無創DNA陽性結果的驗證分析及臨床意義

奉 淼

（遼寧省葫蘆島市中心醫院，遼寧 葫蘆島 125001）

無創DNA檢測是臨床常用的產前診斷技術，其具備無創的優勢，因而臨床實際開展率較高[1-2]。隨著新一代DNA測序技術的不斷優化與改進，其診斷準確性不斷提升。但與羊膜腔穿刺相比，準確性仍存在較大的差異，在臨床實際檢測過程中存在較高的假陽性率，因而其臨床應用價值也存在較大的爭議[3-4]。本研究旨在驗證分析無創產前基因檢測（無創DNA）的陽性結果，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月至2019年1月在本院建檔產檢且行無創DNA檢測顯示結果陽性的80例產婦作為研究對象。所有產婦均符合無創DNA檢測指征，無創DNA檢測結果提示高風險后，均行羊膜腔穿刺進行確認。80例產婦中，初次妊娠者31例，再次妊娠者49例；年齡30～42歲，平均（36.14±6.02）歲；無創DNA檢測時間12～20周，平均（16.08±4.15）周；檢測結果：42例21-三體陽性，14例18-三體陽性，6例13-三體陽性，18例性染色體異常。

1.2 納入與排除標準 納入標準：符合無創DNA檢測指征，自愿進行無創DNA檢測；無創DNA檢測結果提示染色體異常高風險；自愿進行羊膜腔穿刺產前診斷；產婦和家屬均自愿參與本次研究，并簽署知情同意書。排除標準：不同意實施羊膜腔穿刺者；存在羊膜腔穿刺禁忌證者；終止妊娠后失訪者等。

1.3 檢測方法 針對80例無創DNA檢測結果陽性產婦，通過產前診斷指導進行羊膜腔穿刺，后行染色體FISH和核型分析；經B超引導定位后，采用羊水專用穿刺針經腹部穿刺，抽取15 mL羊水，均分為2份，分別進行染色體FISH和核型分析；1份羊水經離心培養后，加入秋水仙堿收獲細胞，固定后制片、烤片，G顯帶染色分析；1份羊水采用CSP18/X/Y探針和GLP13/21探針行系統案例熒光原位雜交（fluorescent in situ hybridization，FISH）分析。

1.4 觀察指標 統計羊膜腔穿刺檢測診斷結果，并與無創DNA診斷結果比較，計算無創DNA診斷的準確率和假陽性率，對比確診者染色體核型分析與無創DNA診斷結果。追蹤隨訪1年，觀察產婦妊娠結局及嬰兒生長發育情況。

1.5 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 羊膜腔穿刺與無創DNA診斷結果比較 80例無創DNA陽性結果產婦行羊膜腔穿刺確診57例存在染色體異常，13例為假陽性（28.75%），總準確率為71.25%；其中42例無創DNA提示21-三體者診斷準確率（92.54%）最高，顯著高于18-三體、13-三體、性染色體異常，差異具有統計學意義（P＜0.05）；6例無創DNA提示13-三體者（33.33%）診斷準確率最低，顯著低于18-三體、性染色體異常者等，差異有統計學意義（P＜0.05），其次為18-三體（78.57%）和性染色體異常（77.78%）者。見表1。

表1 無創DNA陽性患者診斷結果與羊膜腔穿刺診斷結果比較

2.2 羊膜腔穿刺確診者染色體核型分析和無創DNA結果比較 無創DNA結果顯示染色體異常風險，羊膜腔穿刺后染色體核型分析可確認胎兒的染色體異常位置與具體突變。見表2。

表2 57例羊膜腔穿刺確診者染色體核型分析和無創DNA結果比較

2.3 妊娠結局統計 80例無創DNA陽性結果孕婦中，57例羊膜腔穿刺確診者均終止妊娠，進行引產處理；13例經羊膜腔穿刺確認無染色體異常的產婦均繼續妊娠，其中足月分娩11例，2例早產者，分別于33周胎膜早破分娩，35周胎兒宮內窘迫終止妊娠；13例胎兒出生后，均無外觀異常，隨訪1年顯示，患兒無外觀異常，生長發育均正常，與產前診斷（羊膜腔穿刺）結果一致。

3 討 論

染色體異常是新生兒先天性疾病中的高發類型，其中21-三體綜合征發生率最高，此外，18-三體和13-三體等疾病也較為常見，該類疾病屬于染色體非整倍體疾病。羊膜腔穿刺是產前診斷的確診依據，診斷準確率極高，但其屬于有創檢查，存在較多的禁忌證，導致母嬰風險較高，因而在實際應用中需慎重使用[5-7]。

無創DNA檢測可通過血漿中胎兒游離DNA進行基因測序，并對測序結果進行生物信息分析，然后發現其中的染色體非整倍體，提示是否存在染色體數目增加或減少的情況。與羊膜腔穿刺相比，無創DNA檢測安全、快速，但其檢測準確性相對不足[8-10]。相關文獻報道顯示，其假陽性者占比較高，準確率為60%～80%。本研究發現，80例產婦經羊膜腔穿刺檢查確診57例存在染色體異常，假陽性率為28.75%，總準確率僅為71.25%，可知其陽性結果的準確率不理想。本研究進一步分析發現，無創DNA提示21-三體者診斷準確率最高，其次為18-三體和性染色體異常者，13-三體者診斷準確率最低，可知無創DNA對21-三體者的診斷準確性較為理想，18-三體和性染色體異常診斷準確性均不足80%，13-三體診斷準確率過低，不具有診斷價值，可見無創DNA提示21-三體者高風險者診斷價值較高，其他類型染色體異常準確性不足。本研究還發現，無創DNA結果僅提示染色體異常風險，羊膜腔穿刺后染色體核型分析可確認胎兒的染色體異常位置與具體突變，提示無創DNA檢測存在明顯的局限性。此外，在實際產前診斷中，無創DNA檢測受限于母體染色體異常、異體輸血、移植治療等因素，這類產婦不可進行無創DNA檢測，建議行羊膜腔穿刺檢查。隨著孕周的增加，無創DNA檢測也存在下降的問題，最佳檢測時間為孕15～18周，應嚴格把控檢測時機，避免出現假陽性結果打擊產婦家屬的情緒，減少不必要的無創DNA檢測。

綜上所述，無創DNA對21-三體診斷準確性相對較高，結果陽性者存在較高的染色體異常風險，但不能將其作為確診依據，需進一步聯合其他產前診斷方式確診。