LncRNA MIAT表達與ACS患者炎癥因子及血管內皮功能的相關性研究

高仁賢 柯樂斌 呂望 姜盈盈 林建鋒*

急性冠脈綜合征（Acute Coronary Syndrome，ACS）［1］是指一系列臨床嚴重的急性心肌缺血性疾病，主要包括不穩定型心絞痛以及急性ST 段抬高或非ST 段抬高型心肌梗死。大量研究顯示，血管內皮損傷引起的內皮功能障礙和被激活的炎癥反應［2］在ACS 發生發展各個環節均發揮著重要作用，也是造成動脈粥樣硬化斑塊（atherosclerotic plaque，AP）不穩定的主要因素。長鏈非編碼RNA（LncRNA）是一類轉錄長度＞200nt、不編碼蛋白的RNA，從表觀遺傳、轉錄及轉錄后翻譯等多個層面參與基因表達調控。研究發現其與多種疾病如冠心病（coronary heart disease，CHD）、糖尿病（diabetes mellitus，DM）、神經系統疾病等有關，因而在疾病診斷和靶點治療領域成為熱點［3］。LncRNA MIAT 作為一種重要的心臟相關LncRNA，盡管MIAT 特異性表達于神經系統，但在心臟相關基因的轉錄、翻譯、翻譯后調控起著重要的作用，已有研究表明其在心肌梗死、動脈粥樣硬化進程中起調控作用［4］。本研究旨在發現LncRNA MIAT 表達水平與血管內皮損傷和多種炎癥因子分泌的相關性，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年9 月至2019 年9 月在本院心內科住院的ACS 患者及健康對照組各100 例，所有患者均簽署知情同意書，本研究方案獲得醫院倫理委員會的批準。ACS 患者納入標準：符合內科學教材（第八版）和中華醫學會心血管病學分會發表的ACS 診斷與治療指南中關于ACS 診斷標準［5］冠脈病變，均由本院或外院冠狀動脈造影結果確診患者知情同意參與本試驗。排除標準：（1）未控制的原發性高血壓者；（2）外周血管疾病者；（3）慢性心力衰竭者；（4）甲狀腺疾病者；（5）肝、腎功能不全者；（6）并發炎癥者；（7）腫瘤患者；（8）嚴重的其他系統疾病者。入組對象均檢測心肌酶譜、肌鈣蛋白I、血脂、血糖、腎功能等生化指標；進行心電圖、心臟彩超、冠脈造影等輔助檢查。

1.2 ELISA 檢測外周血清炎癥因子 在研究對象治療前抽取外周靜脈血，室溫靜置3 h 后放入4℃預冷的離心機中離心3000 r/min，30 min，調整為soft 模式，收集上清液為血清。按照ELISA 檢測試劑盒說明書檢測TNF-α（abcam，ab181421）、IL-1（Thermo Fisher Scientific，KHC0011）、IL-6（abcam，ab178013）、M-CSF（abcam，ab245714）等炎癥因子及NO（abcam，ab233628）及ET-1（Thermo Fisher Scientific，EIAET1）內皮功能相關因子。

1.3 血管內皮功能測定 應用血管內皮功能測定儀（德國拜耳公司生產的HP700 血管內皮功能檢測儀）通過上臂肱動脈間接測定患者血管內皮功能，血管內皮功能測定值正常范圍0.9～1.3，＜0.9 被認定為血管內皮功能損傷。

1.4 循環lncRNA MIAT 測定 分離、純化外周血清，提取RNA，Realtime-PCR 檢測LncRNA MIAT。

1.5 統計學方法 采用SPSS 22.0 統計軟件包。計量資料以（±s）表示，組間及組內均數比較采用t檢驗，采用Logistic 回歸分析急性冠脈綜合征與循環LncRNA MIAT 表達水平的關系。采用Pearson 相關系數分析ACS 患者炎癥因子和內皮功能損傷與循環LncRNA MIAT 水平相關性。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 健康對照組與ACS 組生化指標比較 見表1。

表1 健康對照組與ACS組生化指標比較（±s）

表1 健康對照組與ACS組生化指標比較（±s）

指標 健康對照組（n=100） ACS 組（n=100） t 值 P 值AST（U/L） 20.12±10.34 58.74±25.10 25.610 ＜0.05 CK（U/L） 55.74±12.78 171.34±43.65 41.980 ＜0.05 CK-MB（U/L） 9.74±5.69 18.94±7.29 4.774 ＜0.05 LDH（U/L） 380.50±123.46 677.50±193.40 23.920 ＜0.05 cTNI（Ug/L） 0.08±0.02 0.61±0.13 67.400 ＜0.05 LDL-C（mmol/L） 2.14±0.69 4.23±0.53 39.940 ＜0.05血糖（mmol/L） 4.92±0.94 4.76±0.89 1.156 ＞0.05肌酐（CRE）（μmol/L） 89.12±15.64 90.12±13.64 6.041 ＞0.05尿素氮（BUN）（mmol/L） 5.32±1.64 4.89±1.87 0.342 ＞0.05

