脂質(zhì)體封裝的介孔納米藥物治療急性淋巴細(xì)胞白血病的研究

魏莉平，費(fèi)安興，李勝，張常亮，鄒甜甜，王鍍津★

（1.鄂東醫(yī)療集團(tuán)市婦幼保健院 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，湖北 黃石 435000；2.鄂東醫(yī)療集團(tuán)市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院）醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，湖北 黃石 435000；3.腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 黃石 4 350003）

0 引言

白血病起病隱匿，在疾病早期缺乏特異性的檢測(cè)手段，不易與其他血液性疾病相區(qū)分，這也導(dǎo)致了白血病確診時(shí)多已經(jīng)到中晚期，延誤了最佳治療時(shí)機(jī)。因此迫切需要研究開發(fā)新的診治技術(shù)，使白血病患者能夠早發(fā)現(xiàn)，早治療[1-3]。

介孔二氧化硅納米粒子（Mesoporous Silica Nanoparticle，MSN），是一種具有中空結(jié)構(gòu)的新型納米材料，其粒徑大小，孔徑大小以及孔容積都可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。介孔二氧化硅納米粒子具有良好的組織相溶性，較低的人體毒性，是一種理想的化學(xué)藥物運(yùn)送載體。但是介孔材料都有孔的外在開口，裝載的化學(xué)藥物在運(yùn)送過(guò)程中存在一定的泄露風(fēng)險(xiǎn)[4-6]。因此，科研人員研發(fā)了很多用于封堵介孔的方法。

脂質(zhì)體（Liposome），是一類由磷脂分子組成的，具有類似細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的納米囊泡狀結(jié)構(gòu)。其易于合成，具有良好的組織相溶性，是一類良好的藥物運(yùn)送載體[7-9]。本研究利用脂質(zhì)分子，在介孔二氧化硅納米粒子表面形成一層脂質(zhì)膜層，該膜層的應(yīng)用具有以下優(yōu)點(diǎn)：①能有效封堵介孔，防止藥物運(yùn)送過(guò)程中發(fā)生泄漏；②提供易于修飾的表面，便于修飾特異性靶向分子；③改進(jìn)無(wú)機(jī)納米材料表面的性狀，使其在體液環(huán)境中更加穩(wěn)定。

核酸適配體（Aptamer）是利用指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化（systematic evolution of ligand and by exponential enrichment,SELEX）技術(shù)篩選的針對(duì)特異性靶點(diǎn)的小分子DNA或RNA。其具有類似于抗體的結(jié)合特性，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，篩選周期短，是理想的藥物載體系統(tǒng)靶向分子。Sgc8是Xiao Zeyu 等人篩選出的具有T-ALL細(xì)胞株CEM特異性結(jié)合能力的核酸適配體，其靶分子為蛋白酪氨酸激酶7（PTK-7）。正常的T細(xì)胞不表達(dá)蛋白酪氨酸激酶7，利用這一優(yōu)點(diǎn)，sgc8作為白血病治療的靶分子，具有極大的應(yīng)用前景[10-11]。

本研究構(gòu)建了一種基于sgc8（Apt），脂質(zhì)體（L）及介孔二氧化硅（M）的新型靶向納米藥物運(yùn)載系統(tǒng)Apt-LM,其能夠?qū)NA毒性藥物靶向運(yùn)送到白血病細(xì)胞內(nèi)，精準(zhǔn)殺傷白血病細(xì)胞，為白血病的精準(zhǔn)診療提供了一種新的策略。

