實時PCR 檢驗在高危型人乳頭瘤病毒中的診斷價值分析

唐昕

廣安市人民醫院檢驗科 四川廣安 638000

人乳頭病毒（HPV）是一種常見、多發疾病，根據一項調查數據顯示，在已經確診的宮頸癌患者中，大部分患者均有HPV 感染情況，此外CIN（宮頸上皮內瘤樣病變）也有著HPV 感染現象，對生命造成了極大威脅[1]。HPV 種類并不是單一的，現已知的高危型HPV 種類已經達到15 種，在我國常見的高危型毒種族以16、18、58 為主。現臨床檢驗HPV 常用法為HC Ⅱ（第二代雜交式捕獲法），然而隨著醫療技術不斷提升，實時熒光PCR 檢驗技術逐漸成熟、規范，因其有著快捷簡便、價格低等獨特優勢，所以在臨床被廣泛應用。本次研究中主要分析時PCR 檢驗在高危型人乳頭瘤病毒中的診斷價值，以下為具體數據報告。

1 研究資料與方法

1.1 研究資料

選擇2019年5月～2020年5月我院收治109例高危型人乳頭瘤病毒患者作為本次研究對象。年齡最小者23歲，年齡最大者66歲，中位數年齡為（44.5±6.6）歲；21例為高度上皮內鱗狀病變，46例為不典型鱗狀細胞特征，42例為低度上皮內鱗狀病變；38例年齡≤30歲、16例年齡在31～45歲間、25例年46～60歲、30例年齡≥61歲。入選患者均為已婚女性，且同意參加此次研究。

1.2 方法

取樣：在進行檢驗之前，利用窺陰器暴露出宮頸，取棉拭子擦拭宮頸口分泌物，然后使用專用HPV 宮頸刷收集宮頸口處標本，輕輕的轉動4～5 圈以取得充足上皮細胞樣本，然后取出宮頸刷，將其折斷之后浸泡到保存液內，做好標記。

A 組：按照每分鐘13000 轉的速度對標本進行處理，時間約1min，然后將50uL 裂解液放入沉淀物中，通過水浴加熱10min，然后再進行離心處理，取上層清野視為PCR 模板。嚴格按照試劑盒內說明書實施檢測。

B 組：取HPV-DNA 試劑盒、子宮頸微采樣器、HC Ⅱ雜交信號擴大系統。采集檢驗標本之后經RNA探針實施雜交，然后將生成的雜交體與特異性抗體結合在一起，同時發出信號，經發光強度大小實施定量測定，并將含量計算出來。當HPV 負荷量＞1.0pg/ml時為陽性。

1.3 觀察指標

比較實時PCR 檢驗法、HC Ⅱ檢驗法檢驗不同程度宮頸病變HPV 結果與HPV 陽性檢出率。

1.4 統計學應用

將數據建立的EXCEL 數據庫導入SPSS19.0 軟件，對各種變量中的計數資料以%表示，使用X2檢驗，P＜0.05 認定為差異存在顯著性。

2 結果

2.1 兩種檢驗不同程度宮頸病變HPV 結果 見表1

表1 兩種檢驗不同程度宮頸病變HPV 結果[n(%)]

2.2 兩種檢驗方法的HPV 陽性檢出率對比 見表2

表2 兩種檢驗方法的HPV 陽性檢出率對比[n(%)]

3 討論

高危型HPV 是引起宮頸病變主要因素，在全球中宮頸癌的發病率是極高的，每年因宮頸癌死亡病例＞50萬，對生命安全造成了極大威脅，影響著女性生存質量。一旦機體感染HPV 后免疫系統會發生變化，隨之產生大量炎癥因子與細胞因襲，機體表現出炎癥反應與組織損傷，導致人體自黏膜增生發展成為惡性腫瘤，因而早診斷、早治療意義重大[2]。隨著醫療技術的提升，就HPV 基因型來說被發現的就已經達到百種，其中大約40%的基因型與生殖系統感染有著密切關系、大約20%的基因型與腫瘤有著密切關系，按照與癌疾病發生關系將HPV 分為兩種，一種為低危型、一種為高危型[3]。病毒引起疾病的方式有所不同，43、11 型等低危型病毒會導致宮頸低度病變，68、58、39、18 等高危型病毒致病力極強，導致癌疾病幾率極高。通過多年的研究發現，我國常見的高危病毒有HPV58、16、18。

