非小細胞肺癌組織中CDKI(P27keap1)和CDK4的表達與患者生存期的相關性研究

李靜靜 穆 慶 孫貝貝

肺癌是我國發病率和死亡率均最高的惡性腫瘤之一，而該腫瘤中，非小細胞肺癌占比達到約80%，且絕多數患者發病就診時已處于中晚期，因此其生存率較[1-2]。另外，肺癌發病機制目前尚未完全清楚，這也是患者預后差、治愈率和生存率均低的原因之一。細胞周期蛋白D依賴性激酶CDK4是細胞周期從G1到S相轉變的關鍵調節因子，相關研究表明：多種癌癥組織中CDK4異常表達，以及迅速出現的該蛋白藥理抑制劑陽性臨床數據已將CDK4確認為抗癌藥物靶標[3-4]。keap1是抑癌基因的一種，近年來相關研究顯示：肺癌組織中keap1基因呈甲基化狀態，故其蛋白表達調控受阻，因而表達量顯著降低[5]。本研究回顧性分析非小細胞肺癌組織中CDKI(P27keap1)和CDK4的表達，并分析其與患者生存期的相關性，以期為該腫瘤患者的臨床診斷及預后評估提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年5月至2019年5月于本院進行手術切除的83例非小細胞肺癌患者為研究對象，所有患者均經病理學診斷確診為非小細胞肺癌，共獲取非小細胞肺癌組織及癌旁組織83例。其中，男性64例，女性19例；年齡35～76歲，平均年齡(51.06±7.22)歲，病理類型：腺癌36例，鱗癌47例；分化程度：高分化5例，中分化56例，低分化22例；TMN分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期31例，Ⅲ期30例，Ⅳ期1例；淋巴結轉移46例，無轉移37例。本研究獲得醫院倫理學委員會批準，入選患者均已簽署知情同意書。

1.2 入選標準

納入標準：①所有患者均經臨床病理學確診為非小細胞肺癌；②病理分期Ⅰ～Ⅳ期；③所有患者術前均未能接受過放、化療及其他藥物治療。排除標準：①伴有主要器官具有重大疾病或嚴重并發癥的患者；②中途退出者；③手術不耐受者。

1.3 方法

免疫組化檢測P27keap1和CDK4的表達：采用免疫組化試劑盒(SP法)以及CDK4、keap1蛋白抗體購自上海碧云天生物技術有限公司，具體檢測流程根據試劑盒說明書進行操作；陽性結果判定[4]：染色結果采用雙盲法，由本院2位病理科醫師獨立進行評分：①染色程度積分標準：0分：無顯色；1分：淺黃色或黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。②染色比例：0分：<5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：>75%。總積分結果為①×②：0分：陰性(-)；1～4分：弱陽性(+)；5～8分：中等陽性(++)；9～12分：強陽性(+++)。③所有患者出院后均進行隨訪，隨訪至2020年5月31日，記錄每位患者生存期。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 keap1表達與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系

不同病理類型非小細胞肺癌患者癌組織keap1表達陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結轉移非小細胞肺癌患者癌組織keap1表達陽性率均存在顯著差異(P<0.05)(表1)。

表1 keap1表達與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系/例

2.2 CDK4表達與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系

不同病理類型非小細胞肺癌患者癌組織CDK4表達陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結轉移非小細胞肺癌患者癌組織CDK4表達陽性率均存在顯著差異(P<0.05)(表2)。

2.3 keap1和CDK4陽性對患者生存期的影響

與keap1陽性非小細胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著縮短(P<0.05)，與CDK4陽性非小細胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著延長(P<0.05)(表3)。

2.4 相關性分析

相關性分析結果顯示：keap1表達陽性率與非小細胞肺癌患者生存期呈顯著負相關(γ<0，P<0.05)，CDK4與非小細胞肺癌患者生存期呈顯著正相關(γ>0，P<0.05)，見表4。

表2 CDK4表達與非小細胞肺癌臨床病理參數的關系/例

表3 keap1和CDK4陽性對患者生存期的影響

表4 蛋白陽性率與非小細胞肺癌患者生存期相關性分析

3 討論

肺癌是全球發病率及致死率均高的惡性腫瘤之一，根據其病理學類型可分為小細胞癌和非小細胞癌[6]。據統計，非小細胞肺癌發病患者人數在肺癌中占比高達80%以上，且其存在轉移和擴散的風險，包括腦轉移和淋巴結轉移，相關研究表明該腫瘤早期手術切除治愈幾率較大，可提高患者存活率，因此其早期臨床診斷及治療至關重要[7-9]。目前該治療方式以手術、化療以及藥物聯合化療等方式為主，但近年來隨著對非小細胞肺癌發病機制的不斷挖掘，分子結合病理的靶向診斷及治療已成為該腫瘤的熱點研究方向[10]。

Keap1是1種胞質蛋白伴侶分子，正常條件下，可通過與NRF3結合將其與E3復合體連接而是泛素化后的NRF2被降解；而當發生氧化應激反應時，其半胱氨酸殘基被氧化修飾因而與DLG基序親和力下降并奮力，抑制了MRF2的降解，從而介導氧化應激反應，研究表明肺癌患者體內的Keap1通常因發生突變的表達量下調[11-12]。本研究結果顯示：不同病理類型非小細胞肺癌患者癌組織CDKI(P27 keap1)表達陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結轉移非小細胞肺癌患者癌組織CDKI(P27keap1)表達陽性率均存在顯著差異，即低分化程度、高TMN分期以及發生淋巴結轉移的非小細胞肺癌患者組織中keap1的陽性率顯著降低(P<0.05)，且與keap1陽性非小細胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著縮短(P<0.05)，另外相關性分析結果顯示：keap1表達陽性率與非小細胞肺癌患者生存期呈顯著負相關(γ<0，P<0.05)，表明隨著非小細胞肺癌的發生和進展，患者癌組織中keap1表達顯著下調，且隨著非小細胞癌進展，其表達進一步降低，預示的患者生存期的進一步縮短。

CDK4是細胞周期G1期的正調控因子，相關研究顯示其在多種癌癥組織中表達水平顯著高于正常組織，其異常表達可促進腫瘤的進展[13-14]。不同病理類型非小細胞肺癌組織CDK4表達陽性率無顯著差異(P>0.05)，而不同分化程度、TMN分期以及淋巴結轉移非小細胞肺癌患者癌組織CDK4表達陽性率均存在顯著差異(P<0.05)；與CDK4陽性非小細胞癌患者相比，陰性患者生存期顯著延長(P<0.05)；相關性分析結果顯示，CDK4與非小細胞肺癌患者生存期呈顯著正相關(γ>0，P<0.05)。表明CDK4的表達情況與非小細胞肺癌的發生和進展密切相關，其在患者癌組織中顯著上調，且隨著非小細胞癌進展，其表達進一步升高，預示的患者生存期的進一步縮短。

綜上所述，非小細胞肺癌組織中CDKI(P27keap1)和CDK4的表達與該腫瘤的的發生和進展密切相關，并進一步影響患者生存期。