免疫球蛋白A腎病臨床特征及外周血T細胞亞群、Th22變化研究

李 儀， 葉偉標， 冼麗英， 戴紹文， 莫玉前， 劉國輝

東莞市人民醫院 腎內科，廣東 東莞 523059

免疫球蛋白A(immunity globulin A，IgA)腎病是臨床上常見的免疫腎小球腎疾病，以腎小球系膜區IgA沉積為主要特征，臨床表現復雜，其發病機制目前尚未清楚。有研究認為，該病發病的主要原因是機體免疫清除功能受損、黏膜含量抗原清除存在缺陷，與細胞免疫緊密相關[1-4]。本研究旨在探討IgA腎病患者的臨床特征及外周血T細胞、Th22變化。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2015年2月至2017年2月東莞市人民醫院收治的87例IgA腎病患者納入B組。納入標準：符合《IgA腎病臨床診治指南》[5]中有關IgA腎病的診斷標準；臨床資料完整。排除標準：伴有過敏性紫癜、類風濕性關節炎等繼發性IgA腎病；伴有影響腎功能疾病，如高血壓、其他型腎炎等；有腎移植史；重要臟器疾病；研究前90 d內服用過激素或免疫抑制劑。選取同期60例健康者納入A組。本研究經醫院倫理委員會批準。所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 分離外周血單核細胞 采集所有受試者清晨空腹靜脈血4 ml，抗凝后，在試管中加入5 ml DMEM培養基均勻混合，以3 000 r/min離心30 min，得到外周血單核細胞，再加入10 ml DMEM培養基混勻，以2 000 r/min離心10 min。用含10%胎牛血清的DMEM培養基進行細胞重懸并計數，再將細胞濃度調整為1×106個/ml，分別裝入流式細胞管中(每管含1×106個細胞)備用。

1.2.2 外周血中T細胞檢測 分別取同型對照管、試驗管內400 μl抗凝后靜脈血，于常溫條件下加入10 μl Anti-CD4(PerCP)、10 μl Anti-CD25(APC)，避光30 min；于每個流式細胞管內加入3 ml溶血素，靜置20 min，加入1 ml磷酸緩沖液洗滌，離心10 min后除上清液，加入1 ml Fixation/Permeabilization Solution 固定、通透，靜置90 min，加入2 ml Permeabilization Buffer，離心除上清，滴入10 μl AntiFOXP3-PE，對照管內加入10μl AntilgC-PE，常溫30 min，固定后上流式細胞儀檢測。

1.2.3 檢測Th細胞亞群 取10 μl外周血單核細胞懸液，加入10 μl的0.2%臺盼藍，用顯微鏡觀察細胞狀態并計數。剩余外周血單核細胞懸液以2 000 r/min離心10 min，采集細胞，通過DMEM培養基重懸細胞，調整細胞濃度為1×106個/ml后，置入流式細胞管內。在常溫條件下，設對照管與試驗管，每管中加5 μl anti-CD4(FITC)后，避光靜置30 min，用磷酸緩沖液洗滌細胞后，2 000 r/min離心10 min，棄上清，滴入600 μl固定、透化溶液，避光30 min；加入5 ml配伍后的BDPerm/Wash洗滌，離心除上清液，于試驗管中滴入5 μl anti-IFN-y-FITC、ani-L-9-PE、anti-IL-4-APC，對照管內加入2 μl anti-IgG1-PE、2 μl anti-IgG1-APC，避光40 min，固定后上流式細胞儀檢測。

2 結果

2.1 兩組臨床特征比較 A組與B組男性比例、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。B組尿素氮>7 mmol/L、高血壓、腰痛比例高于A組，腎小球過濾率>60 ml/min比例低于A組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較/例(百分率/%)

2.2 兩組外周血T細胞、Th22細胞比較 B組CD3+、CD4+、CD8+、Th22高于A組，CD4+/CD8+低于A組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組外周血T細胞、Th22細胞比較

3 討論

IgA腎病屬于原發性腎小球疾病。IgA腎病臨床表現呈多樣性，包括蛋白尿、尿素氮>7 mmol/L、血尿等臨床特征[6]。本研究結果顯示，B組100.00%患者檢出血尿，其中發作性肉眼血尿占51.72%、持續性鏡下血尿占48.28%，82.76%患者檢出蛋白尿，19.54%患者血肌酐>132 μmol/L，37.93%患者有高血壓，36.78%患者有腰痛，6.90%患者有腹痛。有研究表明，鏡下血尿伴蛋白及蛋白尿為IgA腎病患者常見的臨床表現，若病情持續發展未得到有效控制，可發展為慢性腎衰竭，從而出現高血壓、腹痛等并發癥[7]。IgA腎病發病機制尚不明確，但已證實與人體免疫因素相關。有研究表明，淋巴細胞與腎疾病的發生及病情進展存在一定關系[8]。另有研究通過病理學證實，在腎中均有淋巴細胞，并浸潤于腎小球、腎間質[9]。T淋巴細胞亞群以CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表示，若上述免疫臨床指標出現異常，則提示T細胞亞群失去平衡，細胞因子發生異常，導致免疫功能失調。本研究結果顯示，B組CD3+、CD4+、CD8+、Th22均高于A組，CD4+/CD8+低于A組，提示IgA腎病患者發病可能與T淋巴細胞有關。另有研究根據IgA腎病患者臨床特征水平將患者分為中高危組與低危組，對其外周血Th細胞亞群水平進行探討，結果表明，患者外周血T細胞亞群CD4+細胞水平明顯升高，且CD4+/CD8+比值也增加[10]。

綜上所述，IgA腎病患者臨床特征可表現為血尿、蛋白尿、腎小球過濾率下降等，伴外周血CD3+、CD4+、CD8+、Th22升高，CD4+/CD8+降低。