載脂蛋白E基因多態性、血漿同型半胱氨酸水平與阿爾茨海默病患者睡眠障礙相關性分析

馬珊珊， 邢艷暉， 王瑞萍， 王秀芳， 彭 菲， 李 哲

遼寧省金秋醫院 1.神經內科；2.耳鼻喉科，遼寧 沈陽 110016；3.廊坊師范學院教育學院，河北 廊坊 065000

阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)是發生于老年和老年前期，以進行性認知功能障礙和行為損害為特征的中樞神經系統退行性疾病[1-5]。同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一種含硫氨基酸[6]，體內Hcy異常增高可損傷血管內皮細胞，促進血管平滑肌細胞增殖，破壞凝血和纖溶平衡，導致脂代謝紊亂、動脈粥樣硬化等，影響機體微循環，最終造成認知與神經功能障礙[7-8]。本研究旨在探討載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因多態性及Hcy水平與AD患者睡眠障礙的相關性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2016年12月至2019年12月于遼寧省金秋醫院神經內科就診的65例AD患者納入AD組。納入標準：年齡60～90歲；均符合美國國立神經疾病語言障礙卒中研究所和AD及相關疾病協會制定“可能的AD”診斷標準及排除標準(2010版)。另選取38例健康體檢者納入健康組。本研究經醫院倫理委員會批準。所有研究對象及家屬均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床資料采集 所有研究對象均完成頭顱CT或頭顱海馬檢查、簡易精神狀態檢查量表(mini-mental state examination，MMSE)評分。匹茲堡睡眠質量指數量表評分≥7分，且多導睡眠監測結果提示有睡眠紊亂，則診斷為睡眠障礙，不符合上述條件的為無睡眠障礙。

1.2.2 ApoE基因型的鑒定 取清晨空腹EDTA抗凝全血2 ml，應用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA。采用Primer Premier 5軟件設計引物(北京華大基因科技有限公司合成)。對ApoE基因進行目的片段擴增。聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)體系：1 μl的DNA模板、PCR Super Mix、引物F(10p)、引物R(10p)，12 μl的蒸餾水，共30 μl。反應條件：96℃預變性5 min，10個循環程序(96℃變性20 s，62℃～52℃退火20 s，72℃延伸30 s；每個循環下降1℃)；再進行35個循環(96℃變性20 s，52℃退火30 s，72℃延伸30 s)；完成后，72℃ 10 min，16℃ forever。對PCR產物進行電泳、純化，利用DNA測序儀(3730XL型，美國ABI公司)進行基因型鑒定。

2 結果

2.1 兩組研究對象一般資料比較 AD組低密度脂蛋白膽固醇、Hcy水平及合并睡眠障礙比例高于健康組，兩組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組研究對象一般資料比較

2.2 ApoE基因型分布及比較 ApoE基因型在AD組和健康組的分布均符合H-W平衡(χ2=3.000、0.686；P>0.05)。AD組攜帶ε4等位基因比例為30.8%(20/65)，明顯高于健康組的13.2%(5/38)，兩組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3 AD合并睡眠障礙患者與未合并睡眠障礙患者各臨床指標比較 AD合并睡眠障礙組患者的低密度脂蛋白膽固醇、高同型半胱氨酸血癥比例明顯高于AD無睡眠障礙組，MMSE評分明顯低于AD無睡眠障礙組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 AD合并睡眠障礙與未合并睡眠障礙患者各臨床指標比較

2.4 AD合并睡眠障礙患者危險因素分析 校正后Logistic回歸分析結果顯示，ε4等位基因、高同型半胱氨酸血癥是AD合并睡眠障礙的獨立危險因素。見表3。

表3 AD合并睡眠障礙患者危險因素分析

3 討論

ApoE基因有ε2、ε3、ε4共3種等位基因、6種基因型[9-11]。其中，ε2具有神經保護作用，而攜帶ε4的人群患AD的風險顯著增加[12-13]。ApoE4基因參與調解腦中Aβ聚集和清除，影響腦中脂質轉運、葡萄糖代謝、神經元信號傳導、神經炎癥的發生、線粒體功能[14-15]，但其機制尚未完全清楚。有研究報道，ε4在AD患者中的分布頻率為15%～30%[16-17]。本研究結果顯示，ε4在AD患者中的分布頻率為15.4%，顯著高于健康組，提示攜帶ε4等位基因可能為AD的危險因素。

本研究中，AD組的Hcy水平明顯高于健康組。有研究發現，Hcy可預測輕度認知功能障礙向AD轉化及認知功能的進行性衰退[18]。當患者發生高同型半胱氨酸血癥時，體內產生超氧化物，不僅損傷血管內皮細胞，增加血栓形成，干擾細胞的發育、分化，而且還增加Aβ的神經毒性，誘導Tau蛋白磷酸化，損害神經元功能和突觸傳遞，最終導致認知功能障礙[19]。有研究報道，睡眠時間的縮短、睡眠質量下降均與老年人體內Aβ的增加相關[20-21]。本研究將AD合并睡眠障礙和無睡眠障礙的患者進行比較發現，AD合并睡眠障礙患者的低密度脂蛋白膽固醇水平、高同型半胱氨酸血癥的比例明顯高于無睡眠障礙的AD患者，且MMSE評分也明顯低于無睡眠障礙的AD患者；Logistic回歸分析結果顯示，ε4等位基因、高同型半胱氨酸血癥是AD合并睡眠障礙患者發病的獨立危險因素。這提示，ε4、高同型半胱氨酸血癥與AD合并睡眠障礙的發病和疾病進展密切相關，可以作為臨床監測指標。

綜上所述，攜帶ε4等位基因可增加AD發生睡眠障礙概率，且高同型半胱氨酸血癥也是AD合并睡眠障礙的獨立危險因素。本研究的不足：納入患者數量有限，沒有納入癡呆前期患者進行分層研究，沒有進行隨訪數據的采集分析，針對患者睡眠障礙的數據沒有進行足夠的挖掘分析。因此，仍需繼續擴大樣本量進行更深入的研究。