川芎嗪對糖尿病患者體內(nèi)及體外單核細胞腫瘤壞死因子-α-誘導蛋白-8-2、腫瘤壞死因子-α、組織因子表達水平影響

張 莉， 孫 倩， 張 銘， 何志偉， 高國領(lǐng)， 姬婷婷

石家莊平安醫(yī)院(河北醫(yī)科大學附屬醫(yī)院)1.藥械科；2.心血管科，河北 石家莊 050000；3.河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院 藥械科，河北 石家莊 050000

近年來，2型糖尿病的發(fā)病率呈逐年增高趨勢。2型糖尿病以糖代謝紊亂為主要特征，隨著病情進展，可出現(xiàn)多個組織、器官損傷，進而合并多種并發(fā)癥，造成患者生活質(zhì)量降低，其發(fā)病與免疫、炎癥、高凝狀態(tài)等均有關(guān)[1-3]。目前，糖尿病以西藥治療為主，通過改善胰島素分泌功能和降低血糖代謝水平達到治療目的。隨著中醫(yī)的不斷發(fā)展，中醫(yī)辯證療法在糖尿病治療中的應用越來越廣泛。糖尿病屬于中醫(yī)消渴癥范疇，病因以陰虛燥熱為主。有研究指出，川芎嗪可顯著改善2型糖尿病患者的局部微循環(huán)能力，增強胰島素功能，提高免疫力[4]。腫瘤壞死因子-α-誘導蛋白-8-2(tumor necrosis factor-α-induced protein-8-like 2，TIPE2)是重要的免疫負性調(diào)節(jié)因子，對維持免疫穩(wěn)態(tài)具有重要意義[5]。腫瘤壞死因子-α(tumour necrosis factor-α，TNF-α)是一種炎癥和氧化應激反應指標。組織因子(tissue factor，TF)可在一定程度上反映患者的血管高凝狀態(tài)。本研究旨在探討川芎嗪對糖尿病患者體內(nèi)及體外單核細胞TPIE2、TNF-α、TF表達水平的影響。現(xiàn)報道如下。

1 對象、材料及方法

1.1 研究對象 將石家莊平安醫(yī)院自2017年1月至2019年12月收治的120例糖尿病患者納入研究，并將患者隨機分入A組和B組，每組各60例；另將同期60例健康體檢者納入健康組。排除標準：病情不穩(wěn)定，合并嚴重肝腎功能異?；蛐姆喂δ懿蝗撸?個月內(nèi)服用過激素類藥物或受體拮抗劑類可影響血糖代謝的藥物者；不配合檢查和治療、自行停止治療或轉(zhuǎn)院者；對本研究藥物過敏者。A組中，男性35例，女性25例，平均年齡(66.71±3.27)歲，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.20±2.21)kg/m2，平均病程(9.77±2.24)年；B組中，男性36例，女性24例，平均年齡(67.34±3.34)歲，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.30±2.33)kg/m2，平均病程(9.55±2.37)年；健康組中，男性30例，女性30例，平均年齡(67.03±3.20)歲，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.40±2.30)kg/m2。3組研究對象性別比例、年齡、體質(zhì)量指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。研究對象均簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 治療方法 A組患者采用胰島素治療：甘精胰島素(來得時，Aventis Pharma Deutschland GmbH，國藥準字J20140052)起始劑量0.1～0.2 U/kg，每日睡前或晨起固定時間皮下注射。B組患者在A組基礎(chǔ)上聯(lián)合川芎嗪治療：川芎嗪注射液(吉林四長制藥有限公司，國藥準字H22026448)10 ml+250 ml 5%葡萄糖溶液，靜脈滴注，每日1次。健康組不采取任何措施。A組和B組患者均治療4周。

1.3 細胞來源 THP-1單核細胞由中國科學院上海細胞生物學研究所提供。

1.4 實驗方法 10%小牛血清培養(yǎng)THP-1細胞，條件設定為37℃、5% CO2，孵育THP-1細胞48 h，促進其向巨噬細胞分化。細胞由懸浮狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橘N壁狀態(tài)后，將細胞分入A(細胞)組、B(細胞)組、C(細胞)組。A(細胞)組加入25 mmol/L葡萄糖溶液，B(細胞)組加入川芎嗪注射液，C(細胞)組加入25 mmol/L葡萄糖溶液+川芎嗪注射液，3組均孵育24 h。

