B族鏈球菌檢測在圍生期孕婦感染診斷中的應用價值分析

李文芳 張 志 陳柳玲

（1 東莞市黃江鎮社區衛生服務中心，廣東 東莞 523750；2 東莞市黃江醫院，廣東 東莞 523750）

B族鏈球菌（group B streptococcus，GBS）是臨床常見的革蘭陽性球菌，屬于β溶血鏈球菌，因為最早從患乳腺炎的牛中分離，也稱為無乳鏈球菌[1]。后續的研究發現，在孕產婦和新生兒體內均可分離到GBS，GBS是導致新生兒和孕婦發生早發和晚發型感染的重要原因。有數據表明，GBS在正常女性中帶菌率為15%～35%，而在某些歐美國家，孕婦感染GBS的比例接近1/2。由于對其篩查的不徹底，以及濫用抗生素等原因，感染GBS的孕婦分娩出的新生兒50%可由于感染而死亡[2-3]。《孕前和孕期保健指南（2018）》中已經將GBS作為圍生期孕婦的備查項目。為了分析B組鏈球菌在檢測圍生期孕婦感染診斷中的應用價值，本社區衛生服務中心與東莞市黃江醫院合作進行了本次研究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選擇2019年5月至2019年12月至東莞市黃江醫院進行產前檢查的待產孕婦40例作為研究對象。待產孕婦年齡22～45歲，平均年齡（28.33±4.18）歲，孕周35～37周，平均（37.22±2.60）周。其中初產婦32例，經產婦8例。本次研究已上報社區衛生服務中心倫理委員會研究并獲得批準。納入標準[4]：①孕周＞35周。②采集樣本前1周內未應用抗生素類藥物治療。③采樣前沒有進行陰道藥膏以及消毒液處理，24 h內沒有性生活。④單胎孕婦。⑤對本次研究知情同意。排除標準[5]：①患有慢性腎炎、高血壓、糖尿病史、急性感染等內、外科合并癥及產科并發癥患者。②合并心、肝、肺等臟器功能不全的患者。③存在胎位異常、雙胎、宮頸功能不全、巨大兒等能導致異常分娩情況的患者。④生殖器官嚴重畸形的患者。⑤有習慣性流產病史的患者。⑥有滴蟲、霉菌、淋球菌等生殖道感染的患者。⑦未在我院分娩，或者病例資料不完善的患者。⑧不同意參與本次研究的患者。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 由婦產科醫師對患者的分泌物進行采集，先擦去生殖道內過多的分泌物，將無菌滌綸拭子放置于生殖道1/3處，沿生殖道壁輕輕旋轉取得分泌物；再小心將該拭子插入肛門，在肛門括約肌以上2～5 cm處，沿腸壁輕輕旋轉取得標本，使該拭子上同時取得生殖道分泌物和直腸分泌物。將該采集好分泌物的拭子放回無菌拭子套管中，密閉送檢。標本應盡快用于檢測，室溫下保存不應超過1 d，在4～8 ℃保存不超過6 d。

1.2.2 QF-PCR檢測 PCR試劑盒購自普泰生物科學（中國）有限公司，7300 PLUS型實時熒光定量核酸擴增儀購自美國ABI公司。在無菌滌綸拭子管中加入1 mL清洗液，用震蕩器高速震蕩2 min制成標本懸浮液，取出全部樣本放入1.5 mL離心管中，13 000 r/min離心5 min棄去上清，加入1 mL清洗液震蕩重懸，13 000 r/min離心5 min棄去上清。加入50 μL清洗液重懸。樣品管中加入1管提取固形物，用強力震蕩器高速漩渦震蕩5 min。將待檢品、陰性、陽性對照瞬時離心后，每管加入10 μL內參照，95 ℃干浴2 min，立即冰浴2～5 min后13 000 r/min離心1 min，取上清液用于PCR擴增。使用普泰生物科學（中國）有限公司提供的DNA試劑盒提取DNA。本試劑盒檢測下限1.0×103copies/mL；線性范圍1.0×103～1.0×108copies/mL。

1.2.3 細菌培養 將每份標本接種到5%的羊血瓊脂平板培養基，置5% CO2中培養約24 h。若血平板上出現灰白色凸起、光滑、濕潤、透光的菌落，將其挑取做涂片進行革蘭染色鏡檢。鏡下形態：革蘭陽性球菌呈鏈狀或短鏈狀排列；生化反應中觸酶試驗為陰性，然后利用生物梅里埃VITEK2 Compact全自動細菌鑒定儀最終篩選出GBS。

