VEGF 基因936C/T 多態性與急性心肌梗死發病的關系

韓晶晶，馬莉，王小文

蘭州市第一人民醫院，蘭州730050

急性心肌梗死（AMI）是冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂、血栓形成，引起冠脈血供驟降或中斷，導致的心肌缺血壞死，其發病急、致死致殘率高。隨著現代社會生活節奏的加快和飲食模式的轉變，AMI 患病率逐年上升，國內年AMI 死亡人數超過50 萬，其有效防控是現階段衛生部門的重中之重［1-2］。血管內皮生長因子（VEGF）是一種具有多種生物學功能的糖蛋白，其可促進細胞增殖、增加血管通透性，調節內皮細胞分化、促進血管再生?，F有研究已證實，其與惡性腫瘤、神經修復、眼內新生血管再生及缺血心肌修復等疾病密切相關［3］。人類VEGF 基因位于染色體6q21，其編碼基因較長，包含30 多個單核苷酸多態性位點，936C/T（rs3025039）是常見的基因多態性位點，其堿基胞嘧啶（C）向胸腺嘧啶（T）突變時，導致VEGF 表達異常，進而影響其生物學功能［4］。已有研究證實，VEGF 基因936C/T 位點突變與AMI 的發生有關［5］，但其與AMI 的具體關系尚未得知。因此，本研究探討VEGF 基因936C/T 多態性與AMI 發生的關系，旨在為AMI 的防治提供幫助。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018 年5 月—2020 年3 月于我院隨診的AMI 患者165 例作為研究對象（AMI 組）。納入標準：①首次確診且年齡不超過75 歲；②AMI 的診斷符合中華醫學會心血管病學分會制定的《急性ST 段抬高型心肌梗死診斷和治療指南》［6］；③發病時間不超過12 h；④血流動力學穩定。排除標準：①既往存在心腦血管疾病病史；②近2 個月內有活動性內臟出血；③惡性腫瘤；④嚴重的肝、腎、肺等重要器官功能障礙。男97 例，女68 例；年齡（60.33 ± 8.49）歲。體質量指數（BMI）為（22.03 ± 2.12）kg/m2，吸煙史74例，飲酒史69 例，高血壓105 例，糖尿病61 例。另選取同期門診體檢健康者105 例作為對照組（CON 組），男66 例，女39 例；年齡（55.29 ± 7.56）歲。BMI（21.79 ± 1.89）kg/m2，吸煙史53 例，飲酒史48 例，高血壓37 例，糖尿病33 例。兩組性別、BMI、吸煙史、飲酒史、糖尿病比例比較差異均無統計學意義（P均＞0.05），具有可比性。入組對象均簽署知情同意書，本研究獲醫院倫理委員會審批同意。

1.2 生化指標檢測 抽取病例組入院當天及CON組體檢日清晨靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min（離心半徑14 cm），分離血清，置于-20 ℃冷藏器中備用。使用BK-500分立式全自動化生化分析儀（山東博科生物產業有限公司）檢測入組對象生化指標：同型半胱氨酸（Hcy）、HDL、LDL、TC、TG、肌酸激酶同工酶（CK-MB）和肌鈣蛋白I（CTnI）。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定血清VEGF，檢測試劑盒購于Bio Mart公司（上海）。

1.3 VEGF基因936C/T多態性的檢測 于清晨抽取患者入院當天及CON組體檢日清晨空腹靜脈血2 mL，使用蛋白酶鹽析法提取細胞，使用全血基因組DNA提取試劑盒（Tuangen公司，USA）提取白細胞基因組DNA，使用PCR-RFLP法檢測VEGF基因936C/T多態性基因型分布，具體步驟：基因組DNA中加入PCR預混液、引物（正向引物：5′-CTGAAATGAAGGAAGAGGAGAC-3′、反向引物：5′-TCCCCTCCCAACTCAAGTCCAC-3′，上海生工生物工程股份有限公司）、去離子水，于PCR儀（艾本德公司，美國）中進行擴增得到PCR 產物（反應條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性10 s、60 ℃退火20 s、72 ℃延伸20 s 共循環45 次），再經限制性內切酶反應、瓊脂糖凝膠電泳，于凝膠成像儀（南京世研儀器設備有限公司，K8500）中顯影酶切產物，根據圖像對VEGF 基因936C/T 多態性位點進行判讀。