HPV 并不能做體外培養，也就不能通過血清血檢測進行診斷，HPV 的檢測需依靠細胞形態學檢測等技術，傳統巴氏涂片為細胞學檢測法，但是因感染HPV 后形態學會發生變化，所以敏感性并不高，且極易漏診，組織學檢測與細胞學檢測相同，不僅檢驗準確率高，受檢患者所承受疼痛較大，分子生物學檢測技術的靈敏性較高，也可以對HPV 進行分型[4]。HPV 感染初期癥狀不是很顯著，潛伏期時間更比較長，在早期檢驗診斷中分子生物學檢測技術發揮了重要意義。HC Ⅱ檢驗法是檢驗HPV常用方式，檢驗效果較好。當醫學技術不斷提升之后，多種檢驗方法應運而生，且在多方面發揮著獨特優勢。PCR 檢驗技術有著敏感性高、特異性高的特點，在遺傳學檢測等多領域中均有著重要價值，特別是在普通PCR基礎上發展的實時PCR 技術，在PCR 反應體系內加熒光基團之后再通過熒光信號積累對整個PCR 進程進行實時監測，熒光染料在滲入DNA 雙鏈后，會發出熒光引號，確保熒光信號與PCR 產物處于同步增加狀[5]。HC Ⅱ檢驗法在檢驗因方法學、檢驗系統與實時PCR 檢驗法有著很大不同，所以檢驗結果會出現偏差，而實時PCR 檢驗的檢驗結果較好，有效實現了早發現、早治療。

在本次研究中，高危型HPV 患者年齡在23～66歲，其中38例年齡≤30歲、16例年齡在31～45歲間、25例年46～60歲、30例年齡≥61歲，由此可見高危型HPV呈U 形，30歲以下人群感染率比較高，分析其原因這個年齡段的性生活較為頻繁，自我保護意識也較為缺乏，所以宮頸抵抗力比較差，31～45歲間發病利率有所降低，分析其原因為這個年齡段有著固定的性伴侶，性生活有所減少，身體機能穩定，但是在46歲后，感染率漸漸增加，且隨著年齡增加感染率也隨之增加，分析其原因為老年人免疫能力差、雌激素水平低，也就是說＜30歲、＞60歲人群是重點檢查對象；分別采用實時PCR 檢驗法與HC Ⅱ檢驗法分別對高危型HPV 患者實施檢驗，通過比較檢驗結果發現：①在統計學方面兩種檢驗方法的宮頸病變分級檢出率并無差異P ＞0.05，而在鱗狀上皮病變急慢性宮頸炎方面，實時PCR 檢驗法檢出率較高，統計學意義差異明顯P ＜0.05；②HC Ⅱ檢驗法的HPV陽性檢出率為62.4%，實時PCR 檢驗法的HPV 陽性檢出率為71.6%，在統計學方面有意義P ＜0.05。由此可見實時PCR檢驗效果較好。總結實時PCR檢驗的優勢如下：①PCR 產物不需要進行特別處理，因此擴增產物感染幾率比較小；②有效彌補了常規PCR 的不足（假陽性率高、不能定量）；③操作簡單、快速[6]。實時PCR 檢驗是在全封閉環境中進行檢驗，避免了受污染現象，所以檢出率較好。

總而言之，實時PCR 檢驗在高危型人乳頭病毒檢驗中，檢出率較高，具有推廣價值。