血清miR-150 檢測對冠心病患者PCI 術后發生不良心血管事件的預測價值

胡圣，薛金紅，張成，李美佳，申靜靜

天津市第五中心醫院，天津300450

《中國心血管病報告2018》報道，我國現有冠心病患者近1 100 萬例，城市、農村冠心病病死率分別為 113.46/10 萬、118.74/10 萬例［1］。經皮冠狀動脈介入治療（PCI）是目前臨床治療冠心病最主要的手段，通過開通罪犯血管使冠狀動脈缺血后重新獲得血液再灌注，挽救瀕死心肌，改善心臟功能［2］。但研究顯示，PCI 術后患者極易發生不同程度的主要心血管不良事件（MACE），嚴重影響治療效果，增加患者再住院率和病死率［3］。尋找有效手段輔助臨床早期預測冠心病患者PCI 術后發生MACE 的風險具有重要意義。研究顯示，微小RNA（miRNA）參與了心血管疾病的發病，其中miR-126、miR-133 等參與了冠心病發病過程，并與冠狀動脈狹窄密切相關［4-5］。miR-150 屬miRNA 家族成員，作為抑癌基因參與了非小細胞肺癌發病過程［6］。目前關于miR-150 在冠心病中作用的相關研究較少。本研究通過檢測冠心病患者血清miR-150水平，探討其對冠心病患者PCI術后發生MACE的預測價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇 2017 年 1 月—2020 年 1 月本院收治的冠心病患者153例，均行急診PCI術。納入標準：①符合《穩定性冠心病診斷與治療指南》［7］；②首次發作且發作至入院時間<72 h；③年齡18～75歲；④滿足急診PCI 手術指征，且無手術相關禁忌證；⑤納入研究前未接受抗凝藥物治療及抗血小板藥物治療；⑥PCI術后隨訪時間至少6個月。排除標準：①心臟瓣膜病、心肌病、風濕性心臟病、心力衰竭等可能影響本研究結果的心臟疾病；②妊娠期及哺乳期；③肝、腎功能障礙；④急、慢性炎癥反應性疾病；⑤風濕性關節炎等自身免疫性疾病；⑥惡性腫瘤；⑦精神疾病。根據冠心病患者PCI術后6個月內有無發生 MACE 將其分為 MACE 組（n=31）和非MACE 組（n=122）。并于同期隨機選取80 例年齡、性別與冠心病患者匹配的健康體檢者為對照組。本研究得到醫院倫理委員會批準，各組均簽署知情同意書。

1.2 血清miR-150 檢測 采集冠心病患者PCI 術前、對照組體檢當日空腹肘靜脈血5 mL，置于含EDTA 抗凝試管中室溫下靜置1 h，以3 000 r/min 轉速離心10 min，離心半徑12 cm，留取上清液置于-70 ℃冰箱中保存。采用實時熒光定量PCR 法。用德國凱杰公司提供的TRIzol Reagent 試劑盒提取血清中miR-150 的總RNA，用美國ABI 公司提供的Tapman MicroRNA RT 試劑盒反轉錄合成cDNA，miR-150 上游引物序列5'-TTCACCT ACAGCAC?GCTTGT-3'、miR-150 下游引物序列 5'-TTGGGATG?GAGGGAGTTTAC-3'；U6 為內參基因，上游引物序列5'-CTGCTTCGGCAGCACA-3'、下游引物序列5'-TGGTGTCGTGGAGTCG'-3'。構建 20 μL 反應體系：Tapman Master Mix 10 μL、Tapman miRNA assay Mix 1 μL、cDNA 1.5 μL、上下游引物各2 μL，無酶蒸餾水3.5 μL。反應條件：50 ℃預變性2 min，95 ℃預變性 10 min、95 ℃變性 15 s、60 ℃退火 1 min，40 個循環。采用2-△△CT法計算目的基因相對表達量。

1.3 資料收集 人口學資料：收集各組人口學資料，包括性別、年齡、BMI、既往史（高血壓史、糖尿病史、高血脂史）、血壓（收縮壓、舒張壓）；冠心病病情：梗死部位、疾病類型、病變嚴重程度等；實驗室指標：采用日立7600 全自動生化分析儀檢測FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C；采用超聲心動圖測定左室射血分數（LVEF）

1.4 隨訪 PCI 術后對冠心病患者進行定期隨訪，至少隨訪6 個月，方式包括門診就診、打電話，隨訪內容包括病情復發情況、MACE 發生情況，其中MACE 包括非致死性心肌梗死、再發心絞痛、支架內再狹窄、心力衰竭、心源性死亡等。