1 材料與方法

1.1 試劑

正硅酸酯（Tetraethylorthosilicate，TEOS），三羥基三乙胺（triethanolamine，TEA），3-氨丙基三乙氧基硅烷（3-Aminopropyltriethoxysilane APTES），十六烷基三甲基氯化銨（Cetyltrimethylammonium chloride，CTAC，25wt%），購(gòu)自Sigma公司。1-棕櫚酰基-2-硬脂酰基卵磷脂（1-Palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，POPC），二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（1.2-distearoyl-snglycerol-3-phosphoethanolamine-N-[amino（polyethylene glycol）-2000]（ammonium salt），DSPE-PEG2000），二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來(lái)酰亞胺（1.2-distearoyl-snglycero-3-phosphoethanolamine-N-[maleimide（polyethylene glycol）-2000]（ammonium salt,DSPE-PEG2000-MAL），購(gòu)自美國(guó)AVANTI公司。熒光染料（1,1-Dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylind ocarbocyanineperchlorate，DiI）購(gòu)自江蘇碧云天公司。CCK-8試劑盒及阿奇霉素藥物（DOX）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。Sgc8核酸適配體（5’-ATC TAA CTG CTG CGC CGC CGG GAA AAT ACT GTA CGG TTA GA-3’）及其修飾由上海生物工程有限公司合成。其他為實(shí)驗(yàn)室自配試劑。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

CEM及 Ramos細(xì)胞使用含10%胎牛血清（Fet al Bovine Serum，F(xiàn)BS）、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的DMEM（dulbecco’s modified eagle medium）培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞均置于37 °C，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3 MSN納米粒子合成

25g十六烷基三甲基氯化銨（CTAC）和1g三羥乙基胺（TEA）溶于250mL去離子水中，95°C油浴冷凝回流，200rpm劇烈磁力攪拌1h，隨后37.5mL正硅酸乙酯（TEOS，tetraethylorthosilicate）逐滴加入上述溶液，繼續(xù)攪拌1h；產(chǎn)物自然冷卻到室溫，16000rpm，30min離心收集固體產(chǎn)物；產(chǎn)物分散在無(wú)水乙醇中，超聲波清洗10min，16000rpm離心30min收集固體產(chǎn)物，重復(fù)上述過(guò)程3次。產(chǎn)物用無(wú)水乙醇分散，78℃硅油浴，在v/v10%鹽酸乙醇中磁力攪拌并冷凝回流萃取6h，去除模板CTAC，重復(fù)上述步驟，直到CTAC萃取完全。離心收集固體產(chǎn)物，終產(chǎn)物使用20mL去離子水超聲分散，加入50μl冰乙酸，25μLAPTES，室溫下攪拌24h，用去離子水洗若干次，真空冷凍干燥24h，得到氨基修飾的MSN納米粒子。為了獲得FITC熒光基團(tuán)修飾的MSN，適量羧基修飾的FITC及19.2mgEDC和28mgNHS融入2mLPBS溶液（pH7.4）。樣品先在室溫下磁力攪拌15min，之后氨基修飾的10mgMSN納米粒子加入上述溶液，磁力攪拌反應(yīng)24h。產(chǎn)物使用單蒸水16000rpm，15min清洗3次，終產(chǎn)物使用單蒸水分散保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 M/DOX 合成

將鹽酸阿霉素粉末溶解在PH 7.0的PBS溶液中，配置成0.5mg/mL的鹽酸阿霉素溶液，-20℃避光保存?zhèn)溆谩?0mg MSN納米粒子分散溶解在5mL鹽酸阿霉素溶液中（0.5mg/mL），室溫?cái)嚢?4h，16000rpm離心收集產(chǎn)物，用PH 7.0的PBS溶液清洗若干次，獲得M/DOX納米藥物。使用紫外分光光度法測(cè)定藥物包封率及載藥量。計(jì)算公式為：

包封率（%）=納米粒子中裝載的阿霉素量/納米粒子質(zhì)量＊100%

包封率（%=）納米粒子中裝載的阿霉素量/總投藥量＊100%

1.5 脂質(zhì)體（L）制備

采用薄層水化法制備脂質(zhì)體，將POPC，DSPE-PEG2000和DSPE-PEG2000按摩爾質(zhì)量比50∶4∶1溶解在氯仿溶液中（制備熒光納米粒子時(shí)加入適當(dāng)比例DiI熒光基團(tuán)），然后將其加入圓底燒瓶中，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成干燥薄膜，通入純氮?dú)馀懦Ｓ嗦确鲁煞郑缓笳婵崭稍飪x干燥過(guò)夜形成脂膜。用1 mL 濃度為300 mM的枸櫞酸緩沖液（pH=4.0）進(jìn)行水化，渦旋燒瓶使薄膜成分完全溶解在溶液中。然后在37℃水浴中超聲15min，當(dāng)溶液變得澄清透明后，再反復(fù)凍融3次（液氮和60℃）。再依次通過(guò)不同孔徑（200nm、100nm和80nm）的膜，擠壓15次形成直徑在100nm左右的脂質(zhì)體。

