燒傷患者中性粒細胞趨化因子變化分析

何永勝

（河南長垣市人民醫院，燒傷科，河南 長垣 453400）

感染是燒傷患者常見的一種并發癥，其發病率及死亡率均很高，是導致燒傷患者休克或死亡的一個主要原因 [1]。中性粒細作為機體防御反應的第一道防線，在機體感染時有重要的免疫應答功能，而趨化因子則能誘導中性粒細胞遷移至感染灶。本研究選取燒傷患者和健康者為研究對象，來探討燒傷患者外周血中性粒細胞趨化因子的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取56例2018年2月至2020年5月來我院救治的燒傷患者為研究組，其中30例患者為男性，26例患者為女性；平均年齡35.67±6.12歲。入選標準：⑴均為燒傷患者；⑵均是成年患者；⑶患者的意識均清晰，可以進行語言的交流；⑷患者均有簽署知情同意書。同時選取同時期所招募的健康志愿者60例為對照組，男性33例，女性27例，平均年齡35.81±6.01歲。排除標準：⑴肝腎功能不全的患者；⑵合并心、肝、腎等重要器官并發癥的患者；⑶凝血功能障礙的患者；⑷有免疫功能疾病的患者；⑸合并意識障礙的患者。本研究通過了我院醫學倫理委員會的審核。

1.2 方法與觀察指標

試驗做3次，取平均值。

1.2.1 中性粒細胞的趨化距離

①將0.55g瓊脂糖加入由美國Gibco公司提供的含1.6mL熱滅活胎牛血清的18.4mL RPMI 1640培養基中，然后與由美國Gibco公司提供的2.3mL含鎂、鈣離子的Hank平衡鹽溶液輕微振蕩混勻。② 將上述配置溶液放入70℃的熱水浴中靜置20s后加入無包被直徑35mm的培養皿中，室溫冷卻凝固后使用空心管打3個孔（3.5mm孔徑），孔間距均為2.4mm。負壓吸取孔內的瓊脂糖后室溫靜置后備用。③取兩組患者外周血的中性粒細胞（兩組患者均在入院后1d、3d、5d取外周靜脈血，然后用流式細胞儀來檢測中性粒細胞的純度＞95%[6]，用于后續的實驗），調整細胞濃度至1×107個?mL-1。在兩邊的孔中均加入10μL的調整好的中性粒細胞，在中間孔加入10μL的物質量的趨化物IL-8（濃度10μmol/L）。然后將培養皿放入37℃培養箱（二氧化碳的體積分數為5%）中進行2h的培養，然后將培養皿放于40倍倒置的顯微鏡下進行觀察中性粒細胞趨化到中間趨化物的距離。

1.2.2 CXCR1與CXCR2受體陽性率

入院3d時取上述兩組患者外周血的中性粒細胞，調整細胞濃度到1×106個?mL-1 ，然后在4℃下離心10min（400×g），接著用預冷的PBS重新懸浮細胞，3次后棄上清液用100μL結合緩沖液重新懸浮細胞。然后向懸浮細胞加入依次加入藻紅蛋白標記及別藻藍蛋白標記的鼠抗人CXCR1及CXCR2流失抗體（由美國BD公司提供）進行孵育30min，然后離心棄去上清液，用500μL的結合緩沖液重新懸浮細胞，然后用流式細胞儀來檢測CXCR1與CXCR2的陽性率。

1.2.3 炎性細胞因子的水平

采取兩組研究對象的靜脈血，靜置30min后離心（400×g ）10min取血清按ELISA檢測試劑盒來檢檢測兩組患者血清中IL-6、IL-10水平。

1.4 統計學方法

本研究使用SPSS 24.0處理數據。采用均數±標準差（±SD）來描述計量資料，組間比較為t檢驗，計數資料以率表示，采用卡方檢驗。

2 結果

2.1 兩組患者中性粒細胞的趨化距離

研究組患者入院1d、3d、5d時中性粒細胞的趨化距離均明顯短于對照組（p＜0.05），詳見表1。

表1 兩組患者中性粒細胞的趨化距離對比（X± SD）

2.2 兩組患者中性粒細胞趨化因子受體陽性表達的比較

研究組患者入院3d時中性粒細胞趨化因子受體CXCR1與CXCR2受體陽性率均明顯低于對照組（p＜0.05），詳見表2。

表2 兩組患者中性粒細胞趨化因子受體陽性表達的比較（±SD）

表2 兩組患者中性粒細胞趨化因子受體陽性表達的比較（±SD）

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2.3 研究組患者不同燒傷程度患者中性粒細胞趨化因子受體陽性表達的比較

依據1970年全國燒傷會議討論所通過的燒傷程度分為輕度燒傷組、中度燒傷組和重度燒傷組。重度燒傷組患者的入院3d時中性粒細胞趨化因子受體CXCR1與CXCR2受體陽性率明顯低于輕度燒傷組與中度燒傷組，中度燒傷組入院3d時中性粒細胞趨化因子受體CXCR1與CXCR2受體陽性率明顯低于輕度燒傷組，詳見表3。

2.4 炎性細胞因子水平的比較

研究組患者IL-6、IL-10及TNF-α的水平想高于對照組，性能見表4。

表 3研究組患者不同燒傷程度患者中性粒細胞趨化因子受體陽性表達的比較（±SD）

表 3研究組患者不同燒傷程度患者中性粒細胞趨化因子受體陽性表達的比較（±SD）

注：與輕度燒傷組比較，#P＜0.05；與中度燒傷組比較，*P＜0.05。

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表4 兩組研究 對象炎性細胞因子的比較（±SD）

表4 兩組研究 對象炎性細胞因子的比較（±SD）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

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3 討論

嚴重燒傷患者不僅要遭受身體的痛苦，而且還會遭受精神上的痛苦，這是由于患者的身體在嚴重燒傷后對溫度的敏感性及耐受度都有所降低，其患處會有增生、瘙癢等癥狀，降低患者的免疫力，進而會引發各種并發癥。

感染是燒傷患者最常見的嚴重并發癥之一，是造成患者死亡的主要因素之一[2]。控制感染是臨床工作治療燒傷患者的一個極其重要難題，有效地控制燒傷患者的感染是降低燒傷患者病死率的關鍵[3]。

本研究結果顯示燒傷患者外周血中CXCR1的陽性表達率及CXCR2的陽性表達率均明顯降低，這一結果提示在燒傷患者感染期間，外周血中性粒細胞的趨化功能受到損害，因此感染部位發揮抗感染、吞噬病原微生物的功能有一定障礙，其原因可能是與趨化因子受體（CXCY1及CXCR2）的陽性表達減少相關。本研究結果還顯示重度燒傷患者的外周血中CXCR1的陽性表達率及CXCR2的陽性表達率明顯低于中度及輕度燒傷組患者；中度燒傷組患者外周血中CXCR1的陽性表達率及CXCR2的陽性表達率明顯低于低度燒傷組患者[4-5]。這是對上述結果的進一步證實。此外本研究顯示研究組患者的炎性細胞因子水平明顯高于對照組，這說明燒傷患者的炎性反應明顯高于健康人群。

綜上所述，燒傷患者早期外周血中性粒細胞的趨化功能存在著障礙，可能與中性粒細胞趨化因子（CXCY1及CXCR2）的陽性表達率減少相關。