有毒蜜源植物博落回花粉顆粒電鏡掃描觀察

姚丹 張錦華 袁揚 趙恬 張定紅 徐祖蔭 王胤晨

（1 貴州省現代農業發展研究所；2 貴州省農科院畜牧獸醫研究所；3 貴州省養蜂學會，貴陽 550006）

1 引言

博落回（學名：Macleaya cordata(Willd.)R.Br.）是罌粟科，博落回屬，別名號筒桿、喇叭筒、空洞草等。莖光滑呈綠色，多白粉；葉片寬卵形或近圓形；裂片半圓形、方形，邊緣波狀[1]；大型圓錐花序多花，頂生和腋生，花淺黃色，雄蕊花絲絲狀，花藥條形[2]；每年6～11月開花結果。喜生長于溫暖濕潤的山林邊緣，路邊、二荒地中。主要分布于我國長江以南，南嶺以北，海拔150～1000 m 的地區，分布不均，如貴州東部地區較為常見，而西部地區較少[3]。

博落回全草有大毒[4,5]，不可內服。植株及花蜜、花粉皆有毒，含血根堿、白屈菜紅堿、博落回堿等[6-8]。20世紀80年代，貴州省梵凈山區曾發生過三家夏季食蜜中毒死亡的事件，這三家蜂蜜中，昆明山海棠（有毒蜜源）成分檢出均呈陽性，其中一家蜂蜜中還檢出有博落回花粉，占比為40%～80%[9]。人中毒后主要為輕者出現口渴、頭暈、惡心、嘔吐、胃燒灼感及四肢麻木、乏力，重者出現煩躁、嗜睡、昏迷、心律失常甚至死亡[5]。

博落回花粉量大，每年開花時間正值外界缺粉季節，蜜蜂大多會采集其花粉。本次研究將夏季收集到的博落回花粉，通過掃描電鏡觀察花粉形狀，豐富有毒蜜源植物的鑒定標記，同時為養蜂實踐生產提供理論基礎。

2 材料和方法

2.1 實驗材料

博落回花粉由貴州省畜牧獸醫研究所提供。實驗時間：2020年6～10月。

2.2 實驗方法

將采集到的新鮮花粉投入電鏡固定液（廠家：Servicebio，貨號：G1102）固定，并用真空泵抽氣直至沉底，室溫放置2 小時，0.1M 磷酸緩沖液PB（pH7.4）漂洗3 次，每次15 分鐘；隨后用1%的鋨酸·0.1M 磷酸緩沖液PBS（pH7.4）室溫（20℃）固定5 小時。0.1M磷酸緩沖液PB（pH7.4）漂洗3 次，每次15 分鐘。組織依次入30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%酒精上行脫水，每次1 小時。丙酮（廠家：國藥集團化學試劑有限公司）：812 包埋劑（廠家：SPI，貨號：90529-77-4）=3∶1 滲透4 小時，將樣品插入包埋板后37℃烤箱過夜；60℃烤箱聚合48 小時；超薄切片機切片60～80 nm 超薄切片（廠家：Leica，型號：Leica UC7）；鈾鉛雙染色（2%醋酸鈾飽和酒精溶液，枸櫞酸鉛，各染色15 分鐘），切片（廠家：Daitome，型號：Ultra 45°）室溫干燥過夜；透射電子顯微鏡（廠家：hitachi，型號：HT7700）下觀察，采集圖像分析。

3 結果與分析

電鏡在放大1000x 時的掃描結果，博落回花粉顆粒有的呈圓球形、長球形等，呈圓球形的大都呈串珠狀相連，呈長球形的大都呈簇狀，花粉表面有突起，形似羊肚菌（圖1-1）；當電鏡放大4000x 時，掃描結果為博落回花粉顆粒呈圓球形，表面布滿蜂窩狀的小孔（圖1-2）；對花粉顆進行粒表面切片后，在掃描電鏡下放大20000x 時，其花粉表面紋飾呈結繩狀或姜塊狀，或核桃表面的突起（圖1-3），期間有許多小孔。

圖1 博落回花粉顆粒掃描電鏡結果

4 討論

蜜蜂能夠采集，但其花粉或花蜜對蜜蜂或人有毒的蜜粉源植物統稱為有毒蜜源植物[11]。判斷一種植物是否是有毒蜜源植物的標準，就是其花蜜、花粉是否對人或蜜蜂有毒。誤食有毒蜂蜜致人中毒死亡事件，已見報道的有云南（1977、1983、2005～2013）、廣西（1972、2014）、貴州（1988）、廣東（1992）、重慶（2011、2015）、湖北（2015）等省市[12]，因此，對特定地區（有毒蜜源分布區）、特定時間（夏季）采收到的蜂蜜，應當進行鑒定。

蜜蜂在采集某種植物的花蜜時，一定會混入少量該種植物的花粉，所以花粉鑒定也是一個重要方法。王憲曾[13]曾對雷公藤、鉤吻的花粉通過掃描電鏡的觀察，進行過報道描述。這次對我省發生過蜂蜜中毒的博落回花粉開展了電鏡觀察進一步豐富了花粉鑒別有毒蜂蜜的鑒定標記，同時，對蜂蜜安全檢測具有重要的指導意義。