1.6 Apt-L制備

巰基修飾的Sgc8核酸適配體與DSPE-PEG2000-MAL按照1:10的摩爾比加入到1.5制備的脂質(zhì)體中并混勻，在純氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下反應(yīng)24h即得到Apt-L。

1.7 Apt-LM/DOX納米藥物制備

取100 微升1.6中制備的Apt-L，10mg MSN或M/DOX用移液槍上下混勻數(shù)十次，4℃環(huán)境中放置2周左右，16000rpm短時(shí)離心收集沉淀物，用pH 7.4的PBS溶液清洗若干次，即得到Apt-LM/DOX納米藥物。

1.8 納米材料表征

分別將MSN,Apt-LM用單蒸水稀釋，取各組材料放置于特制銅網(wǎng)上靜止10分鐘，用2%磷鎢酸（pH 7.0）負(fù)染1min，用濾紙吸除多余的液體，H-7650電子顯微鏡電子束加速電壓100 KV下拍攝納米粒子圖像。Zetasizer 電位儀（Zetasizer Nano S,Malvern，UK）和動(dòng)態(tài)光散射（dynamic light scattering，DLS）的方法測(cè)定納米材料粒徑和電位。

1.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Apt-LM熒光納米探針白血病細(xì)胞靶向效果

收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的CEM細(xì)胞及RAMOS細(xì)胞，按照2×105細(xì)胞/孔在六孔板中培養(yǎng)，分別設(shè)置control組，Apt組，Apt-LM組，每組重復(fù)3個(gè)孔。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組加入相當(dāng)于100nM濃度的各檢測(cè)探針，培養(yǎng)2h。1200rpm，5min收集細(xì)胞，用PBS洗3次，用500μl PBS重懸，使用流式細(xì)胞儀（Epics XL 美國(guó)Beckman coulter）檢測(cè)。

1.10 熒光顯微鏡檢測(cè)Apt-LM熒光納米探針白血病細(xì)胞靶向效果

收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的CEM白血病細(xì)胞系，按照1×106細(xì)胞/孔在六孔板中培養(yǎng)，分別加入control組，LM組，Apt-LM組納米探針，終濃度都為100μg/mL。培養(yǎng)24h，1200rpm，5min離心收集細(xì)胞，用PBS洗3次，用多聚甲醛（4%）固定30min。PBS洗3次，用1 mg/mL DAPI染核5min，用PBS洗3次，在倒置熒光顯微鏡下觀察納米探針靶向效果。

1.11 體外納米藥物靶向效果檢測(cè)

CEM細(xì)胞2x105/孔在六孔板中培養(yǎng)24h每孔加入相當(dāng)于3μg/mLApt-LM/DOX的納米藥物，分別培養(yǎng)4h及24h，收集培養(yǎng)后的細(xì)胞，用PBS洗3次，用多聚甲醛（4%）固定30min，取各組材料放置于特制銅網(wǎng)上靜止10min，用2%磷鎢酸（pH7.0）負(fù)染1min，用濾紙吸除多余的液體，H-7650電子顯微鏡電子束加速電壓100kV下拍攝細(xì)胞圖像。

1.12 Apt-LM/DOX納米藥物釋放實(shí)驗(yàn)及體外殺傷效果評(píng)估

1.12.1 Apt-LM/DOX納米藥物釋放實(shí)驗(yàn)

取500μl（包含1mg阿霉素）Apt-LM/DOX，置于透析管（MWCO12000）底部，放入30mLpH值分別為5.0和7.4的PBS溶液中，37℃水浴避光震蕩（150r/min，在不同的時(shí)間點(diǎn)，取出5mL透析液，同時(shí)加入5mL新鮮透析液，釋放出的阿霉素量使用F7000分光光度計(jì)測(cè)量（Ex=485nm，Em=560nm）。