1.5 觀察指標 比較A組和B組患者的治療有效率和血糖水平，3組研究對象體內(nèi)的TPIE2、TNF-α、TF水平，以及3組體外THP-1細胞的TPIE2、TNF-α、TF水平。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測TF，采用放射免疫法檢測TNF-α，采用Western免疫印跡法檢測TPIE2，檢測試劑均來自上海羅氏，流程嚴格參照說明書。治療效果評價標準[6]：臨床癥狀及體征消失，空腹血糖、餐后2 h血糖恢復至正常范圍為顯效；臨床癥狀及體征改善，空腹血糖、餐后2 h血糖下降>20%，但未恢復至正常范圍為有效；癥狀、體征、空腹血糖、餐后2 h血糖均無變化為無效。

有效率=(顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%

2 結(jié)果

2.1 A組和B組患者治療有效率比較 治療4周后，A組顯效25例，有效21例，無效14例，有效率為76.7%(46/60)，B組顯效36例，有效20例，無效4例，有效率為93.3%(56/60)。A組和B組患者治療有效率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 A組和B組患者血糖水平比較 治療前，A組和B組空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血紅蛋白比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后，A組和B組空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血紅蛋白均低于治療前，且B組低于A組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 A組和B組患者血糖水平比較

2.3 3組研究對象體內(nèi)TPIE2、TNF-α、TF水平比較 治療前，A組和B組研究對象體內(nèi)TPIE2、TNF-α、TF水平均高于健康組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；治療后，A組和B組研究對象體內(nèi)TPIE2、TNF-α、TF水平均高于健康組，且A組高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組研究對象體內(nèi)TPIE2、TNF-α、TF水平比較

2.4 3組體外THP-1細胞TPIE2、TNF-α、TF水平比較 體外THP-1細胞TPIE2、TNF-α、TF水平由高至低依次為A(細胞)組、C(細胞)組、B(細胞)組，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 3組體外THP-1細胞TPIE2、TNF-α、TF水平比較

3 討論

糖尿病屬消渴癥范疇，氣陰兩虛是發(fā)生病變的重要機制之一，患者在長期陰虛狀態(tài)下，內(nèi)熱顯著，由于氣虛證造成的血液運行不暢引起血脈不利，阻塞經(jīng)絡，誘發(fā)系列并發(fā)癥。糖尿病是代謝紊亂性疾病，隨著病情進展，患者血流動力學發(fā)生變化，造成微循環(huán)障礙，進一步導致血液高粘性和高凝狀態(tài)，引起周圍神經(jīng)性病變。古籍記載：川芎，血中氣藥也，肝苦急，以辛補之，故血虛者宜之，辛以散之，故氣郁者宜之[7]。川芎嗪從川芎根莖中提取，具有顯著的降血糖、抗氧化、抑制氧化應激反應、提高免疫力的作用[8]。

本研究結(jié)果中：治療4周后，A組有效率為76.7%(46/60)，B組為93.3%(56/60)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；治療后，A組和B組空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血紅蛋白均低于治療前，且B組低于A組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這提示，胰島素聯(lián)合川芎嗪控制血糖效果優(yōu)于單用胰島素。TPIE2參與炎癥反應及細胞死亡信號通路，對免疫具有顯著的負性調(diào)節(jié)作用；其表達水平還與血管硬化、腫瘤細胞浸潤相關(guān)[9]。糖尿病患者的血管內(nèi)皮細胞在高糖狀態(tài)下會出現(xiàn)損傷，TPIE2的負性免疫調(diào)節(jié)導致病情加重，形成惡性循環(huán)[10]。TNF-α表達增強提示局部炎癥反應和氧化應激反應加重；TF可反映患者的血管高凝狀態(tài)[11]。本研究結(jié)果顯示：(1)治療前，A組和B組研究對象體內(nèi)TPIE2、TNF-α、TF水平均高于健康組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；治療后，A組和B組研究對象體內(nèi)TPIE2、TNF-α、TF水平均高于健康組，且A組高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)體外THP-1細胞TPIE2、TNF-α、TF水平由高至低依次為A(細胞)組、C(細胞)組、B(細胞)組，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。上述結(jié)果均提示，川芎嗪可通過抗凝、抑制氧化應激反應、調(diào)節(jié)免疫等調(diào)節(jié)血糖。

綜上所述，川芎嗪具有抗凝、抑制氧化應激反應、調(diào)節(jié)免疫等作用，可輔助治療糖尿病。