車前草水煎劑對SD大鼠腎損傷保護作用的實驗研究*

慕瑩瑩 鄔朋格 董琳曼 王家欣 侯夢婷 謝 杰 劉 森 牛美蘭

黃河科技學院，河南省鄭州市 450000

慢性腎損傷是多種原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟病變持續(xù)進展的共同結果，常常累及多個系統(tǒng),是臨床上常見的疾病,嚴重危害人類的健康和生命[1]。目前,西醫(yī)治療以抗菌、利尿、保護腎功能為主，盡管西醫(yī)治療有一定療效，但副作用不被人接受，車前草是一種常見的中草藥,性寒、味甘，歸肝、腎經(jīng),具有清熱、利尿通淋、涼血解毒、祛痰的功效，可用于治療水腫尿少、癰腫瘡毒等疾病。課題組成員在查閱中醫(yī)文獻的基礎上，應用車前草對慢性腎損傷大鼠模型實施實驗研究,以探討車前草水煎劑對慶大霉素+頭孢拉定引起雄性SD大鼠慢性腎損傷(Chronic kidney injury,CKI)的作用，同時也為臨床預防CKI提供理論實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 實驗動物 SP級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠62只，體重180～220g，購自河南省實驗動物中心，許可證編號(SCXK豫2017-0001)，存放于黃河科技學院動物房，光照10～12h/d，溫度10～18℃，相對濕度40%～60%，自由飲水及攝食。

1.2 實驗試劑及藥品 慶大霉素注射液(鼎復康藥業(yè)股份有限公司,規(guī)格:2ml:80mg，8萬單位)，頭孢拉定膠囊(江蘇漣水制藥有限公司，規(guī)格：0.25g)，鹽酸多巴胺注射液(遠大醫(yī)藥有限公司，規(guī)格：2ml：20mg×10支)，車前草購自河南省醫(yī)藥超市有限公司。

1.3 實驗儀器及設備 電子天平(PTY-C5200,杭州朗固金屬制品有限公司)。

2 方法

2.1 實驗大鼠建模及分組方法 普通飼料喂養(yǎng)實驗大鼠1周，適應環(huán)境后，將62只大鼠隨機分為6組：空白組，模型組，車前草水煎劑(Plantago depressa willd decoction,PDWD)低、中、高濃度組和西藥(小劑量多巴胺)組，空白組12只，其余組各10只，繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，除空白組大鼠外，其余大鼠均給予慶大霉素+頭孢拉定灌胃，連續(xù)8周，自由飲用生理鹽水。按照大鼠與人等效劑量換算表[2]計算各藥劑量：慶大霉素[6.25mg/(kg·d)]、頭孢拉定[1.55g/(kg·d)]給予灌胃。實驗第8周末，從空白組和模型組各隨機抽出2只，腹腔靜脈采血，測血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)變化情況，免疫組化法觀察模型組大鼠腎組織變化。腎小球明顯腫脹，毛細血管叢內(nèi)細胞數(shù)明顯增多，毛細血管壁明顯增厚，腎小球固縮、閉塞，腎小管出現(xiàn)廣泛性損傷，水腫、擴張或萎縮，證實慢性腎損傷建模成功，處死大鼠。

2.2 給藥方法 空白組大鼠普通飼料喂養(yǎng)，自由飲生理鹽水，其余組大鼠在建立CKI模型8周后，按照大鼠與人等效劑量換算表[2]分別給予PDWD低、中、高濃度[1.5g/(kg·d)、3g/(kg·d)、6g/(kg·d)]灌胃,連續(xù)4周；小劑量多巴胺組給予多巴胺0.04μg/(kg·d)腹腔注射，連續(xù)4周，自由飲生理鹽水。

2.3 樣品采集與指標測定 在上述條件下將各組實驗大鼠飼養(yǎng)至第12周末，測量體質(zhì)量，10%水合氯醛(2～3ml/100g)麻醉,腹腔靜脈采血，檢測血清BUN、SCr、UA變化。

2.4 免疫組化觀察大鼠腎組織變化 腎組織病理學觀察取10%多聚甲醛固定腎組織，石蠟包埋，蘇木素—伊紅染色(HE染色)，光鏡下觀察。

3 結果

3.1 實驗大鼠一般情況的觀察 車前草水煎劑對腎損傷模型大鼠一般生存狀態(tài)的影響：空白組大鼠毛色光澤順滑，體重持續(xù)增長，對外界刺激反應敏感、大小便正常，余10只全部存活(除造模檢驗2只)；模型組大鼠精神萎靡、反應遲鈍，少食，毛色發(fā)黃無光澤，死亡2只(檢測造模死亡1只，造模過程死亡1只)；小劑量多巴胺組一般生存狀態(tài)明顯改善，車前草水煎劑低、中、高濃度組精神狀態(tài)、飲食狀況、毛色外觀等一般生存狀態(tài)較模型組呈不同程度改善，以車前草水煎劑高濃度組最為顯著。治療大鼠死亡狀況：車前草水煎劑低濃度組死亡 3 只(造模過程死亡 1 只、治療過程死亡 2 只)，車前草水煎劑中濃度組死亡2只(造模過程死亡 1 只、檢測造模死亡1只)， 車前草水煎劑高濃度組造模過程死亡 1 只，小劑量多巴胺組治療過程死亡1只。