1.4 統計學方法 采用SPSS23.0 統計軟件。計量資料以±s表示，組間比較使用獨立樣本t檢驗，兩組以上比較采用單因素方差分析（組間比較使用LSD-t檢驗）；計數資料使用構成比表示，組間比較使用χ2檢驗。采用多因素Logistic 回歸分析AMI 的危險因素。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血生化指標比較 AMI 組血清VEGF、TC、LDL水平高于CON組（P均＜0.05），見表1。

表1 兩組血生化指標情況（ ± s）

表1 兩組血生化指標情況（ ± s）

2.2 兩組VEGF基因936C/T多態性分布和等位基因頻率比較 兩組VEGF基因936C/T多態性分布和等位基因頻率差異有統計學意義，AMI組CC基因型患者比例和C等位基因頻率低于CON組（P均＜0.05），見表2。

2.3 AMI組不同VEGF基因型患者VEGF和AMI標志物比較 與CT 和TT 基因型患者相比，CC 基因型患者血清VEGF 水平較高（P均＜0.05），CK-MB 和CTnI 水平較低（P均＜0.05）；CT 和TT 基因型患者血清VEGF、CK-MB、CtnI 水平比較差異均無統計學意義（P均＜0.05），見表3。

表2 兩組VEGF基因936C/T多態性分布和等位基因頻率情況

表3 AMI組不同VEGF基因型患者VEGF和AMI標志物比較（ ± s）

表3 AMI組不同VEGF基因型患者VEGF和AMI標志物比較（ ± s）

注：與CC基因型相比，*P＜0.05。

VEGF基因型CC CT TT CTnI（ng/mL）4.04±1.24 5.34±1.36*5.52±1.63*7.251＜0.001 n 56 61 48 F P--VEGF（ng/mL）124.79±17.35 93.78±16.83*91.67±15.25*17.236＜0.001 CK-MB（U/L）336.57±37.29 433.54±41.57*438.45±38.29*23.473＜0.001

2.4 AMI 的危險因素分析 Logistic 多因素回歸分析顯示，年齡（OR=1.881）、TC（OR=1.692）、高血壓（OR=3.527）、CT（OR=2.759）及TT（OR=3.875）基因型均是AMI 的獨立危險因素（P均＜0.05），見表4。變量賦值：因變量（AMI：是=1，否=0），自變量（高血壓：是=1，否=0 設為亞變量，VEGF 基因型：CC=0 設為亞變量，CT=1，TT=2）。

表4 AMI的危險因素分析

3 討論

AMI患者冠狀動脈持續狹窄、堵塞，導致局部心肌急性缺氧壞死，發病迅急、治療時間窗短。近年來AMI 診療技術的發展在一定程度上改善了患者預后，但此類患者受個體異質性、伴隨疾病及疾病意外因素的干擾，臨床控制率并不理想［7］?，F階段，AMI高?；颊叩暮Y選是研究熱點，高血壓、高血脂、糖尿病等傳統的危險因素已被證實，小分子層次的篩選逐漸進入研究視線［8］。VEGF是機體內皮細胞、平滑肌細胞及巨噬細胞等細胞分泌的糖蛋白，其可與內皮細胞特異性有絲分裂原結合，促進血管內皮細胞增殖分化，促進新生血管形成、增加血管通透性［9］。VEGF 在炎癥、缺氧等因素刺激下分泌明顯增多。臨床研究證實，心肌梗死、腦梗死患者血清中VEGF明顯升高［10-11］，其可能通過促進血管形成和增加血管通透性，增加缺血組織的側支循環和血液灌注，進而減輕組織的損傷。本研究觀察到AMI 患者血清VEGF 水平明顯增多，與既往研究相符，提示心肌缺氧壞死促進VEGF 表達，發揮自我保護代償機制，促進受損心肌新生血管的形成，減輕心肌損傷［12］。鑒于VEGF 對AMI 患者受損心肌的保護作用，其可能為AMI的超早期識別診斷提供幫助。

