胃癌的發病機制尚未完全清楚，多基因突變及多階段的演變參與了其進展[2]。硫氧還蛋白-1(thioredoxin，Trx-1)是由108個氨基酸殘基組成的小分子蛋白，能清除單態氧自由基實現抗腫瘤凋亡，與腫瘤的發生、發展、化療耐藥等均相關[3]。纖維連接蛋白1(Fibronetin1，FN1)是1種細胞外非膠原糖蛋白，在細胞黏附、遷移中起著重要作用，并參與胚胎發生、宿主防御等過程，在癌癥進展中也有潛在作用[4]。因而本文通過探究胃癌組織Trx-1、FN1表達及其與臨床病理特征和生存的關系，了解Trx-1、FN1與胃癌發生、發展的關系，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月至2017年1月來我院接受胃癌根治術切除標本105例，男性58例，女性47例，年齡為25～71歲，平均(46.53±9.68)歲。所有標本均在腫瘤切除后30 min內采集，并切取距離腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁組織作為對照，所有組織均迅速凍存于液氮。納入標準：①所有患者術前未經化療，術后經病理學確診為胃癌；②患者病歷資料完整；③所以患者均知情并同意手術。排除標準：①合并其他惡性腫瘤患者；②圍手術期出現嚴重并發癥或術中死亡者；③不能進行隨訪患者。本研究經醫學倫理委員會同意。

1.2 檢測方法

應用免疫組化法檢測胃癌組織及癌旁組織中Trx-1、FN1的表達情況。步驟：石蠟切片用常規二甲苯脫蠟后，用梯度酒精脫水處理，再用枸櫞酸鹽緩沖液進行微波抗原組織修復15 min，PBS沖洗后，用3%H2O2孵育10 min，PBS沖洗2次后，加入正常山羊血清進行封閉20 min，加入兔單抗Trx-1(或兔單抗FN1)，37 ℃下孵育1 h，TBST沖洗2次。加入鼠兔通用二抗，37 ℃下孵育1 h，PBS沖洗2次，再加入DAB顯色劑、蘇木精復染、梯度酒精脫水、二甲苯透明等，最后用中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。以0～4分來判定陽性細胞的百分比(陽性細胞數/總細胞數×100)：陽性細胞百分比<5%(0分)；陽性細胞百分比為6%～25%(1分)；陽性細胞百分比為26%～50%(2分)；陽性細胞百分比為51%～75%(3分)；陽性細胞百分比>75%(4分)。染色強度按無染色，弱、中、強染色分別評為0，1，2，3分。以兩個指標的乘積作為總評分：<4分為低表達，≥4分為高表達。

1.3 觀察指標

所有胃癌患者術后隨訪3年，以電話及門診形式進行，隨訪內容包括：患者病情進展、影像學檢查，記錄患者隨訪期內生存情況，第1年每3個月隨訪1次，第2～3年，每6個月隨訪1次，隨訪截止時間2020年1月。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 Trx-1、FN1在胃癌組織及癌旁組織中的表達情況

胃癌組織中Trx-1、FN1均呈高水平表達(P<0.05)，癌旁組織中Trx-1、FN1呈低表達(P<0.05)，結果見表1。

表1 兩組臨床療效比較/例

2.2 Trx-1、FN1與胃癌臨床病理特征的關系

Trx-1表達與組織分化、浸潤深度有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結轉移、腫瘤大小無關(P>0.05)；FN1表達與組織分化、浸潤深度、淋巴結轉移有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無關(P>0.05)，結果見表2。

2.3 Trx-1、FN1表達與生存分析

隨訪105例中，3年總生存率為58.10%，存活61例。Trx-1高表達組存活27例，低表達組存活34例，差異有統計學意義(P<0.05)；FN1高表達組存活30例，低表達組存活31例，差異有統計學意義(P<0.05)，結果見表3，圖1。

3 討論

我國是胃癌高發國家，就診的不及時使胃癌病死率較高，嚴重影響我國居民生命健康，而對胃癌發病機制的探究一直是研究重點[5]。Trx-1位于細胞質和細胞核中，能調節NF-κB的活性，并抑制程序性細胞死亡，從而促進腫瘤生長[6]。有研究表明Trx-1的高表達與胰腺癌、乳腺癌、肺癌、宮頸癌等疾病發生、發展均相關[7]。潘濤等[8]研究表明Trx-1的表達水平升高與胃癌術后無病生存時間縮短相關，有望成為預測腫瘤復發轉移的標志物之一。本研究中，胃癌組織中Trx-1、FN1均呈高水平表達，癌旁組織中Trx-1呈低表達，結果與前人[9]研究一致。Trx-1表達與組織分化、浸潤深度有關，說明Trx-1與胃癌的發展及侵襲有關。而Trx-1高表達組3年生存率較低表達組的低，說明Trx-1高表達會降低胃癌患者生存時間。腫瘤生長、浸潤與血管生成密切相關，Trx-1的高表達能增加HIF-α表達，使血管內皮生長因子(VEGF)增加，促進腫瘤血管生成，造成腫瘤侵襲[10]；胃癌細胞往往缺氧并發生氧化應激反應，而Trx-1能介導氧化還原的平衡，促進胃癌細胞生長[11]。Trx-1能通過調節凋亡信號調節激酶(ASK-1)活性，從而參與抑制腫瘤細胞凋亡過程[12]。Trx-1還能抑制腫瘤細胞的自發凋亡及藥物誘導的細胞凋亡，降低腫瘤細胞對抗癌藥物的敏感性，不利于預后，因此Trx-1可能成為抗癌治療的藥物靶標[13]。

表2 Trx-1、FN1與胃癌臨床病理特征的關系/例

表3 Trx-1、FN1表達與生存分析/%

圖1 Trx-1表達、FN1表達與生存分析

FN1是細胞外基質蛋白分子，能介導細胞黏附過程，在細胞外基質(EMC)形成和再上皮化中起著關鍵作用，是多種癌細胞形成和發育的重要調控因子，比如乳腺癌、卵巢癌、甲狀腺癌、鼻咽癌[14]。有研究[15]表明FN1能促進鼻咽癌細胞增殖，下降FN1的表達能通過激活NF-κB通路，抑制MMP2及MMP9表達，從而抑制細胞凋亡。本研究中，胃癌組織中FN1均呈高水平表達，癌旁組織中FN1呈低表達，FN1表達與組織分化、浸潤深度、淋巴結轉移有關，說明FN1在胃癌組織中高表達，與胃癌的發生、發展有關。FN1高表達組3年生存率低于低表達組，說明FN1高表達會影響患者生存情況。細胞外基質金屬蛋白酶(MMPs)與腫瘤轉移相關，有研究[16]表明FN1的高表達能通過激活MMP2/MMP9(EMT通路)促進胃癌細胞的增殖、遷徙及侵襲。也有研究[17]表明癌間質的FN1對癌細胞有趨化作用，癌細胞能特異性黏附在癌間質上，并生成和轉移，因而FN1的表達增高可能是胃癌浸潤轉移的機制之一。孫陽等[18]研究表明FN1的表達與KRAS、P53、TGF-β、ECM、細胞黏附和細胞骨架蛋白基因通路有關，FN1可作為腫瘤治療的潛在靶點。本研究還存在一定不足，如樣本量較少，隨訪時間較短，Trx-1、FN1與腫瘤的具體作用機制還未完全解釋清楚，因此還需進行大規模及多中心研究，以提高研究的客觀性。

綜上，Trx-1、FN1在胃癌組織中均呈高表達，與胃癌的侵襲、發展相關，可能參與了腫瘤惡化的調控，并降低患者生存期。