1.2.4 藥物敏感試驗 藥物敏感試驗采用K-B紙片擴散法進行。以抑菌圈的直徑作為判斷藥物敏感性標準。具體判斷方法參考《全國臨床檢驗操作規程》實施。

1.2.5 分析指標 以經典的分離培養法結果為標準，比較培養法和實時PCR法檢測的靈敏度和特異度差異。根據GBS陰性和GBS陽性將產婦分為兩組，比較兩組產婦的產后并發癥和新生兒并發癥的發生率，觀察GBS陽性產婦對常用抗生素的藥敏結果。

1.3 統計學處理 用SPSS21.0統計學數據處理軟件處理研究中所有相關數據，計量資料用（±s）表示，并采用t檢驗，計數資料采用（n，%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同檢驗方法診斷效能比較 以傳統的分離培養法為標準，PCR檢查GBS靈敏度和特異度為100.00%、93.10%，與培養法81.82%、96.56%相比不具有統計學差異（P＞0.05）。見表1。

2.2 兩組產婦并發癥比較 GBS陽性組產婦的早產、產后出血、胎膜早破、宮內感染和產褥感染率明顯高于GBS陰性組，且具有統計學差異（P＜0.05）。見表2。

表1 兩組患者不同檢驗方法診斷效能比較（±s）

表1 兩組患者不同檢驗方法診斷效能比較（±s）

表2 兩組產婦并發癥比較[n（%）]

2.3 兩組新生兒并發癥比較 GBS陽性組新生兒肺炎、新生兒呼吸窘迫綜合征發生率明顯高于GBS陰性組，且具有統計學差異（P＜0.05），但兩組新生兒黃疸發病率無明顯差異（P＞0.05）。見表3。

表3 兩組新生兒并發癥比較[n（%）]

2.4 GBS藥敏結果 11例GBS陽性患者對青霉素G、頭孢呋辛、頭孢吡肟的敏感性最高，均為100%，對慶大霉素耐藥率最高，為54.55%，其次為氯霉素、克林霉素，分別為45.45%、36.36%。見表4。

表4 GBS藥敏結果分析[n=11，n（%）]

3 討論

GBS也稱為無乳鏈球菌，最早引起重視是因為其能夠引起牛乳房炎，對畜牧業造成研究影響，因此在畜醫界研究較多[6-7]。但是在后續的研究中發現，GBS也可使人類感染，其中新生兒是易感人群，進而導致新生兒敗血癥、新生兒腦膜炎、新生兒肺炎的發生，而且能夠累及神經系統，引起相應的后遺癥[8-9]。由于該菌已被證實不僅導致牛乳房炎，而且其細胞壁中的多糖物質屬于抗原構造中的B族，因此被命名為GBS[10]。GBS是革蘭陽性球菌，具有菌落較小、見β溶血環、觸酶試驗陰性、CAMP試驗陽性的特征。

GBS首次于1938年被報道，其導致3例產婦因心內膜炎而發生死亡。后續的研究證實，該菌對產婦和新生兒均會造成嚴重的影響[11-12]。正常狀態下GBS寄居于陰道和直腸，作為條件致病菌，正常健康人群感染后并不致病，因此產婦即使感染也沒有特異性癥狀，未被重視[13-14]。但是分娩過程中，40%～70%帶菌的產婦會將其傳遞給新生兒，這部分新生兒中1%～3%會發生早期侵入性感染，而出現感染的新生兒中有5%會死亡。因此GBS是威脅新生兒生命安全的重要因素。但是在不同文獻中對于圍生期孕婦的GBS感染率的報道有較大差異。國外有關調查顯示，孕婦的陰道帶菌率為3.0%～29.1%，而我國北京的一項研究顯示為8.0%～15.0%。另一項研究數據顯示，新生兒感染GBS發病率美國為61%，英國為28%，芬蘭為30%。新生兒感染GBS的病死率瑞典為5.6%，芬蘭為13%，英國為22%，贊比亞為42%，美國33%?？紤]導致這一差異的原因與區域因素、生活習慣因素以及檢測因素均密切相關。為了提高臨床對生殖感染檢測的準確性，2002年美國疾控預防中心規定妊娠35～37周為GBS檢測的時間。

