miRNA-126、miRNA-26a在食管癌中的表達及與患者臨床特征的關系分析

賀紅柳，崔美英，王豐

鄭州大學第一附屬醫院病理科，鄭州 450052

食管癌是全球惡性程度最高的六大腫瘤之一，幾十年來，食管癌的發病率在全球范圍內不斷上升，病死率居第六位。同時中國是全球食管癌發病率和病死率最高的國家，據統計，中國每年大約有221萬人死于該病，流行病學顯示中國農村地區食管癌的發病率是城鎮地區的2～10倍，城鄉分布不均勻，且具有明顯的家族聚集現象，一般表現為家族多個成員患有食管癌。目前，食管癌的發病原因并未完全明確，可能與肥胖、吸煙、飲酒、飲食習慣等危險因素有關。手術切除術、內鏡切除術和放化療均為主要治療手段，但療效均不盡人意，患者5年生存率較低，僅為15%左右。由于食管癌早期癥狀表現不明顯，早期篩查手段效果有限，大多數患者發現時已為疾病中晚期，喪失了最佳治療時機，因此尋找有效的食管癌生物標志物具有重要臨床意義。miRNA在正常細胞的發育、分化、凋亡及調控靶mRNA的表達中有重要作用，同時也在腫瘤發生、侵襲、轉移和化療中有一定的作用，miRNA的組織特異性和疾病特異性表達可作為腫瘤診斷、預測和治療的研究基礎。本研究通過分析miRNA-126、miRNA-26a在食管癌中的表達及其與患者臨床特征的關系，以期為臨床診治提供依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年1月至2016年3月于鄭州大學第一附屬醫院行食管癌手術切除患者的病歷資料。納入標準：①符合《食管癌臨床多學科綜合診斷與鑒別診斷》中相關診斷標準，且經手術病理檢查確診；②采用手術切除治療，且術前未接受過相關治療；③臨床資料完整。排除標準：①合并其他類型腫瘤；②合并自身免疫性疾病和腎臟損傷。根據納入、排除標準，共納入113例食管癌患者，其中男59例，女54例；年齡37～79歲，平均（59.12±4.79）歲；腫瘤部位：食管上段23例，中段54例，下段36例；病變長度：≥3 cm 94例，＜3 cm 19例；分化程度：高分化19例，中低分化94例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期70例；浸潤深度：黏膜層～肌層74例，肌層以外39例；有淋巴結轉移61例，無淋巴結轉移52例。收集113例患者的食管癌組織和癌旁組織各113例。

1.2 檢測方法

檢測所有患者血清miRNA-126、miRNA-26a的表達水平。所有患者禁食12 h以上，采集清晨空腹靜脈血4 ml，經過離心處理取上清液置于-80℃冰箱保存。采用定量逆轉錄聚合酶鏈反應（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測患者血清miRNA-126、miRNA-26a的相對表達量。提取總RNA，使用miRNA qRT-PCR檢測試劑盒進行miRNA的逆轉錄過程，輕柔混勻qPCR預混液短暫離心，將預混液分別加入PCR八連管中，確保其集中于PCR八連管底部，使用定量PCR儀，設置PCR程序并進行定量PCR反應。反應結束收集數據，對數據Ct值進行分析，采用2計算血清miRNA-126、miRNA-26a的相對表達量。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 miRNA-126、miRNA-26a相對表達量的比較

食管癌組織中miRNA-126和miRNA-26a相對表達量均明顯低于癌旁組織，差異均有統計學意義（

P

＜0.01）（表1）。ROC曲線分析結果顯示，當約登指數最大時，對應的miRNA-126和miRNA-26a為0.92和2.03，可作為診斷食管癌的臨界值（圖1）。miRNA-126和miRNA-26a在食管癌組織中的表達水平呈正相關（

r

=0.757，

P

＜0.01）。

表1 食管癌組織和癌旁組織中miRNA-126、miRNA-26a相對表達量的比較（±s）

圖1 miRNA-126、miRNA-26a診斷食管癌的ROC曲線

2.2 不同臨床特征食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤部位、病變長度和浸潤深度的食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達情況比較，差異均無統計學意義（

P

＞0.05）；不同分化程度、TNM分期及淋巴結轉移情況的食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達情況比較，差異均有統計學意義（

P

＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征食管癌患者中miRNA-126和miRNA-26a表達情況的比較（n=113）

3 討論

食管癌是一類常見的消化系統疾病，世界范圍內每年約有48萬新發病例，死亡人數可達40多萬，中國食管癌每年新增人數達15萬以上，發病率僅次于肺癌、胃癌和肝癌。其發病原因復雜，與飲食習慣、感染、食管反流病、遺傳、吸煙、喝酒等均有一定關聯。由于食管癌早期無明顯表現，當患者出現胸痛、吞咽困難等臨床癥狀時，病情已發展至中晚期，致使食管癌患者5年生存率較低。現代分子生物學認為，腫瘤的發生是多基因共同作用的結果，癌性基因過度表達和抑癌基因表達減弱、細胞增殖增強和凋亡減少等都在腫瘤發生發展中起重要作用。探究食管癌的生物學機制和基因表達對其診斷和治療均有重要臨床意義。許多研究證實miRNA參與到人類腫瘤的發生和發展中，miRNA的具體作用機制尚未完全明確，目前認為主要與以下兩個方面因素有關：①某些miRNA可能為人類潛在的原癌基因或抑癌基因；②miRNA可能為調控腫瘤細胞的增殖、分化和凋亡提供了有利因素。血清miRNA的表達均可通過qRT-PCR技術進行檢測，血清miRNA水平的表達也可為腫瘤的診斷、治療提供新思路。

本研究中，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌組織中均呈低表達，miRNA-126和miRNA-26a的表達情況與食管癌分化程度、TNM分期及淋巴結轉移關系密切，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌組織中的表達水平呈正相關，提示miRNA-126和miRNA-26a在食管癌的發生發展中具有重要調控作用。相關研究表明，miRNA-126在消化系統中發揮著抑癌基因的重要作用，當miRNA-126呈低表達，血管內皮黏附因子水平升高，參與新生血管形成，促使腫瘤細胞增殖。有研究發現，恢復miRNA-126的表達降低了乳腺癌細胞的生長和增殖時間，表明miRNA-126低表達可加快腫瘤發展。miRNA-26a是血管平滑肌功能和新內膜增生的重要調節因子，不僅可以調節內皮細胞的功能，同時對血管平滑肌細胞也具有明顯靶向調節作用，miRNA-26a的上調可抑制血管平滑肌細胞的增殖和遷移。此外，還有研究發現miRNA-26a與腫瘤細胞的增長和轉移也有一定的聯系，但有關miRNA-26a表達水平與食管癌的相關研究并不多見，本研究中發現，食管癌分化程度越低、病理分期越晚、出現淋巴結轉移的患者，血清miRNA-26a的表達水平越低，因此miRNA-26a可作為食管癌患者預后的生物學指標。綜上所述，miRNA-126和miRNA-26a在食管癌中均呈低表達，且與腫瘤分化程度、臨床分期和淋巴結轉移有緊密聯系，這為食管癌的發生機制和診治提供了新思路。