雙特異性酪氨酸磷酸化調節激酶2在胃癌組織中表達及臨床意義

侯鐵偉， 張 成， 單永琪

北部戰區總醫院 普外科，遼寧 沈陽 110016

胃癌是我國發病率、病死率均較高的惡性腫瘤[1-2]。胃癌術后腫瘤復發和進展是患者的重要臨床終點[3-5]。目前，腫瘤術后病理分期等相關參數可以預測胃癌患者的生存預后情況，但復發和進展患者仍較多。因此，尋找新的預后評估指標和治療靶點尤為重要。雙特異性酪氨酸磷酸化調節激酶2[dual-specificity tyrosine(Y)-phosphorylation regulated kinase 2，DYRK2]是DYRK家族成員之一[6]。近年來，多項研究表明，DYRK2在多種腫瘤中表達明顯降低，導致腫瘤的發生發展[7-13]。但是目前，少見DYRK2在胃癌預后中的作用相關研究報道。本研究旨在探討DYRK2在胃癌組織中的表達及臨床意義。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 回顧性分析北部戰區總醫院普外科自2015年1月至2017年9月收治的100例胃癌手術患者的臨床資料。獲取患者的胃癌組織樣本(n=100)及癌旁組織樣本(n=30)。納入標準：(1)首次確診并行手術者；(2)術后病理證實為胃癌者；(3)具有完整的相關臨床資料者；(4)僅診斷為胃癌者；(5)卡氏評分≥70分者。排除標準：(1)術后病理切緣陽性者；(2)具有自身免疫性疾病及其他惡性腫瘤病史者；(3)術前已經進行過放化療等腫瘤治療措施者；(4)姑息性手術者。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與儀器 試劑：PBS緩沖液、0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液、0.5 mol/L EDTA緩沖液、1 mol/L TBS緩沖液、酶消化液、3%甲醇-過氧化氫溶液、封裱劑。儀器：18 cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫用微波爐；水浴鍋。

1.2.2 免疫組化 對胃癌組織及癌旁組織進行蘇木精-伊紅(HE)染色，在顯微鏡下選擇最典型的特征在固定點進行標記[14]。使用DYRK2兔多克隆抗體(1:200，美國Proteintech，美國)進行免疫組化。采用雙盲的方法，由兩名經驗豐富的病理科醫師對組織切片進行檢查。根據陽性染色細胞比例進行評分：0分，陰性；1分，陽性染色細胞比例≤25%；2分，陽性染色細胞比例25%～50%；3分，陽性染色細胞比例51%～75%；4分，陽性染色細胞比例>75%。染色強度評分：0分，陰性或無染色；1分，弱陽性；2分，中陽型；3分，強陽性。最后染色強度與陽性細胞百分比積分相乘，獲得每個標本對應的最終分數，計算均數，將最終得分<8分的標本定義為DYRK2低表達。

1.3 觀察指標 記錄患者的總生存期(overall survival，OS)和無進展生存期(progression free survival，PFS)。PFS定義為首次確診并手術至術后首次進展時間或患者死亡時間。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件對數據進行分析。計數資料以例(百分率)表示，組間比較采用χ2檢驗。Kaplan-Meier法分析患者OS和PFS。Cox回歸模型分析影響胃癌患者預后的影響因素。采用R 3.1.2軟件繪制列線圖，構建預測模型[15]。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 DYRK2在胃癌組織及癌旁組織中表達情況 DYRK2在胃癌組織中表達上調(圖1)。使用在線數據庫GEPIA驗證結果顯示，胃癌組織DYRK2的mRNA表達水平顯著高于正常組織，差異有統計學意義(P<0.05；圖2)。

圖1 DYRK2在胃癌組織及癌旁組織中表達(a.癌組織；b.癌旁組織；HE×400) 圖2 GEPIA驗證胃癌組織及正常組織DYRK2表達

2.2 DYRK2表達與臨床病理特征關系 DYRK2表達與腫瘤大小、腫瘤分化程度、臨床病理分期有相關性(P<0.05)，與性別、年齡、體質量減輕、癌胚抗原、血清白蛋白、腫瘤部位、浸潤深度、是否化療、遠處轉移、淋巴結轉移、神經侵犯無相關性(P>0.05)。見表1。

表1 DYRK2表達與臨床病理特征關系/例(百分率/%)

2.2 生存分析結果 Kaplan-Meier分析結果顯示，DYRK2低表達患者中位OS與中位PFS分別為30個月、21個月，均高于DYRK2高表達患者的23個月、20個月，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖3。

圖3 DYRK2低表達患者與DYRK2高表達患者OS、PFS比較

2.3 胃癌患者預后影響因素 DYRK2低表達、腫瘤分化、是否化療是影響胃癌患者預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌患者預后影響因素分析

2.4 列線圖構建 在Cox回歸分析的基礎上構建列線圖，進行內部驗證，同時構建預測模型，C-指數為0.886 8(95%可信區間0.838～0.936)。見圖4。

圖4 列線圖構建預測模型

3 討論

DYRK2是DYRK的家族成員之一，該家族中的部分成員已經被鑒定作為致癌基因參與腫瘤發生發展的多個過程，如DYRK1、DYRK1A、DYRK1B等[16-17]。但是，該家族也有部分成員的高表達與某些腫瘤的良好預后呈正相關，如DYRK2表達減少與肝癌的不良預后和奧沙利鉑耐藥有關[18]。Yamashita等[19]研究表明，DYRK2陽性表達組患者的5年無疾病存活率顯著高于DYRK2陰性組。

預測結果及發現導致不良結果的生物學機制是癌癥研究中的兩個重要部分[20]。DYRK2參與了多種腫瘤的發生發展，如肝癌、神經膠質瘤、大腸癌等。但是，關于DYRK2在胃癌預后中的作用少見報道。本研究結果顯示，DYRK2的mRNA表達在胃癌組織中上調；Cox多因素分析結果顯示，DYRK2低表達、腫瘤分化和是否化療均是影響胃癌的獨立預后因素；但是Kaplan-Meier生存分析結果發現，與DYRK2低表達的患者相比，DYRK2高表達者OS和PFS更低，與相關研究報道[21]結果不一致。而另有研究表明，DYRK2作為腫瘤抑制因子，通過降解Snail調節癌癥的侵襲和轉移[7]，敲除DYRK2可以促進上皮間質轉化和體內外癌癥侵襲[11]。本研究在COX回歸分析的基礎上，繪制了列線圖，進行了內部驗證，對胃癌患者的3年存活率進行預測，在內部驗證中，列線圖C-指數為0.886 8(95%可信區間0.838～0.936)，提示此預測模型具有較好的準確性。

綜上所述，DYRK2在胃癌組織中顯著上調，可作為胃癌患者預后的獨立預測因素，有必要進一步研究闡明其具體的分子機制。