3.2 大鼠體質(zhì)量的變化 造模前后空白組大鼠體質(zhì)量無明顯差異(P>0.05)；造模后大鼠體質(zhì)量與空白組比較：模型組與車前草低、中、高濃度組體質(zhì)量顯著下降(P<0.01)，小劑量多巴胺組大鼠體質(zhì)量顯著下降(P<0.05)；藥物干預后與模型組大鼠體質(zhì)量比較：多巴胺組與車前草水煎劑中、高濃度組明顯增長(P<0.01)，車前草水煎劑低濃度組增長有顯著差異(P<0.05)，見圖1。

圖1 各組大鼠體質(zhì)量變化

3.3 大鼠進食量的變化 造模前各組大鼠進食量無明顯差異(P>0.05)；造模第6周、造模成功后與空白組比較，模型組、車前草低、中濃度組大鼠進食量顯著減少(P<0.01)，小劑量多巴胺組、車前草高濃度組大鼠進食顯著減少(P<0.05)；給藥后與空白組比較車前草高濃度組大鼠進食量明顯增加(P<0.05)，見圖2。

圖2 大鼠進食量的變化

3.4 大鼠血清腎功能監(jiān)測指標 藥物干預4周后與空白組比較：模型組、車前草低濃度組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著升高(P<0.01)，車前草中濃度組大鼠BUN、Scr、UA顯著升高(P<0.05)，車前草高濃度組大鼠、小劑量多巴胺組大鼠BUN、Scr、UA無顯著差異(P>0.05)；與模型組比較，小劑量多巴胺組、車前草高濃度組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 車前草水煎劑對大鼠腎功能的影響

3.5 各組大鼠腎臟組織變化 空白組腎臟組織結構清晰可見，腎小球、腎小管形態(tài)正常；與空白組比較，模型組大鼠腎臟組織局部明顯出現(xiàn)腎小球擴張、毛細血管擴張及系膜基質(zhì)增生，并伴有不同程度的腎小管擴張、腎小管上皮細胞出現(xiàn)空泡、顆粒樣變性等病理改變；小劑量多巴胺組及車前草各組上述病理變化均有改善，且高濃度組、小劑量多巴胺組改善較為明顯。見圖3。

圖3 各組大鼠腎臟組織病理學變化

4 討論

慶大霉素是一種療效確切的氨基糖苷類抗生素，主要用于治療革蘭陰性菌引起的感染，其腎毒性一直受到關注。慶大霉素進入體內(nèi)經(jīng)腎排泄后被腎小管重吸收,造成腎小管上皮細胞的膜脂質(zhì)代謝功能障礙，使腎小管受損，發(fā)生急性腎衰竭，由其造成的腎衰竭是當今公認的腎毒性急性腎衰竭實驗模型[3]。而頭孢拉定是一種強效的抗菌藥物，屬于第一代頭孢類抗生素，腎毒性較大[4]，可引起急性腎小管壞死。故采用慶大霉素+一代頭孢聯(lián)合灌胃法，利用其腎毒性的協(xié)同作用來建立慢性腎損傷模型，成為本實驗最大的創(chuàng)新之處。車前草具有利尿通淋、涼血清熱的功效，常用于治療水腫尿少、癰腫瘡毒等疾病[5]。呂昂等通過建立雄性大鼠腎草酸鈣結石模型,觀察到模型組雄性大鼠尿量明顯增加,尿液中Ox、Mg2+、Ca2+排泄量提高,血清和腎組織中 Ca2+、Mg2+、BUN和Cr含量降低,腎組織NOX4蛋白的表達減少,車前草醇提物可通過促進尿液排泄[6]。此外彭璇等通過建立雄性大鼠模型進行對照實驗,也發(fā)現(xiàn)不同劑量的車前草提取物黃酮可使雄性大鼠尿量及尿液Na+、Cl-的含量發(fā)生變化，還可通過收縮膀胱平滑肌、舒張離體尿道平滑肌的作用來增強生理情況下膀胱排尿[7]。由此可見，上述實驗為本實驗研究車前草對腎臟的保護作用提供了一定的實驗研究基礎。

實驗結果表明：與空白組比較，模型組體質(zhì)量顯著下降(P<0.01)；與模型組比較，車前草水煎劑高濃度組大鼠體質(zhì)量明顯增長(P<0.01)；與空白組比較，模型組大鼠進食量顯著減少(P<0.01)；與空白組比較,車前草高濃度組大鼠進食量明顯增加(P<0.05)；與空白組比較，模型組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，車前草高濃度組大鼠血清BUN、Scr、UA顯著下降(P<0.05)；與空白組比較，模型組大鼠腎臟組織局部明顯出現(xiàn)不同程度的病理改變；小劑量多巴胺組及車前草各組上述病理變化均有改善，且高濃度組、小劑量多巴胺組改善較為明顯。由此可見，車前草水煎劑可在一定程度上改善大鼠的體質(zhì)量和進食量，且在一定范圍內(nèi)降低了大鼠的血清BUN、Scr、UA。所以，車前草水煎劑在一定程度上對大鼠腎臟起保護作用。

綜上所述，車前草水煎劑對慶大霉素+頭孢拉定引起的雄性SD大鼠腎損傷有一定的保護作用；車前草水煎劑可改善慶大霉素+頭孢拉定引起的雄性SD大鼠腎損傷的體質(zhì)量、進食量。