1.12.2 Apt-LM/DOX納米藥物體外殺傷實(shí)驗(yàn)

收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的CEM細(xì)胞，按照2×105細(xì)胞/孔在5%CO2，37℃下培養(yǎng)24h，分別加入1、5、10、25及50μg/mL劑量Apt-LM納米材料，培養(yǎng)24h，每孔加入10μlCCK-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)3h，吸光度在酶標(biāo)儀上450nm波長(zhǎng)處測(cè)定。細(xì)胞毒性用實(shí)驗(yàn)組和未治療組的活細(xì)胞百分比表示。收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的CEM細(xì)胞，按照2×105細(xì)胞/孔在5%CO2，37℃下培養(yǎng)24h，分別加入阿霉素濃度為2、4、8、16μg/mL的LM/DOX、Apt-LM/DOX納米藥物，培養(yǎng)24h，每孔加入10μlCCK-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)3h，吸光度在酶標(biāo)儀上450nm波長(zhǎng)處測(cè)定。細(xì)胞毒性用實(shí)驗(yàn)組和未治療組的活細(xì)胞百分比表示。

1.13 快速冰凍切片檢測(cè)Apt-LM/DOX納米藥物體內(nèi)藥物運(yùn)送效果

收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的CEM細(xì)胞，使用PBS調(diào)整濃度到1×106/mL。將雌性5周雌性NOD/SCID小鼠隨機(jī)分成2組，每組3只。分別在每只小鼠前肢腋下注射200μl CEM細(xì)胞懸液。使用游標(biāo)卡尺監(jiān)測(cè)腫瘤大小，待腫瘤生長(zhǎng)到直徑約5mm×5mm時(shí),兩組小鼠分別自尾靜脈注射200μl Apt-LM及Apt-LM/DOX納米藥物 。24h后，鈍性分離出小鼠腫瘤組織，快速冰凍切片，裱片后，使用冰丙酮固定5min，PBS漂洗后，用DAPI染色3-5min,純水洗凈，通過(guò)熒光顯微鏡觀察Apt-LM/DOX體內(nèi)藥物運(yùn)送效果。

1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用 SPSS 19.0 以及GraphPad Prism 6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，計(jì)量資料以（）表示。兩組均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果使用Beckman Kaluza C軟件分析。

2 結(jié)果

2.1 圖1展示了Apt-LM/DOX納米藥物靶向治療白血病示意圖。

圖1 Apt-LM/DOX納米藥物靶向治療白血病示意圖

2.2 Apt-LM表征檢測(cè)結(jié)果

圖2A展示的是MSN納米材料的比表面積及介孔大小情況，合成的介孔二氧化硅納米材料比表面積均值為587.43m2/g，介孔大小均值在2.75nm。電子顯微鏡照片（圖2B）顯示Apt-LM粒徑均分布均勻。粒徑及電位檢測(cè)結(jié)果（圖2C）顯示Apt-LM納米藥物載體粒徑分布在66.3 nm，電位分布在-16.7mv左右，以上結(jié)果顯示我們獲得了分散均勻，大小一致的Apt-LM納米粒子。

圖2 Apt-LM表征檢測(cè)

2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Apt-LM熒光納米探針白血病細(xì)胞靶向效果

從圖2可知Apt-LM納米粒子與CEM細(xì)胞的結(jié)合率最高達(dá)到83.1%，而其與對(duì)照組ROMAS細(xì)胞結(jié)合率只有12.1%。且Apt-LM與CEM細(xì)胞的結(jié)合效率與單獨(dú)的Apt組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＊＊P<0.05）。