VEGF 表達調控機制較復雜，除了受缺血缺氧、炎癥及氧化應激影響外，還受VEGF 編碼基因的控制，VEGF 編碼區存在較多的單核苷酸多態性位點，包括936C/T、460C/T、1154/GA、634G/C、2578C/A 等，各位點多態性均會影響VEGF 表達，進而參與心血管、腫瘤、腦血管等疾病的發生發展［13］。VEGF 基因936C/T 多態性位點是目前研究較多的位點，其等位基因C、T 均會影響VEGF 分泌，與心血管疾病關系密切。常亞偉等［14］研究發現，AMI 患者VEGF 基因936C/T多態性位點CT+TT基因型比例和T等位基因頻率增多，且VEGF 基因CT+TT 基因型是AMI 的危險因素，提示VEGF 基因936C/T 多態性T 等位基因是AMI 的易感基因。馬麗霞等［15］研究證實，rs699947 位點中C 等位基因可促進冠心病患者側支循環的建立，說明C 等位基因可促進VEGF 的分泌以發揮促血管生成作用。HE等［16］發現，高血壓腦出血患者的VEGF 基因936C/T 位點T 等位基因高于健康人。應濤等［17］研究證實，動脈硬化腦梗死患者的936C/T 位點T 等位基因明顯增多，說明T 等位基因可能抑制VEGF 的血管保護作用。本研究表明AMI患者VEGF 基因936C/T 位點CC 基因型比例和C 等位基因頻率明顯降低，T等位基因頻率明顯增多，CT和TT 基因型AMI 患者血清VEGF 水平低于CC 基因型患者，而心肌損傷標志物高于CC 基因型患者；進一步分析發現，CT 和TT 基因型均是AMI 的危險因素，提示VEGF 基因936C/T 位點等位基因C 向等位基因T 的突變增加參與AMI 的發生，與既往研究結果類似。VEGF 基因936C/T 位點位于3′端非翻譯區，其中936C/T位點C向T突變后，導致缺氧誘導蛋白與VEGF mRNA 結合受阻，導致VEGF mRNA 半衰期縮短，引起VEGF 的表達下降［18］。此外，936C/T 位點C 向T 突變后可能導致VEGF 編碼區增強子結合蛋白位點丟失，導致核蛋白激活蛋白-4 與增強子結合減少，引起VEGF表達下降［19］。VEGF基因936C/T位點T 等位基因的增多引起VEGF 表達下降，機體自身代償性血管保護機制減弱，血管損傷及心肌損傷的保護作用降低［18-19］，AMI 的發病風險及病情嚴重程度越高，這也解釋了CT 和TT 基因型AMI 患者心肌損傷標志物明顯高于CC基因型患者的現象。

此外，本研究還發現AMI 患者的年齡、TC、LDL及高血壓比例明顯較高，且年齡和高血壓均是AMI的危險因素，提示高齡、患有高血壓人群應警惕AMI的發生。AMI 的發病與環境、飲食及遺傳等多方面因素有關，其中年齡、高血脂、高血壓均是被多項研究證實的AMI 發病危險因素，三者均會導致冠狀動脈粥樣硬化、斑塊形成的概率升高，進而增加AMI的發病風險［20-21］。

綜上所述，VEGF 基因936C/T 多態性位點CT 和TT 基因型均是AMI 的危險因素，其中T 等位基因是AMI 的易感等位基因，可據此早期篩查高危AMI 人群并有效干預，以降低AMI的發病率。