1.5 統計學方法 采用SAS9.4統計軟件。計量資料以±s表示，多組獨立樣本比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗；冠心病患者PCI 術后MACE 發生的影響因素采用多元Logistic 回歸分析；繪制受試者工作特征（ROC）曲線，并計算曲線下面積（AUC），評估血清miR-150 對冠心病患者PCI 術后發生MACE 的預測價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組臨床資料比較 MACE 組男20 例、女11例，年齡（61.23±5.57）歲，BMI（22.79±2.60）kg/m2，有高血壓史17 例、糖尿病史13 例、高血脂史19 例，收縮壓（133.22 ± 15.08）mmHg、舒張壓（82.56 ±10.24）mmHg，梗死部位：前壁梗死10例、下壁梗死7例、前間壁梗死11例、正后壁梗死3例，冠心病類型：不穩定型心絞痛12 例、心肌梗死19 例，病變嚴重程度：輕度病變9例、中度病變16例、重度病變6例；非MACE 組男 69 例、女 53 例，年齡（60.29 ± 6.34）歲，BMI（23.31 ± 2.46）kg/m2，有高血壓史43 例、糖尿病史 31 例、高血脂史 52 例，收縮壓（127.64 ± 15.58）mmHg、舒張壓（78.79 ± 11.31）mmHg，梗死部位：前壁梗死37 例、下壁梗死28 例、前間壁梗死35 例、正后壁梗死22例，冠心病類型：不穩定型心絞痛89例、心肌梗死33例，病變嚴重程度：輕度病變69例、中度病變39例、重度病變14例；對照組男49例、女31例，年齡（60.86 ± 5.90）歲，BMI（23.38 ± 2.07）kg/m2，有高血壓史28 例、糖尿病史20 例、高血脂史37 例，收縮壓（125.82 ± 16.67）mmHg、舒張壓（78.90 ±11.28）mmHg。三組性別、年齡、BMI、高血壓史、糖尿病史、高血脂史、收縮壓、舒張壓比較差異無統計學意義（P均>0.05）；MACE組、非MACE組梗死部位比較差異無統計學意義（P均>0.05）；MACE 組、非MACE 組冠心病類型、病變嚴重程度構成比比較差異有統計學意義（P均<0.05），與非MACE 組比較，MACE 組心肌梗死比例高，病變更嚴重。三組FPG、TG、HDL-C 比較，差異無統計學意義（P均>0.05）；三組TC、LDL-C、LVEF、miR-150 相對表達量比較差異有統計學意義（P<0.05）。與對照組比較，MACE組、非 MACE 組 TC、LDL-C 高，LVEF、miR-150 相對表達量低（P均<0.05）；與非MACE組比較，MACE組TC、LDL-C 高，LVEF、miR-150 相對表達量低（P均<0.05）。見表1。

表1 各組實驗室指標、LVEF及miR-150表達比較（±s）

表1 各組實驗室指標、LVEF及miR-150表達比較（±s）

注：與對照組比較，*P<0.05；與非MACE組比較，#P<0.05。

組別MACE組非MACE組對照組n 31 122 80 FPG（mmol/L）6.24±0.92 6.11±1.05 6.08±1.14 TC（mmol/L）4.65±1.13*#4.08±1.16*3.67±1.09 TG（mmol/L）1.75±0.82 1.62±0.89 1.70±0.75 HDL-C（mmol/L）0.87±0.29 0.93±0.25 0.85±0.29 LDL-C（mmol/L）2.94±0.51*#2.20±0.57*2.01±0.60 LVEF（%）49.33±10.12*#62.79±9.82*75.81±10.57 miR-150 0.27±0.09*#0.64±0.11*0.75±0.12

2.2 冠心病患者MACE 發生的影響因素 以冠心病患者PCI 術后6 個月內是否發生MACE 為因變量（發生=1，不發生=0），以2.1中有統計學意義的變量為自變量，采用逐步回歸法（α入=0.05，α出=0.10），構建多因素Logistic 回歸模型，結果顯示，心肌梗死、冠狀動脈中度病變、冠狀動脈重度病變、TC 升高、LDL-C 升高是冠心病患者PCI 術后MACE 發生的獨立 危 險 因 素（OR分 別 為 1.660、1.235、1.640、1.225、1.211，P均<0.05），LVEF升高、miR-150升高是冠心病患者PCI 術后MACE 發生的保護因素（OR分別為0.925、0.732，P均<0.05）。見表2。

表2 冠心病患者PCI術后發生MACE的影響因素分析

2.3 miR-150 對冠心病患者 PCI 術后 MACE 發生風險的預測價值 繪制ROC曲線評估血清miR-150對冠心病患者PCI 術后6 個月內MACE 發生風險的預測價值，結果顯示，miR-150 預測冠心病患者PCI 術后 MACE 發 生 的AUC為 0.882（95%CI：0.832～0.933，P=0.000），最佳截斷值為0.37，約登指數為0.71，此時的靈敏度、特異度分別為83.87%（26/31）、86.89%（106/122），正確率為86.27%（132/153）。