2.4 Apt-LM納米載體體外靶向作用驗(yàn)證

本研究在MSN納米材料表面修飾FITC熒光基團(tuán)，在脂質(zhì)體分子上修飾DiI熒光基團(tuán)，用于觀察其對(duì)CEM細(xì)胞的靶向作用。如圖4，我們?cè)贏pt-LM組中細(xì)胞內(nèi)觀察到了最強(qiáng)的熒光，而在未修飾靶向分子的LM組中沒(méi)有觀察到熒光，證實(shí)了Apt-LM納米粒子對(duì)CEM細(xì)胞的靶向作用。

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Apt-LM與CEM及RamosS細(xì)胞結(jié)合效率（圖3A）及統(tǒng)計(jì)圖（圖3B）,**P<0.05。

圖4 熒光顯微鏡觀察Apt-LM靶向效果，藍(lán)色：細(xì)胞核（DAPI）；綠色：FITC標(biāo)記的MSN，紅色：脂質(zhì)體（DiI）。

2.5 Apt-LM/DOX納米藥物釋放及體外殺傷效果檢測(cè)

本研究在pH為5.0和7.4的PBS溶液中模擬了藥物的釋放過(guò)程，在pH為5.0時(shí)，48 h內(nèi)釋放了超過(guò)60%的化療藥物DOX，而在pH為7.4的液體中，藥物的釋放量不超過(guò)25%。Apt-LM納米材料毒性評(píng)估實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)納米材料濃度達(dá)到50μg/mL時(shí)，細(xì)胞活性仍能保持在90%以上。體外殺傷實(shí)驗(yàn)證實(shí)Apt-LM/DOX能靶向殺傷CEM細(xì)胞，其與沒(méi)有結(jié)合靶向分子的LM/DOX組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.6 透射電鏡觀察細(xì)胞納米藥物攝入效果

圖6A為Apt-LM/DOX納米藥物與CEM細(xì)胞作用4h后拍攝的細(xì)胞透射電鏡圖，可以觀察到4h已經(jīng)有Apt-LM/DOX納米藥物進(jìn)入到細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)部。圖6B為Apt-LM/DOX納米藥物與CEM細(xì)胞作用24h后拍攝的透射電鏡圖，觀察到一個(gè)凋亡的腫瘤細(xì)胞內(nèi)有大量的Apt-LM/DOX納米藥物。

圖5 Apt-LM/DOX納米藥物釋放實(shí)驗(yàn)及體外殺傷效果評(píng)估

圖6 Apt-LM/DOX納米藥物與CEM細(xì)胞作用4 h后拍攝的細(xì)胞透射電鏡圖（圖6A），Apt-LM/DOX納米藥物與CEM細(xì)胞作用24 h后拍攝的透射電鏡圖（圖6B）

2.7 快速冰凍切片檢測(cè)Apt-LM/DOX納米藥物體內(nèi)藥物運(yùn)送效果

由于阿霉素（DOX）自帶紅色熒光的性質(zhì)，我們通過(guò)給荷瘤小鼠靜脈注射Apt-LM/DOX納米藥物，通過(guò)腫瘤組織切片我們觀察到Apt-LM/DOX治療組腫瘤內(nèi)部有大量紅色的熒光，說(shuō)明Apt-LM/DOX納米藥物可以在體內(nèi)靶向到腫瘤部位。

3 討論

白血病起病隱匿，危害性大，臨床上用于其治療的藥物如長(zhǎng)春新堿，順鉑，阿霉素都會(huì)存在著一定的副作用。如何實(shí)現(xiàn)在體內(nèi)特異性殺傷白血病細(xì)胞，是白血病治療藥物開發(fā)與應(yīng)用的難點(diǎn)。核酸適配體的出現(xiàn)，為藥物的靶向運(yùn)輸提供了很好的工具，新型納米材料的出現(xiàn)，為藥物的裝載與運(yùn)輸提供了新的平臺(tái)。