2.2 健康組和ACS 組炎癥因子分泌水平檢測 見表2。

表2 健康組和ACS組炎癥因子分泌水平檢測［pg/ml，（±s）］

表2 健康組和ACS組炎癥因子分泌水平檢測［pg/ml，（±s）］

組別 n IL-6 TNF-α IL-1 M-CSF健康對照組 100 19.12±3.34 13.89±2.12 20.26±4.22 7.63±2.76 ACS 組 100 37.42±5.12 24.51±2.29 33.91±5.81 18.71±1.49 t 值 19.00 9.961 33.77 58.43 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 健康組和ACS 組血管功能及內皮功能因子檢測結果 見表3。

表3 健康組和ACS組血管功能及內皮功能因子檢測結果（±s）

表3 健康組和ACS組血管功能及內皮功能因子檢測結果（±s）

組別 n 血管內皮功能數值 NO（pg/ml） ET-1（pg/ml）健康對照組 100 1.06±0.14 80.89±16.12 50.26±5.22 ACS 組 100 0.52±0.22 51.51±20.29 73.91±5.81 t 值 35.74 19.33 51.80 P 值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 健康對照組和ACS 組外周血清lncRNA MIAT相對表達水平比較 ACS 患者組外周血清LncRNA MIAT mRNA 表達水平為（2.49±0.25），健康對照組為（1.01±0.11），差異具有統計學意義（P＜0.05）。提示LncRNA MIAT 可能參與ACS 疾病進程。

2.5 lncRNA MIAT 表達水平與急性冠脈綜合征Logistic回歸分析 利用Logistic 回歸分析外周血清內LncRNA MIAT 表達水平與ACS 之間的關系，分析結果證明LncRNA MIAT 是ACS 的一個危險因素，OR=1.114，95%CI=1.012～1.236，P＜0.01。

2.6 LncRNA MIAT 表達水平與急性冠脈綜合征炎癥因子及內皮功能損傷相關性分析 Pearson 相關系數分析結果表明在ACS 患者中，炎癥因子IL-6、TNF-α、血管內皮ET-1 濃度與LncRNA MIAT 表達水平呈正相關，而血管內皮功能數值和NO 濃度與其呈負相關，差異具有統計學意義（P＜0.05）。提示在ACS 患者中，LncRNA MIAT 促進炎癥反應并加劇血管內皮功能損傷。

3 討論

ACS 是臨床常見的危急重癥及威脅人類健康和生命的主要死因。盡管隨著醫療科技發展，ACS 這一災難性疾病的預后有所改善，但ACS 患者的死亡發生率仍高達40%。目前認為動脈粥樣斑塊破裂或糜爛和繼發血栓形成［6］是ACS 的主要病理基礎及發病機制，但是為何不同的ACS 類型及病理類型不同，臨床表現差異大，ACS 的始動因素等均未明確。近年來，LncRNA 在心血管疾病中的作用逐漸成為關注的熱點［7］。LncRNA Bvht可以通過作為心血管調節基因網絡中的核心基因調節心血管病的進程［8］。LncRNA Fendrr 被證明可通過調節染色質修飾，從而影響心血管系統的發育［9］。此外一些LncRNA已被證明與血管緊張素II相關性疾病如冠脈粥樣硬化有相關性［10］。越來越多的研究表明，LncRNA 在心血管疾病的病理生理和發病機制中扮演著重要角色。

LncRNA MIAT 是2006 年Ishii 團隊在進行大規模病例對照研究中發現的染色體22q12.1 上與MI 存在密切關聯的基因［11］。研究表明氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）可誘導MIAT 的表達，在平滑肌細胞實驗中，利用不同濃度的ox-LDL 刺激細胞，MIAT 表達水平隨著ox-LDL 的增加而增加，結果提示LncRNA MIAT 可能參與動脈粥樣硬化病程［12］。本研究結果表明，LncRNA MIAT 表達水平是ACS 的獨立危險因素，此外在ACS 病程中，LncRNA MIAT 與IL-6、TNF-α 等炎癥因子顯著正相關，與血管內皮功能顯著負相關，提示LncRNA MIAT可能在ACS中具有促進炎癥反應和加劇內皮功能損傷的作用。

本研究結果提示LncRNA MIAT 可能是ACS 治療的潛在靶點，但LncRNA MIAT 在ACS 中參與炎癥反應和內皮損傷的具體機制尚未闡明，需進一步研究。相信隨著LncRNA MIAT 在心血管疾病分子生物學機制研究的深入，對于ACS 的發病機制和診治策略將可能提供新的認識。