傳統檢查GBS是通過分離培養的方法進行檢測，雖然檢測準確率較高，但是耗時長，成本高，臨床醫師無法在短時間內得到結果。PCR是近年來應用于臨床檢測GBS的方法，能夠讓醫師更快的得到檢測結果。以傳統的分離培養法為標準，PCR檢查GBS靈敏度和特異度為100.00%、93.10%，與培養法81.82%、96.56%相比不具有統計學差異（P＞0.05），說明PCR檢測GBS具有良好的診斷效能。

從本次研究中看，GBS陽性組產婦的早產、產后出血、胎膜早破、宮內感染和產褥感染率明顯高于對照組，說明GBS是導致上述情況發生的重要因素。GBS對絨毛膜具有較強的吸附能力和穿透能力，感染2 h后就能夠吸附母體組織，然后侵入絨毛膜。在炎性細胞的吞噬作用下，以及細菌產生的蛋白水解酶的直接侵襲作用下，降低了胎膜局部的張力，增加了胎膜早破產婦的發生率。一項針對2 745例產婦的研究顯示，在尿中感染B族鏈球菌的產婦中35%發生了胎膜早破。該研究中GBS陽性組產婦22.22%發生胎膜早破，低于35%，考慮與樣本量以及醫療條件等因素有關。此外，有研究認為，感染B族鏈球菌的孕婦中21%會發生絨毛膜羊膜炎以及產后子宮內膜炎，同時也是造成產褥感染的主要致病菌。而本次研究中GBS陽性組產婦宮內感染發生率為36.36%，產褥感染發生率為27.27%，均高于21%水平。考慮受到本次研究中樣本量較小的制約結果有所差異。B族鏈球菌感染導致早產的原因可能與感染引起磷脂酶A、前列腺素以及IL-1等細胞因子的釋放，刺激子宮，而發生早產。感染B族鏈球菌后會損傷子宮內膜，產婦宮縮乏力，則增加了產后出血的發病率。

B族鏈球菌對新生兒的也有明顯影響。B族鏈球菌的主要傳播途徑是分娩時的垂直傳播，新生兒可以通過出生吸入的被感染的羊水或者通過產道時與細菌的接觸而被傳播，而且研究發現剖宮產不能避免新生兒被感染[15-16]。在早期感染，新生兒以敗血癥為主要臨床表現，美國新哈芬地區10年調查研究發現，新生兒敗血癥發病率為2.7‰，其中50%是由B族鏈球菌感染所導致。其納入研究的300例產婦無新生兒敗血癥的發生，但是新生兒肺炎GBS陽性組發病率為8.64%，高于陰性組1.83%，而新生兒呼吸窘迫綜合征GBS陽性組發生率為13.58%，高于陰性組3.20%。

我國長期以來對B族鏈球菌的感染情況重視不夠，但是近年來有越來越多的文獻關注B族鏈球菌對圍生期孕婦的影響。何青青[17]對長沙地區2 183例圍生期孕婦檢查中發現帶菌率為7.4%。此外，相關研究發現因肺炎死亡新生兒中，65%患兒的肺部標本中檢出B族鏈球菌，說明GBS是導致新生兒肺炎患兒死亡的首要致病菌。此外，由于國內抗生素濫用情況比較嚴重，對圍生期GBS篩檢方面幾乎空白，因此我國近年來出臺政策，加大了B族鏈球菌篩查力度。

從藥敏情況來看，11例GBS陽性患者對青霉素G、頭孢呋辛、頭孢吡肟的敏感性最高，均為100%，對慶大霉素耐藥率最高，為54.55%，其次為氯霉素、克林霉素，分別為45.45%、36.36%。在頭孢類藥物中，頭孢西丁出現了1例耐藥，需要引起重視。抗生素濫用等導致人群整體耐藥性增加以及細菌菌株變異等。上述結果說明青霉素仍然能夠作為預防GBS感染和治療的首選藥物。但是我國不同地區對圍生期孕婦B組鏈球菌的藥敏情況研究結果有所不同，有報道顯示GBS對青霉素G的中介率為19.7%，說明我國也出現了對青霉素敏感性下降的菌株，這一情況值得臨床醫師的注意。因此對于GBS陽性的圍生期孕婦應該進行藥敏試驗，有針對性的使用抗生素，進而減少藥物對產婦的影響[18-20]。

綜上所述，GBS檢測在圍生期孕婦感染診斷中具有重要的應用價值，對于預防產婦和新生兒并發癥的發生，選擇敏感性抗生素的應用具有重要的意義。應該注意對圍生期孕婦進行GBS感染的常規檢測，對于合并感染的孕婦應該給予及時干預。