二氧化硅具有良好的組織相容性，粒徑大小可以根據(jù)反應(yīng)條件進(jìn)行調(diào)整，通過(guò)對(duì)其表面進(jìn)行改性和修飾，可以作為藥物運(yùn)輸，生物成像，生物傳感等應(yīng)用的優(yōu)良載體[12-15]。但是MSN用于靶向藥物的運(yùn)輸也會(huì)存在藥物在運(yùn)送過(guò)程中泄露的風(fēng)險(xiǎn)，因此我們合成了脂質(zhì)體納米囊泡用于改進(jìn)MSN表面特性以及封堵介孔的外口，可以有效阻止藥物分子的泄露。Sgc8是Xiao Zeyu 等人篩選出具有T-ALL細(xì)胞株CEM特異性結(jié)合能力的核酸適配體，其靶分子為蛋白酪氨酸激酶7（PTK-7）[16]。徐康力等人的最新研究證實(shí)，sgc8在人的AML、T-ALL和正常骨髓樣本中具有特異性識(shí)別能力，且對(duì)不同AML亞型可能具有不同的診斷價(jià)值[17]。正常的T細(xì)胞不表達(dá)蛋白酪氨酸激酶7，利用這一優(yōu)點(diǎn)，我們將sgc8作為白血病治療的靶向分子。

通過(guò)圖1表征分析，我們合成的Apt-LM納米藥物運(yùn)送載體粒徑大小均勻，分散良好。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的到Apt-LM納米粒子相較于單獨(dú)的Sgc8適配體具有更高的CEM結(jié)合效率，這主要得益于LM提供了很多的結(jié)合位點(diǎn)，從而使Apt-LM納米粒子上可以同時(shí)結(jié)合多條Sgc8適配體，增大了與靶細(xì)胞的結(jié)合的能力。體外熒光靶向?qū)嶒?yàn)也證實(shí)Apt-LM對(duì)CEM細(xì)胞具有更高的靶向效率，圖4中紅色與綠色熒光的重合，也間接證實(shí)了我們合成的LM載體是成功的。Apt-LM/DOX模擬體內(nèi)藥物釋放實(shí)驗(yàn)證實(shí)，Apt-LM/DOX在pH 7.4的環(huán)境中釋放緩慢，而在pH 5.0的環(huán)境中能快速釋放DOX，人體的血液環(huán)境pH值為 7.4左右，間接證明其在體液環(huán)境中不會(huì)發(fā)生大量的化學(xué)藥物泄露的風(fēng)險(xiǎn)。我們證實(shí)了Apt-LM載體對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有抑制作用，CCK-8實(shí)驗(yàn)證實(shí)Apt-LM/DOX納米藥物對(duì)CEM細(xì)胞具有特異性殺傷效果。值得注意的是，在我們的體外殺傷研究中，DOX實(shí)驗(yàn)組的殺傷能力最強(qiáng)，這是由于DOX藥物直接與CEM細(xì)胞接觸，但是DOX缺乏特異性，對(duì)正常人體細(xì)胞也會(huì)存在殺傷作用，所以在安全性方面Apt-LM/DOX納米藥物更好。我們分別選取了與Apt-LM/DOX納米藥物作用了4小時(shí)及24h的CEM細(xì)胞，觀察到Apt-LM/DOX能靶向進(jìn)入到CEM胞質(zhì)，并且發(fā)現(xiàn)與Apt-LM/DOX納米藥物作用了24h的CEM細(xì)胞產(chǎn)生了大量凋亡。

圖7 腫瘤組織熒光成像。

最后我們通過(guò)荷瘤小鼠尾靜脈注射Apt-LM/DOX納米藥物，通過(guò)觀察腫瘤組織內(nèi)藥物分布情況來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證Apt-LM/DOX納米藥物體內(nèi)靶向效果，結(jié)果在腫瘤組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)了DOX藥物的富集，證實(shí)了我們合成的靶向藥能在體內(nèi)靶向到腫瘤部位。在接下來(lái)的研究中，我們會(huì)進(jìn)一步評(píng)估Apt-LM/DOX納米藥物體內(nèi)的治療效果。

4 結(jié)論

Apt-LM/DOX納米藥物能夠有效靶向白血病細(xì)胞CEM，具有很好的開發(fā)應(yīng)用前景。