3 討論

2018 年美國心臟協會報告顯示，冠心病是心血管疾病患者死亡的首位病因［8］。PCI 是改善冠心病患者預后的重要手段，但研究表明，冠脈血管的平滑肌細胞重塑、缺血再灌注損傷等會增加PCI 術后MACE 發生風險，并進一步引發惡性心血管臨床結局或者遠期多臟器功能衰竭等，增加患者病死率［9］。早期預測冠心病患者PCI 術后MACE 發生風險，對制定溶栓、抗凝以及再次介入等針對性治療措施具有重要參考價值。心肌酶譜以及冠狀動脈介入造影檢查等是評估PCI 后MACE 發生風險的常見方法，但靈敏度較低［10］。尋找其他靈敏度、特異度高的生化指標輔助預測冠心病患者MACE發生風險有重要臨床意義。

miRNA 是進化過程中的內源性非編碼小片段RNA，具有高度保守性，通過轉錄、基因沉默等在細胞的增殖、分化、凋亡、修復以及新陳代謝過程中發揮調控作用［11］。研究證實，miRNA 對高溫、強酸、強堿等異常條件均不敏感，可在血液中穩定存在，并在多種疾病發生發展過程中存在差異性及特異性表達［12］。研究顯示，miRNA 異常表達參與了心血管疾病的發生發展［13］。劉靜等［14］發現，miR-140-3p、miR-142-5p 在冠心病患者中表達異常，并與心血管結局及死亡密切相關。王娓娓等［15］的研究顯示，心肌缺血再灌注損傷后的心肌細胞中miR-140 低表達，抗凋亡治療后其表達上調，由此證實miR-140 可作為評估心臟疾病治療效果的指標。徐測梁等［16］研究表明，miR-142-5p 參與了急性冠脈綜合征的心肌炎癥和心肌損傷過程，可作為臨床診斷該疾病的重要指標。GAO 等［17］研究發現，miR-126 通過參與血管生成、內皮細胞損傷等過程而引發急性心血管病變。miR-150 是位于人體第19 號染色體上的RNA 家族單鏈小分子，長度為22 個核苷酸，在淋巴結和脾臟中特異性表達，參與了肝細胞分化、免疫系統發生等生理過程。研究顯示，miR-150 異常表達參與調控乳腺癌、肺癌等發病過程，并與臨床病理特征密切相關，可作為反映惡性腫瘤進展及評估病情嚴重性的重要指標［18］。ZHANG 等［19］研究表明，miR-150 表達下調與心肌纖維化和心室重構密切相關。關于miR-150 與冠心病患者PCI術后發生MACE 的關系，目前研究尚不多見。

本研究發現，冠心病患者TC、LDL-C 水平升高，LVEF、miR-150水平降低，并且MACE組上述指標異常程度較非MCAE 組更明顯。同時，MACE 患者心肌梗死比例高于非MACE 組，冠脈病變程度較MACE 組嚴重。上述結果提示MACE 患者存在不同程度脂代謝紊亂及心功能損傷。采用Logistic 回歸校正可能的混雜因素后，心肌梗死、冠狀動脈中度和重度病變、TC升高、LDL-C升高是冠心病患者PCI術后MACE發生的獨立危險因素。其中心肌梗死患者MACE 發生風險是不穩定型心絞痛患者的1.660倍。心肌梗死患者存在較為嚴重的心肌細胞壞死，并且冠狀動脈血管缺血程度較為顯著，因而PCI 術后患者更易發生MACE。冠狀動脈病變程度越嚴重，患者發生MACE的風險也越高，較輕度病變患者而言，中度和重度患者OR分別為1.235、1.640。提示冠脈病變越嚴重冠心病患者動脈粥樣硬化程度越高，斑塊破裂風險大，進一步加重心肌缺血。冠心病患者TC升高和LDL-C升高提示患者存在血脂異常，而血脂改變又可導致血管粥樣硬化，形成斑塊，并進一步破裂形成血栓，堵塞血管，誘發心力衰竭等MACE。本研究中，TC、LDL-C 每升高 1 mmol/L，MACE 發生風險分別增加1.225、1.211 倍。因此，臨床尤其需注意血脂升高的冠心病患者。這類高危人群的血脂水平需控制在合理范圍，以降低MACE的發生率，改善患者預后。此外，結果還顯示，LVEF升高和 miR-150 升高是 MACE 保護因素，LVEF 升高提示心功能得到改善，患者病情恢復較好。miR-150每升高0.1，MACE 發生風險降低26.8%，可能是因為miR-150 表達下調可抑制抑炎因子表達，增強促炎因子表達，激活炎癥反應，導致促炎細胞因子水平升高，加重患者病情。ROC 曲線分析結果表明，miR-150 能預測冠心病患者發生MACE 的風險，從而指導臨床早期發現高危人群，盡早采取針對性干預措施。

綜上所述，血清miR-150 在冠心病患者中表達降低，可作為PCI術后預測MACE發生的指標之一。